精子性别化对奶牛性别控制的试验

本试验获得牛犊雌性控制率达８１．８％（Ｔａｂｌｅ１）。十头母牛产犊十一头：二雄,九雌,其中一头产异性双犊。于１．０８－１．１０蔗糖密度梯度之间,可以清楚地观察到Ｙ精子能被荧光素染色（Ｔａｂｌｅ２）;Ｈ－Ｙ抗血清处理能改变Ｙ精子的荧光染色,说明对Ｙ精子有抑制作用（Ｔａｂｌｅ３）．制备有一定纯度和效价的Ｈ－Ｙ抗血清ＩｇＧ用以性别化处理精子;通过人工受精技术、使母牛得到受处理的精子而正常受胎．本试验结果对奶牛性别控制的前景是美好的。     

应用生殖免疫方法制作性别化冷冻精液对奶牛性别控制的研究

本实验在种公牛站精液生产过程中应用生殖免疫技术方法 ,制作性别化冷冻精液 ,结合人工授精技术进行奶牛性别控制的研究实验。根据精子DNA含量存在的差异 ,利用荧光染料与精子DNA结合 ,通过蔗糖溶液密度梯度离心法 ,分离出和鉴别出牛精液中的X与Y精子作为抗原。经与小鼠免疫后 ,制成H Y抗血清IgG ,再经酶联免疫吸附法 (ELISA)析测表明 ,获得了具有一定纯度和工作效价的阳性抗Y精子的H Y抗血清IgG ,H Y抗血清对性别化精液冷冻前 ,解冻后活力的影响与对照组无显著差异。配种受胎试验结果表明 ,性别化冷冻精液在获得与正常冷冻精液相似的情期受胎率的同时 ,对后代性别比率有显著影响 ,奶牛产母犊率可达 60 7% ,比自然产母犊性比率理论值提高 1 0 7个百分点 (P <0 0 5 )。     

间接免疫荧光鉴别奶牛胚胎性别的研究

本实验用H—Y抗体的间接免疫荧光方法对奶牛6—7日龄胚胎进行性别鉴别。用数排卵法获得的胚胎,共选37枚在含H—Y抗血清的M2培养液中温育30min,用M2培养液清洗后,在含FITC—荧光标记的羊抗鼠IgG二抗的M2中温育30min,经洗后的胚胎在Nikon倒置荧光显微镜下鉴别有无荧光,结果21枚胚胎有特异免疫荧光,判作雄性胚胎;16枚无特异免疫荧光,判作雌性胚胎,分别占57％和43％。这与自然出生公母犊各约50％和性比率无显著差别(P>0.25),判定为雄性的5枚胚胎移植给3头受体奶牛(每头移植1或2枚)、3枚判定为雌性胚胎移植给2头受体奶牛一头移植一枚,枚、另一头移植2枚)移植后两个月时检查有3头受体怀孕,其中,一头移植有荧光胚胎的受体返植无荧光胚胎的2头受体各产一母犊(体重皆41kg)。     

牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定。并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析,两种方法的判定结果相吻合,在本实验条件下,利用减少PCR体系中细胞的数量来确定最低的模板DNA的检出量,2－细胞不能检测,4－细胞检出率为62．5％,8－细胞为90％,16－细胞以上为100％。对23牧经过性别鉴定后的胚胎进行移植,获得5头纯种试管牛,产犊率为21．7％,与正常的胚胎移植 结果27．3％（3／11）无显著差异,预测性比为100％符合。     

两温度梯度多重PCR鉴别牛早期胚胎性别的技术研究

稳定、可靠和快速的牛胚胎性别鉴定方法在生产应用中具有重要意义。通过两温度梯度PCR方法对牛基因组、克隆胚胎、胚胎样品进行性别鉴别实验研究,建立了稳定、简便、快速的牛早期胚胎性别鉴别两温度梯度PCR方法,鉴定时间仅为57分钟。采用两温度梯度PCR方法对30枚奶牛胚胎进行了早期性别鉴别,并将鉴别的15枚胚胎（11枚为雌性,4枚为雄性）移植到同期处理的15头受体母牛体内。60天后妊娠检查,有7个受体成功受孕,5头受体怀孕晚期流产,流产犊牛全部为母犊。结果产下1公1母两头犊牛,流产个体与出生个体的性别与PCR鉴别结果完全相符。      

我国动物学家取得试管水牛性别控制成果

2月13日上午11点20分,在广西水牛研究所的一头杂交母水牛,通过分离XY精子性别控制产下了雌性水牛双犊。据悉,这在世界尚属首例。据介绍,这两头性控试管水牛犊体重均为29kg。“姊妹花”出生经历了复杂、严密的科学设计:首先,用流式细胞仪分离出良种摩拉水牛精液的X精子和Y精子;然后, 将X精子与本地母牛的卵母细胞进行体外受精生产性别控制的胚胎;最后将3枚雌性胚胎移植给一头受体母牛,经10月怀胎后生产出来。该项由国家自然科学基金、广西壮族自治区人民政府主席基金、自治区科技厅科技攻关项目资金联合资助的水牛性别控制研究项目由卢克焕教授主持,广西水牛研究所和广西畜禽品种改良站共同参与完成。该项成果的关键技术是分离XY 精子技术。这意味着水牛生公生母完全可能人为控制。     

两温度梯度多重PCR鉴别牛早期胚胎性别的技术

稳定、可靠和快速的牛胚胎性别鉴定方法在生产应用中具有重要意义.通过两温度梯度PCR方法对牛基因组、克隆胚胎、胚胎样品进行性别鉴别实验研究,建立了稳定、简便、快速的牛早期胚胎性别鉴别两温度梯度PCR方法,鉴定时间仅为57分钟.采用两温度梯度PCR方法对30枚奶牛胚胎进行了早期性别鉴别,并将鉴别的15枚胚胎(11枚为雌性,4枚为雄性)移植到同期处理的15头受体母牛体内.60天后妊娠检查,有7个受体成功受孕,5头受体怀孕晚期流产,流产犊牛全部为母犊.结果产下1公1母两头犊牛,流产个体与出生个体的性别与PCR鉴别结果完全相符.     

第21届国际生物学奥林匹克竞赛试题理论B-3·遗传-进化-生物系统学

1果蝇（Drosophila melanogaster）具有一个XX（雌）-XY（雄）类型的性别决定系统。Y染色体在人类决定了男性．而果蝇属昆虫的性别决定则依赖于个体中X染色体数目与所含常染色体单倍体套数的比率。     

控制动物性别的原理及方法

一、性别控制的基本原理控制动物性别的原理主要是基于动物雌雄生殖细胞,特别是动物精子的差异而讲行的。高等动物的X 型精子与 Y 型精子不论在形态结构、重量密度、表面膜电荷的电量分布及电性,还是精子的抗原免疫性、运动速度和活力以及耐酸碱性等方面都存在较大的差异。(一)精子形态结构的差异哺乳动物分裂中期细胞的性染色体,一般 X 比 Y 要大。如牛的 X 染色体表面积为7.85微米~2,Y 染色体为3.47微米~2,性染色体大小的差异造成了精子形态的差异。X 精子头部大而且比较圆,体和核也较大;Y 精子头部小而且比较尖,体和核比较小。此外,精子的大小还受     

奶牛Y精子膜蛋白的提取与分析

本实验旨在对奶牛Y精子膜蛋白的提取与SDS-PAGE分析,是分离纯化奶牛Y精子特异膜蛋白基础与关键。本实验采用超声波破碎法将精子膜与精子分离,分离后的精子膜粗品采用蔗糖密度梯度离心法进行纯化。纯化的精子膜经膜蛋白提取液(去污剂)提取,透析浓缩。经SDS-PAGE银盐染色,结果表明该方法成功地提取到膜蛋白,得到膜蛋白电泳图谱。BIO-RAD分析得知Y精子膜蛋白种类至少有10种,分子量范围为7.94kD～166.65kD,其中尤以15kD的蛋白含量最多。奶牛Y精子膜蛋白的提取与鉴定为深入研究Y精子特异膜蛋白在受精过程中的作用,从而获得一种更经济、更安全、更有效的奶牛性别控制方法提供了实验依据。     

我国生物反应器技术取得突破进展

据科学技术部网2006年7月25日报道,在国家“863”计划支持下,我国生物反应器技术取得突破进展。 （1）在国际上首次成功克隆水牛。广西大学经过3年的刻苦攻关,首次在国际上成功克隆了水牛,这是一个全新物种的克隆成功,对水牛的高效繁殖和转基因产业化有巨大的影响,研究结果有望在Nature发表相关论文。试验一共移植受体母牛18头,妊娠2头,于2004年11月19日经剖腹产获得1头世界首例体细胞克隆雌性水牛,另一头于2005年3月产犊。     

家蚕胚后发育中过氧化氢的代谢及其意义

活性氧参与生物体内复杂的代谢过程。本文对它在家蚕个体发育过程中的生物学功能进行了初步探讨。取1岁龄家蚕蛹分别注射H2O2、脱皮激素（Ecdn)、保幼激素（JH）和还原型谷胱苷肽（GSH）,培养,定期取样测定家蚕体内H2O2含量。对家蚕整个幼虫期（Fig.1),尤其是大眠期（Fig.2)、化蛹期（Table1）、蛹期（Fig.3-a,b,c)以及成虫期（Fig.4,Table2)的研究结果表明,家蚕体内H2O2代谢具有如下特点：（1）入眠、化蛹、化蛾和死亡前H2O2含量都显著下降;（2）幼虫期1－3龄H2O2含量逐步下降,4－5龄H2O2含量回升,蛹期和成虫期H2O2含量与4－5龄接近;（3）每个龄期的中期H2O2含量最高;（4）CAT活性与H2O2含量呈负相关变化,前者迟于后者;另外,CAT活性远远大于SOD活性;活性与H2O2含量呈负相关变化,前者迟于后者;另外,CAT活性远远大于SOD活性;（5）Ecdn、GSH处理可以降低家蚕蛹期H2O2含量,并使其提前下降,JH、H2O2处理含量下降,并相应地提早推迟化蛾;（6）成虫期雄蛾H2O2含量、SOD和CAT活性都显著高于同时期雌。家蚕体内H2O2含量的变化与其发育密切相关。H2O2含量下降是变态的信号;家蚕成虫期H2O2在性别上的显著差异是两者在寿命上存在差异的生理机制之一。     

流式细胞仪原理及其在奶牛性别控制上的应用

流式细胞仪分离得到的定性奶牛精子,借助人工授精技术或其他相关技术已经生产出许多预知性别的后代奶牛。流式细胞仪分离精子的原理是基于携带有X或Y性染色体精子的DNA含量不同。高性能的流式细胞仪可以达到每小时分离1.5～2×108个精子,并且准确率可达到90%。该项技术的应用使得奶牛的人工授精和低温保存技术更为便利,并且该项技术也可以用于其他养殖动物X、Y精子的分离。     

哺乳动物精子分离方法的研究进展

分离X、Y精子,用于人工授精或体外受精,是目前实现哺乳动物性别控制的最有效手段。本文对哺乳动物精子分离及分离精子纯度评估方法的研究历史及现状作一回顾和总结。     

云南省奶牛胚胎移植试验

实验用12头黑白花奶牛（3-9岁）,PGF[2α]作同步发情处理后,周期第10-12天,总剂量36 mg的FSH-P按递减方式每日肌肉注射2次,间隔12小时,共注射4天,在第3天加注PGF[2α]35 mg,进行超数排卵处理。12头供体牛共得胚135枚,可用胚数118枚,为总胚数的87.47%。平均每头得胚11.25枚。胚胎分别移植给20头同步发情处理的黑白花奶牛和20头黄牛受体（有3头为自然发情）,每头移植1枚胚胎。结果,奶牛受孕率为35%（受孕7头,产犊7头）;黄牛受孕率为40%（受孕8头,流产2头,产犊6头）。奶牛和黄牛总受孕率为37.5%。     

试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定

奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期,在显微操作下,吸取4～6个胚胎细胞,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊,移植后妊娠率分别为37．5％（牛,3/8）和61．4％（羊,27/44）。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。 Abstract: The oocytes of bovines and goats were subjected to in vitro maturation,in vitro fertilization(IVF)and in vitro development upto morula stage．4～6 embryonic cells were aspirated with micro-manipulating and the embryo sexes were identified by detecting SRY gene with nested PCR procedure．A total of 27 transgenic IVF bovine and 207 transgenic IVF goat embryos were performed SRY gene detection．10 bovine and 124 goat sexed embryos were selected to be transferred into 8 bovine and 44 goat recipients,respectively,leading to the pregnant rates of 37．5％( in bovine,3/8)and 61．4％(in goat,27/44)．In the end,1 cattle and 14 goatlets were born at term but 2 fetal bovine and 2 fetal goats were miscarried．Their sexes were fully in accordance with the embryonic sex predetermination．     

大额牛产犊行为观察

采用直接观察法对大额牛(Bos frontalis)的产前离群与产后带犊归群、分娩等产犊行为进行了观察。结果表明,(1)野外观察17头临产母牛中,76.47%(13头)的个体在产前(11.23±7.14)d离开社群独行觅食,寻找分娩场所;分娩地点多选择在靠近溪河、地势较高、食物丰富、光照好、地面相对平坦的草地、林边或林中。母牛野外产犊后带犊归群的时间为产后(5.57±2.64)d。(2)在设围栏的人工草地上放牧条件下对6头母牛分娩行为观察表明,产前24～12 h母牛的警觉巡视行为明显增多;产前12～5h表现为烦燥不安和频繁爬跨;产前3～1 h领地行为明显,对分娩地点4～6 m2内长势较高的牧草等进行清理,为新生犊牛行动清除障碍;分娩时间为6:00～18:00时,其中在6:00～7:00时分娩的占66.67%(4/6);母牛从卧地进入分娩至犊牛产出期间起卧(7.00±6.00)次,从卧地到犊牛完全产出需(25.00±5.00)min,胎衣排出的时间为产后(5.64±1.80)h;犊牛(n=6,♂1+♀5)初生体重为(16.46±2.56)kg,母牛无难产现象;母牛对犊牛能及时舔饰,定时授乳和用心守护。犊牛从产出至第一次站稳需(52.70±29.69)min,第一次站稳到吮吸初乳需(38.7±29.14)min,第一次吃初乳到向周边活动需(61.33±1.53)min。     

麦秆蹄盖蕨（Athyrium fallaciosum）配子体的发育规律及播种密度对配子体性别分化的影响

在组织培养条件下,对麦秆蹄盖蕨（Athyrium fallaciosum）配子体发育的连续过程进行了详细观察。结果表明:麦秆蹄盖蕨孢子为四面体型; 孢子萌发为书带蕨型（Vittaria-type）;原叶体发育为铁线蕨型（Adiantum-type）,成熟原叶体为对称的心形;精子器近圆球形,成熟颈卵器细长,常向原叶体基部倾斜或弯曲。常规播种条件下,发现麦秆蹄盖蕨配子体有雌配子体、雄配子体、雌雄同体配子体和无性配子体类型。配子体的性别随密度不同而呈现一定的变化趋势,雄配子体随密度增大呈上升趋势;雌配子体随密度增大先上升后下降;雌雄同体配子体和无性配子体随密度变化不大。雌配子体和雌雄同体配子体具颈卵器数目一般为10～15个;精子器数目随密度的增大逐渐减少,雄配子体中具有约50个精子器,雌雄同体配子体具有约20个精子器。     

流式细胞仪分离精子法的研究进展

以X精子和Y精子的DNA含量差别为基础的流式细胞仪分离精子技术是有效的哺乳动物性别控制方法。目前,流式细胞仪分离精子的速度与上世纪90年代初期相比已提高了30多倍,以3000个/秒的常规速度分离X精子或Y精子的准确率可达到85%～90%。迄今,用分离精子人工授精已产下了数万头的动物后代,而分离人的精子也开始应用到了避免X染色体连锁遗传疾病的生殖医学工程中。     

间接免疫荧光法鉴别小鼠早期胚胎性别的研究

以间接免疫荧光法检测昆明系小鼠早期胚胎雄性特异性H—Y抗原的表达。结果表明:54%的胚胎为H—Y阳性(雄性);46%为H—Y阴性(雌性)。经与昆明系小鼠的自然性比率(♂:52%;♀:48%)比较,两者无显著性差异。 经细胞遗传学方法确证,以免疫荧光法鉴别的胚胎性别,雄性的鉴别准确率为75.50%;雌性为82.97%。 本文还就影响鉴别准确率的若干因素以及本方法在生产中的应用前景等问题进行了分析讨论。