乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及发展前景

人类腺病毒基因组Ｅ１区,Ｅ３区及介于Ｅ４区和右侧端插入性末端重复之间的区段存在插入位点,可供插入乙型肝炎病毒保护生免疫原基因,构建重组载体疫苗,本文就Ａｄ基因组分区段阐述了各类ＨＢＶ重组Ａｄ表达戴本构建的一般原则,并指出了辅助细胞依赖性缺陷型Ａｄ载体用作非复制性Ａｄ载体活疫苗的潜力及非缺陷型Ａｄ双表达载体用作复制性Ａｄ载体活疫苗的前景。     

基因治疗的新载体——腺联病毒

基因治疗将一种全新的概念引入医学界，给现有条件尚难治愈的疾病患者带来一线希望。基因治疗主要是利用病毒介导的基因转移，腺联病毒ＡＡＶ载体，由于其得天独厚的特点，正广泛地用于基因治疗研究。文中简单地介绍了ＡＡＶ的生物学特点、载体结构及其在基因治疗研究中的优越性。     

腺病毒载体在生物治疗中的应用

腺病毒载体是目前重要的基因转移载体之一。腺病毒可作为真核基因表达载体,可制成灭活、重组或抗癌疫苗用于预防呼吸道疾病、癌症和肝炎等传染病。在癌症的基因治疗方面,Ａｄ 载体可运载肿瘤抑制基因,自身基因编码蛋白能诱导细胞调亡,可作为前药物感染细胞,还能利用Ａｄ 的一些特殊复制子,达到治疗肿瘤的目的     

人类腺病毒载体疫苗及其免疫研究进展与展望

复制性和非复制性重组人类腺病毒（Ａｄ）活载体口服疫苗的开发使用是十多年来疫苗研究领域的一项重大突破。目前国际上倾向于以Ａｄ为表达载体发展多价重组口服活疫苗,尤其在艾滋病、乙型肝炎、狂犬病、单纯疮疹病毒疫苗研制上成效显著,共表达ＨＢｃＡｇ／ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ或共表达ＨＩＶ-１ｒｅｖ和ｇａｇ多肽的重组Ａｄ７活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果,共表达狂犬病毒糖蛋白、核蛋白及微小磷蛋白的重组Ａｄ活载体口服疫苗应及时研制,安全有效的重组Ａｄ载体疫苗乃至全价、多型、多联疫苗必将大量推出并成功地得到临床应用。非复制性重组Ａｄ活载体在疫苗制备及某因防治上具有很大的潜在应用价值,应当深入研究。     

胆固醇逆转运相关蛋白基因在骨骼肌的表达

构建载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏＡＩ）、载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）和卵磷脂胆固醇酰基转移酶（ＬＣＡＴ）的病毒或非病毒载体,分别转染离体成肌细胞或直接注入小鼠骨骼肌,观察其表达程序及分泌人血等情况,探讨借用骨骼肌异源表达这些在胆固醇逆转运中起关键作用的重要候选基因,进而发展一种简易安全基因治疗方法的可能性。结果显示,质粒表达载体ｐＣＭＶａｐｏＥ３和重组腺病毒载体Ａｄ－ＲＳＶ－ａｐｏＡＩ在原代培养小鼠成肌细胞和成     

脾伴随病毒2型作为基因治疗载体研究的进展

应用腺伴随病毒（ＡＡＶ）作基因治疗载体的研究取得了很大进展。与其他病毒载体比较,ＡＡＶ载体具有不致病,在宿主染色体上有较特异的整合位点,宿主范围广泛,可感染非分裂细胞,无致癌性等优点,随着对重组病毒载体构建,载体在染色体上整合机制,外源基因表达调控以及该病毒安全性的深入研究,可望作为一种较为理想的病毒载体用于基因治疗。     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

腺相关病毒载体与中枢神经系统的基因治疗

本文对ＡＡＶ的分子生物学结构,重组和其对细胞的整合及ｒＡＡＶ载体在基因治疗中的作用,尤其是ｒＡＡ载体在中枢神经系统疾病基因方面的最新应用作了较全面阐述。     

人类人工染色体构建及其作为基因载体的价值

人类人工染色体（ＨＡＣ）作为基因载体将解决基因治疗存在的一些关键问题。本文探讨了在不完全了解着丝粒、复制起始点、端粒等人类以体基本功能单位的情况下构建ＨＡＣ的三种策略。利用染色体基本功能单位在细胞内构建成功的第一代ＨＡＣ,解决了ＨＡＣ构建的一些难题,同时也带来了某些新的问题。ＨＡＣ作为基因治疗载体具有很多优势,但第一代ＨＡＣ离它作为基因治疗载体还相距很远．为此,作者正在进行解决这些问题的尝试。     

腺病毒载体的细胞导向性基因转移

腺病毒（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ,Ａｄ）载体广泛应用于基因治疗,其主要特征之一是能高效地进行各种组织如肺上皮、肝、肌肉、胰岛、胆囊等的体内（ｉｎｖｉｖｏ）基因转移。然而,因其混杂的向性而引起的全身体内基因转导后治疗基因不受组织限制的表达,限制了它在基因治疗中的应用,因此希望改变腺病毒的天然向性,而使治疗基因导向转移到选择的细胞类型中。目前腺病毒载体细胞导向性的基因转移可通过（１）修饰腺病毒载体的细胞表面识别成分,限制腺病毒导向性感染选择的细胞类型;（２）腺病毒载体中导入组织特异性启动子,控制治疗基因…     

乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的免疫研究进展

以人类腺病毒（Ａｄ）为表达载体发展多价展组口服活疫苗,尤其在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）疫苗研制上成效显著,表达ＨＢｃＡｇ,ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ的重组人类Ａｄ７型（ｄ７）活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果。在重组Ａｄ活载体疫苗研制方面是一项重大进展,表达ＨＢｓＡｇ的重组Ａｄ７活载体口服疫苗已有人体初次免疫试验的报道。     

胞内抗体及其研究进展

胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗的实验研究及潜在的临床治疗方面展示了广泛的应用前景。同时,胞内抗体可以用作分析靶蛋白功能的研究工具,是对传统的“基因剔除”转基因动物的一种有效补充。现从胞内抗体的设计及载体选择、肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗等方面对胞内抗体的研究进展进行综述。     

复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达

为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统,首先构建了含ＦⅧ（Ｂ结构域缺失型）的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ和插入内含子结构的ｐＡｄＩ－ｈＦⅧ,经脂质体介导,证明两质粒的目的基因均能在ＣＯＳ－７细胞中表达有凝血活性的ＦⅧ因子,其中经纯化的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ与ｐＢＨＧ１０经脂质体介导,共转染至２９３包装细胞,经同源重组和Ｅ１蛋白反式互补,形成Ｅ１／Ｅ３缺失型重组腺病毒载体颗粒Ａｄ－ｈＦⅧ．ＰＣＲ检则到病理２９３培养液上清的病毒ＤＮＡ中具有目的基因扩增片段,证明病毒ＤＮＡ含有ＦⅧ基因．经扩增、纯化、滴度测定,用于感染离体细胞ＣＯＳ－７、Ａ５４９、Ｌ９２９、２９３．证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因,其表达量具有一定范围内的剂量依赖性．ＣＯＳ－７细胞中,ＭＯＩ＞１０００时,有细胞毒效应,表达量反而下降．经耳缘静脉注射Ａｄ－ｈＦⅧ至家兔后,１～４周能测到一定水平的ＦⅧ蛋白,１周内升至最高峰．免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有ＦⅧ表达,其中肝脏表达最高．为甲型血友病的基因治疗开辟了新途径     

基因治疗研究进展

基因治疗研究进展陈诗书（上海第二医科大学,上海２０００２５）关键词基因治疗载体造血细胞标记恶性肿瘤ＡＩＤＳ心血管疾病１９９６年９月２５～２９日在美国冷泉港实验室举行了基因治疗会议,交流的论文摘要有３８８篇,覆盖了当前基因治疗研究的各个方面的最新进展,...     

降低重组腺相关病毒载体免疫反应的策略

重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体在基因治疗研究中应用广泛,但可能引发机体产生免疫反应,限制了其在基因治疗领域的临床应用,如何降低rAAV载体的免疫反应已经成为基因治疗领域的研究重点之一。本文从对rAAV载体的选择和对患者免疫抑制调控两个方面介绍降低rAAV载体免疫反应的策略。     

病毒性载体介导的基因转移研究进展

病毒性载体介基因转移研究进展迅速,并率先用于临床基因治疗试验。目前研究重点在其进一步完善和发展,以及发现新的适于基因治疗的病毒性载体,已获部分突破性进展,大大加速了基因治疗研究的进程,但也存在一些限制因素,尚需深入研究。     

系列腺病毒伴随病毒载体的构建及表达β-半乳糖苷酶的研究

为了便于开展用重组腺病毒伴随病毒（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ,ｒＡＡＶ）载体进行基因治疗的研究,构建了三种通用型ＡＡＶ载体ｐＷＡＶ－１、ｐＷＡＶ－２和ｐＳＮＡＶ,每种载体均含有ＡＡＶ－２两端的倒转末端重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔｓ,ＩＴＲ）,中间依次为巨细胞病毒（ＣＭＶ）立早增强子和启动子、多克隆位点和ｐｏｌｙＡ信号。研究只     

人类腺病毒受体的研究进展

腺病毒受体的研究近十几年来得到迅速发展,人们对腺病毒受体的研究兴趣主要源于使用腺病毒载体所进行的基因治疗.随着多个腺病毒受体相继被发现和鉴定(表1),对腺病毒感染细胞的过程有了进一步的认识和理解.例如,腺病毒5型(Ad5)已被用作基因治疗的载体,但不能有效地感染受体低表达的细胞[1].人们通过修饰腺病毒载体中与受体结合的相应部位,提高基因传递的效率,使腺病毒载体在基因治疗中的作用不断完善.本文就已经鉴定的腺病毒受体和相应配体在腺病毒进入细胞时所发挥的作用加以综述.     

腺相关病毒载体基因治疗的研究进展

腺相关病毒 (ＡＡＶ)属于病毒中最小、也是最简单的一种———细小病毒属 ,它是一种有缺陷的非致病性的人类细小病毒 ,重组的腺相关病毒 (ｒＡＡＶ)作为基因治疗的载体 ,对长期基因矫正和基因治疗具有优越性。新的生产工艺提高了ｒＡＡＶ的滴度 ,去除了腺病毒的污染 ,并构建了适用于不同靶细胞的可诱导载体。这些改进有望加速进一步的动物实验研究 ,使临床治疗人类疾病早日成为可能。1 .ｒＡＡＶ的制备方法在 1 989年 ,首次产生了没有野生型ＡＡＶ帮助复制的重组的ＡＡＶ ,这以后 ,为了增加病毒颗粒数 ,人们制造了许多ＡＡＶ辅助质粒 ,其中…     

基因治疗及其临床应用研究进展

基因治疗可定义为在某一个体的细胞中引入新的遗传物质,从而使该个体的疾病得到治疗的方法．基因治疗主要研究免疫治疗、细胞素／药物传递基因、药物敏感基因、药物抗性基因和选择性抗性基因治疗等．基因治疗尚仅限于体细胞,生殖细胞的基因治疗由于技术难度更大,且涉及伦理学与社会学的问题．还不在考虑之列．目前基因治疗的对象主要以恶性肿瘤为重点,同时兼顾心血管及少数遗传病。基因治疗的基本内容包括;引起疾病的缺陷基因定位（基因诊断）;选择适当的载体及载体的加工、修饰与包装（基因载体）;外源基因导入人体靶细胞（基因转移）的临床研究．体外基因转移已广泛应用于各类基因病的临床治疗研究;而体内基因转移目前尚未走出实验室．继美国之后,世界上许多国家都已开始实施各自的基因治疗研究计划．人类的基因病有４０００多种,基因治疗前景广阔．