维罗非尼联合爱必妥对结直肠癌细胞株的作用研究

探讨BRAF抑制剂维罗非尼联合EGFR单克隆抗体西妥昔单抗对BRAF突变型和野生型结直肠癌细胞株的作用。应用MTT法检测,将不同浓度西妥昔单抗、维罗非尼单药以及两药联合分别作用于BRAF突变型结直肠癌细胞株RKO、HT-29和BRAF野生型结直肠癌细胞株DIFI、CACO-2后,观察各细胞株增殖变化;通过集落形成实验,经过长时间培养细胞验证不同处理因素对细胞增殖的抑制作用;Western blot实验检测EGFR下游通路靶蛋白的活性在两药联合后是否出现明显下调。结果显示,单药治疗,西妥昔单抗能一定程度抑制BRAF野生型结直肠癌细胞株增殖,抑制率达26%~40%,而BRAF突变组两种细胞株对西妥昔单抗均耐药。维罗非尼对不同基因状态细胞的增殖均有一定的抑制作用,IC50均小于7μmol/mL,其中BRAF突变细胞更为敏感。对比单药西妥昔单抗,联合维罗非尼后更加明显地抑制了细胞增殖,4种细胞存活率均明显降低(P0.05)。长时间集落形成实验证实两药联合形成集落的面积和数量均明显减少。Western Blot实验显示对比单药,两药联合明显下调了p-EGFR、BRAF、p-ERK的表达。结果显示,BRAF抑制剂维罗非尼无论在BRAF突变型还是野生型结直肠癌细胞株中,均能增强西妥昔单抗作用的敏感性。     

热疗联合奥沙利铂对SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察奥沙利铂联合热疗对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响,确定联合用药的效果,为临床方案提供参考。方法:采用MTT(四唑盐)法检测热疗、奥沙利铂及联合用药对细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blot检测Bax、Bcl-2以及Caspase8蛋白表达量变化;q PCR检测Bax、Bcl-2以及Caspase8 m RNA的积累。结果:热疗联合奥沙利铂可以显著抑制细胞增殖,与对照组相比,热疗组、化疗组、联合组细胞凋亡率分别为16.2%、20.5%和36.1%,具有显著性差异(P0.01);细胞学形态中,热疗组细胞发生皱缩,化疗组细胞膜破裂;化疗将细胞阻滞在G2/M期,热疗和联合组将细胞阻滞S期;Western blot和qPCR显示Bax/Bcl-2比值上升,Caspase8表达量增加,联合组三种蛋白的表达量均与对照组具有显著性差异(P0.01)。结论:热疗联合奥沙利铂可以显著促进细胞凋亡,提高治疗效果,为结肠癌的治疗提供参考。     

大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

该研究探讨了大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其作用机制。用不同浓度大蒜素作用人胃癌SGC-7901细胞48 h。通过MTT法检测细胞活性。光学、激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化。流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。qRT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达水平。结果显示,大蒜素处理细胞48 h的IC50值为78μg/m L,显微镜下可观察到明显的凋亡现象,细胞凋亡率为(61.15±3.77)%,细胞阻滞于G1期,Bcl-2基因和蛋白表达均下降,Bax基因和蛋白表达均增加(P0.05)。综上所述,在一定浓度范围内,大蒜素能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,并可上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达。     

热疗对SW1990 胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别 用不同浓度吉西他滨(0, 5, 10, 20,30 滋M)作用于SW1990 细胞不同时间(24, 48, 72 小时)及30 滋M 吉西他滨作用24h 联合热疗 43℃ 1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT) 法检测细胞的增殖情况。采用Western blot 方法检测细胞内 E-cadherin 蛋白和剪切的Notch1 蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P<0.05）,并 呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24 h 给予43℃ 1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P<0.05） ②吉西他滨作用SW1990 细胞24 小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合 能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24 小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、Cleaved Notch1 的蛋白表达上调,热 疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin 蛋白表达下调、并下调Cleaved Notch1 蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著 逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株SW1990 细胞的EMT 现象,其机制可能与Notch 信号通路有关。     

莪术油诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的研究

该实验目的是探究莪术油(zedoray turmeric oil,ZTO)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。不同浓度的ZTO作用人胃腺癌SGC-7901细胞48 h后,采用台盼兰拒染法检测细胞生长抑制率;光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜下观察细胞的形态和超微结构;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化;Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达水平。结果显示,作用人胃腺癌SGC-7901细胞48 h,ZTO的最佳浓度是110μg/m L,IC50为(108.002±0.305)μg/m L;显微镜下细胞呈不同程度的凋亡特征;DNA电泳可见梯状条带;最佳药物浓度作用细胞48 h的早期凋亡率为(25.07±0.82)%;Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低,Bax/Bcl-2比值显著升高(P0.05),表明ZTO通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡。     

硫酸化茯苓多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

为了探讨硫酸化茯苓多糖(SP)对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因(Bcl-2,Bax)的表达;Western blotting技术检测SP对乳腺癌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果表明,SP对MCF-7细胞增殖有抑制作用,且在一定范围内呈剂量效应;细胞贴壁能力减弱,细胞间隙增大,胞膜褶皱;Bcl-2基因表达水平和蛋白表达水平明显降低(p0.05),Bax基因表达水平和蛋白表达水平明显升高(p0.05)。基于以上研究,SP通过促凋亡基因Bax的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达来下调Bcl-2/Bax比值,激活凋亡途径,诱导MCF-7细胞的凋亡。     

西妥昔单抗注射液生物学活性分析

目的:对自行开发的爱必妥类似物西妥昔单抗进行体内及体外活性分析。方法:采用表皮生长因子受体(EGFR)结合实验、表面等离子共振法(SPR)、磷酸化抑制实验及细胞生长抑制实验分析西妥昔单抗的生物学活性,通过小鼠异体移植肿瘤的抑制实验分析体外生物学活性与药效关系。结果:体外亲和力分析结果表明,西妥昔单抗可特异结合人EGFR,亲和力与爱必妥相当(P0.05)。西妥昔单抗可抑制由表皮生长因子(EGF)引发的EGFR自体磷酸化,基于对EGFR磷酸化抑制而建立的西妥昔单抗生物学活性方法与西妥昔单抗的肿瘤细胞生长抑制作用进行了比较,结果显示西妥昔单抗抑制EGFR磷酸化的活性数值与其抑制细胞生长的活性一致。在鼠异体移植模型中,西妥昔单抗对A431细胞的肿瘤生长产生强烈抑制作用,对HT-29细胞的肿瘤生长也有剂量依赖性抑制。结论:采用的检测方法可用于西妥昔单抗的生物学活性分析,其体内与体外生物学效应与市售爱必妥没有差异。     

华蟾素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

本实验旨在探讨华蟾素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其作用机制。采用不同浓度的华蟾素作用胃癌SGC-7901细胞48 h后,MTT法检测细胞活性;光学、荧光显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡情况。Real Time RT-PCR和Western Blot分别检测Bax、Bcl-2基因m RNA和蛋白表达水平。结果显示,华蟾素对胃癌SGC-7901细胞增殖具有抑制作用且呈剂量依赖性关系,华蟾素处理7901细胞48 h的IC50值为35.67μg/m L,凋亡率为(5.01±1.69)%。显微镜下观察细胞呈明显凋亡现象,线粒体膜电位(ΔΨm)显著下降(p0.05),细胞阻滞于G1期;Bcl-2的表达下调,Bax的表达明显增加(p0.05,p0.01)。提示华蟾素可能通过上调Bax基因,下调Bcl-2基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

热疗联合一氧化氮供体硝酸异山梨酯诱导Hep-A细胞凋亡的研究

研究热疗联合硝酸异山梨酯(Isosorbide dinitrate,ISDN)体外诱导Hep-A细胞凋亡,并探讨其机理.本实验中,应用MTT法检测Hep-A细胞增殖抑制作用;扫描电镜、透射电镜和流式细胞仪观察Hep-A细胞凋亡;Westernblot法检测Bcl-2蛋白表达.结果显示,热疗组、ISDN组和热疗联合ISDN组对Hep-A细胞具有明显增殖抑制作用(p＜0.05),热疗联合ISDN组的抑制作用较其他各组更显著(p＜0.05);电镜观察可见细胞表面微绒毛明显减少或消失、胞膜发泡、细胞固缩和核染色质浓缩边集,并出现凋亡小体.在相同时间点,热疗联合ISDN组诱导Hep-A细胞凋亡率高于ISDN组和热疗组.各实验组均使Bcl-2蛋白表达下调.研究结果提示,热疗联合ISDN诱导Hep-A瘤细胞凋亡有协同作用,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有密切关系.     

单核细胞趋化蛋白-1诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制(英文)

本研究旨在探讨单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotacitic protein-1,MCP-1)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,hUVECs)凋亡的分子机制。胶原酶消化收集hUVECs,体外培养细胞,用胰蛋白酶-EDTA混合液消化传代,用血管性假血友病因子(von Willebrand factor,vWF)和VEGF受体2(KDR)免疫染色证实培养细胞为内皮细胞;用不同浓度MCP-1(0.1、1.0、10、100ng/mL)分别作用hUVECs24h、48h;用流式细胞术及蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表达。如我们前期结果所示,MCP-1能诱导hUVECs的凋亡,其效应随浓度和时间的增加而增强;与对照组比较,MCP-1下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Fas、Bax的表达。以上结果表明,MCP-1能诱导hUVECs凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Fas蛋白及下调Bcl-2蛋白表达有关。