《动物行为学》讲座(四) 第三章 外部刺激(1)

前面我们特别强调了动物行为先天成分和自发成分,同时也指出了反射和复杂行为之间的差异,但是,各种先天行为型也以多种不同的方式受外界刺激的影响。同反射行为相比,先天行为型被外界刺激激活的方式是很不相同的。外界刺激不仅可以影响动物的运动方向,而且也可以影响动物的动机。一、刺激过滤(Stimulus filtering)     

五种变温动物抗凝血酶和纤溶酶原相对含量比较

用免疫浊度法对进食期5～9月的鲤鱼Cyprinus carpio、鲫鱼Carassius auratus、鲶鱼Silurus asotus、中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans和中华鳖Pelodiscus sinensis血清中AT和PLG进行测定.结果显示:1)鲶鱼和中华鳖血清中AT的相对含量极显著高于鲤鱼、鲫鱼、蟾蜍的AT相对含量(P<0.01);2)中华鳖血清中PLG的相对含量显著高于鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的PLG相对含量(P<0.01).结论:1)5种动物体内郁存在AT和PLG,并且抗原性和人的AT-Ⅲ和PLG相似;2)脊椎动物体内AT和PLG的生理含量与生存环境之间有一定的相关性.     

为什么血液有各种各样的颜色?

答:动物的血液都是由血浆和血细胞组成的。血的颜色是由存在于血浆或血细胞中的血色蛋白所决定的。不同的血色蛋白由于所含化学元素各异,造成不同颜色的血液。含铁(Fe)的血色蛋白液呈红色,存在于环节动物的血浆中使血液也呈红色;含铜(cu)的血色蛋白叫血蓝蛋白,溶于血浆中使血液呈蓝色或青色;含钒(V)的血色蛋白叫血绿蛋白,溶于血浆中使血液呈绿色等。一些     

海洋世界里的“方言”

人有人言,兽有兽语。动物之间建立友善关系,双方必须彼此了解才行。这种了解的方式,也叫"禽言兽语"。科学家发现,海洋动物尤其是海兽不仅存在着"语言",而且还有不同的"方言"。     

蓝琼脂糖珠在纯化人血清α_1抗胰蛋白酶中的应用

<正> α_1抗胰蛋白酶(α_1-Antitrypsin,简称A_1AT)是人体血浆中含量最多的一种蛋白酶抑制物,对于维持体内蛋白酶的平衡具有重要作用。自Laurall等(1963)发现遗传性A_1AT缺乏的个体易罹患肺气肿与肝硬化等疾病后,A_1AT的研究遂引起广泛注意。近年来还认为A_1AT的检测有助于肝癌的诊断。A_1AT的制备方法据报道一般较为繁琐,而且得率和纯度也欠满意。为此,我们利用Cibacron蓝染料能特异性地与白蛋白结合的特性,借以除     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体致心血管损伤的研究进展

近年来的研究表明,异常的自身免疫应答是导致心血管疾病的重要因素之一。Wallukat等首次观察到先兆子痫患者血清中存在高阳性率、高滴度的血管紧张素受体Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)自身抗体(AT1R autoantibody,AT1R-AA),该抗体可通过激活AT1R发挥类激动剂样的作用进而导致心肌和血管损伤,由此参与了多种心血管疾病的发生和发展。本文简要综述了近年来有关AT1R-AA的发现、心血管损伤作用及机制以及今后的临床应用前景的研究进展。     

海洋世界里的“方言”

人有人言，兽有兽语。动物之间建立友善关系，双方必须彼此了解才行。这种了解的方式，也叫“禽言兽语”。科学家发现，海洋动物尤其是海兽不仅存在着“语言”，而且还有不同的“方言”。     

Lisinopril和Losartan对乳鼠心脏成纤维细胞AT1受体基因表达水平和ACE活力的影响

为了解两种降压药物 -血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)抑制剂(lisinopril)和血管紧张素 型受体 (AT1 R)拮抗剂 (losartan)在心脏间质组织中的作用 ,进行了药物对乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因表达和血管紧张素转换酶活力影响的实验 .用 RT- PCR方法检测体外培养乳鼠心脏成纤维细胞 AT1 R基因的表达 .结果显示 ,losartan在 1 0 -7～ 1 0 -4 mol/L浓度范围内对心肌成纤维细胞 AT1 R基因表达有激活作用 ,其中 1 0 -5mol/L浓度激活作用最强 ;1 0 -5mol/L losartan对 AT1 R基因表达呈现明显的时间依赖性变化 ,当加入 1 h后 ,AT1 R基因表达量增加 2倍 ,随后出现一过性下降 ,2 4 h时回升并维持在一较高水平 .与 losartan相比 ,lisinopril对 AT1 R基因的表达无明显影响 .酶活实验结果显示 ,lisinopril明显抑制心肌成纤维细胞中的ACE活力 ,随时间延长 ,酶活力逐渐恢复 (1 2 .6× 1 0 -3 U/mg) ;而 losartan则对酶活力的影响不明显 ,仅是在 1 2 h后 ,ACE活力才略有升高 .实验结果证明 ,在心脏成纤维细胞中存在有 ACE和AT1 R,并且后者受 losartan以浓度和时间依赖方式的调节 .     

miR-152靶向AT1R对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨微小RNA-152(mi R-152)靶向血管紧张素受体(AT1R)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:采用1μmol/L AngⅡ刺激体外培养的大鼠心肌成纤维细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测成纤维细胞中胶原蛋白I(Collagen I)、胶原蛋白I(Collagen Ⅲ)以及AT1R蛋白表达的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测成纤维细胞中mi R-152和AT1R m RNA的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中分别转染mi R-152 mimic和mimic control、AT1R si RNA和si RNA control以及共转染mi R-152 mimic和AT1R过表达载体,以同样的方法检测细胞增殖和胶原合成情况。双荧光素酶报告基因实验检测mi R-152和AT1R靶向结合关系。结果:AngⅡ刺激能够促进心肌成纤维细胞增殖,上调成纤维细胞中胶原蛋白Collagen I和Collagen Ⅲ的表达,同时能够抑制mi R-152的表达,促进AT1R m RNA和蛋白的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中,过表达mi R-152或沉默AT1R均能够上调细胞增殖活力,促进胶原合成。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示AT1R是mi R-152靶基因,mi R-152能够负向调控AT1R的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中,同时过表达mi R-152和AT1R能够逆转单独过表达mi R-152导致的细胞增殖抑制作用,回调胶原蛋白Collagen I和Collagen Ⅲ合成抑制作用。结论:mi R-152能够抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,其作用机制可能是通过靶向AT1R的表达实现的。     

功能性头痛病人脑脊液神经降压素含量的改变

神经降压素(neurotensin,NT)是由13个氨基酸组成的脑肠肽。它广泛分布于哺乳类动物及人的脑内、胃肠道及其它组织中。NT不仅对心血管、消化道及内分泌有重要作用,而且也具有显著的镇痛作用。但是,功能性头痛病人NT含量有否改变,两者是否相关,尚未见报道。为此,我们测定了功能性头痛病人脑脊液NT含量的改变,为进一步探讨NT与该疾病之间的关系提供某些实验依据。     

增龄引起复制性衰老细胞胞内钙信号转导的变化

为了观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )引起复制性衰老细胞胞内游离钙的变化以及衰老对其的影响 ,初步阐明衰老引起胞内游离钙变化的机制 .选用人胚肺二倍体成纤维细胞WI 38细胞株 ,利用逆转录PCR(RT PCR)技术及Northern杂交技术检测衰老细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)、血管紧张素Ⅱ 2型受体 (AT2R)mRNA水平的表达 ;利用激光共聚焦显微成像技术 (LSCM )观察WI 38细胞在AngⅡ刺激 ,Valsartan阻断条件下细胞内钙离子荧光强度的改变 .AngⅡ通过AT1受体介导增加WI 38细胞内游离钙的水平 ,并随着WI 38细胞传代增加至衰老状态 ,AT2受体高表达 ,AT1受体介导的钙离子信号转导的活性逐渐降低 .提示WI 38细胞衰老过程中钙离子信号的转导活性降低 ,并且AT1R和AT2R在血管紧张素Ⅱ介导的细胞内钙信号活性中具有不同的作用与机制 .为探讨WI 38衰老细胞内钙信号变化机制提供了实验依据     

氯沙坦对肾血管性高血压大鼠血清中血管紧张素Ⅱ-1受体自身抗体产生的影响

目的和方法：采用两肾一夹型肾血管性高血压（RVH）模型,以合成的大鼠血管紧张素Ⅱ－1受体（AT1R）细胞外第二环165－191位氨基酸序列作为特异性抗原,用ELISA法检测大鼠血清中血管紧张素Ⅱ－1受体自身抗体,动态观察（13周）氯沙坦（术后第2周开始,5mg/kg dig,连续12周）治疗对模型大鼠AT1R自身抗体产生的影响。结果：RVH组大鼠血清中AT1R自身抗体从术后1周起阳性率、滴度逐渐升高;给予氯沙坦治疗不仅可抑制模型大鼠心脏功能和结构的改变,而且使血清AT1R自身抗体的阳性率和滴度明显低于肾血管性高血压组。结论：氯沙坦有抑制AT1R自身抗体产生而达到降压的作用。     

小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞血管紧张素Ⅱ 1型和2型受体的表达特征

胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为体内3个胚层来源的各种类型组织细胞的潜能,经过体外诱导能够分化为心肌细胞,亦称为胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM).本研究探讨了ESC诱导分化心肌细胞过程中血管紧张素Ⅱ受体(ATR)的亚型AT1R和AT2R的表达特征.10-4mol/L维生素C体外诱导小鼠R1胚胎干细胞分化为自发搏动的心肌细胞,用免疫荧光法检测分化后的细胞表达心肌细胞特异性标志物α辅肌动蛋白.小鼠胚胎干细胞在诱导分化为心肌细胞以后,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)方法检测到ESCM表达AT1R,并且呈时间依赖性逐渐增加的特点,在第14d达到高峰.Western印记法检测AT1R表达特征与RT-PCR结果相符.Western印记法的结果显示,血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)可作为AT1R激动剂激活AT1R,并使其下游的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平上调,预孵育AT1R抑制剂Losartan(10-6mol/L),此作用被抑制.RT-PCR方法显示,与新生小鼠心室肌细胞相比,ESCM的AT2R表达水平较低.     

AT2R载体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白及新生内膜增生的影响

目的:血管紧张素Ⅱ 2型受体(AT2R)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSC)在四环素可调控系统下作为载体,利用计算机图像分析系统研究新生内膜增生的情况,并探讨AT2R在体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后骨桥蛋白(OPN)表达影响。方法:利用球囊损伤60只SD大鼠颈动脉,并随机将SD大鼠分为5组,分别为正常组(未行球囊扩张术)、对照组(球囊扩张术后注入PBS)、MSC组(球囊扩张术后注入常规MSC)、MSC转染组(球囊扩张术注入转染AT2R的MSC)、强力霉素(Dox)组(球囊扩张术后注入转染AT2R的MSC,术后当天至处死前三天通过尾静脉注射Dox 100μg/kg/d)。术后14及28天分别处死大鼠取材,光镜下观察血管内膜增生情况,Image pro plus 6.0计算机图像分析系统测量新生内膜面积(I/M),逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测AT2R及OPN在大鼠血管标本中的表达变化。结果:大鼠颈动脉AT2R在Dox组的表达显著增高,新的增生内膜面积较其它各损伤组显著降低(P≤0.01),并且OPN的表达显著低于其他各手术组。结论:AT2R基因在体可调控表达受到Dox的有效控制,AT2R基因可能抑制血管损伤后OPN的表达及新生内膜的过度增生。     

利用FM4-64FX标记大鼠血管平滑肌细胞的囊泡运输

囊泡运输是大分子物质进入细胞的途径,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)与外界存在频繁的信息和物质交换,该研究通过标识内吞囊泡来研究VSMCs的囊泡运输。体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,用血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)刺激,加入FM4-64FX短暂孵育后固定。通过免疫组化方法标记VSMCs血管紧张素II 1型受体(angiotensin II receptor type 1,AT1R),检测内吞囊泡和AR1R转运之间的关系。受到Ang II的激活后,VSMC快速形成内吞囊泡,将AT1R转运至胞质;存在血管紧张素受体阻断剂(angiotensin receptor blocker,ARB)时,内吞囊泡数量少,AT1R较少进入胞质。通过FM4-64 FX对胞内囊泡进行标识可以显示VSMCs的大分子物质运输,可观察特定的分子在内吞囊泡上的分布和运输情况。     

不同年龄白发性高血压大鼠肾脏AT1R和AT2R的表达

目的本研究观察不同月龄自发性高血压大鼠（SHR）肾脏ALR和ALR表达,初步探讨AT1R和AT2R在高血压发生、发展过程中的可能作用。方法1月龄组（S1）、2月龄组（S2）、3月龄组（S3）、6月龄组（S6）和9月龄组（墨）雄性SHR共5组,每组各6只,各组均有相应月龄匹配的Wistar-Kyoto大鼠（WKY）作对照。采用RBP-I型大鼠血压心率测定仪测量大鼠尾动脉收缩压（SBP）;放免法测定血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）;免疫组化染色结合计算机图像分析方法测定肾脏AT1R和ALR表达水平。结果（1）SHR SBP随着月龄的增加而上升,S6后趋于稳定。（2）1个月后SHR血浆AngⅡ浓度均高于S1（P〈0.05）,而S2、S3、S6和S9之间无明显差别（P〉0.05）;1个月后SHR血浆AngⅡ浓度均高于相应配对的WKY组（P〈0.05）;而WKY各月龄组均无明显差别（P〉0.05）。（3）SHR肾脏AT1R随着月份的增加而增加（P〈0.05）,且高于相应配对的WKY组（P〈0.05）。SHR肾脏ABR随着月份的增加而降低,S6明显降低（P〈0.05）,S6和S9比较无明显差别（P〉0.05）;且均低于相应配对的WKY组（P〈0.05）。WKY各月龄组AT1R和AT2R无明显差别（P〉0.05）。结论SHR肾脏AT1R表达水平比WKY高,并随着年龄的增加而递增;AT2R表达水平比WKY低,并随着年龄的增加而降低。     

楤木皂苷对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:观察楤木皂苷(total saponins extracted from Aralia taibaiensis,s AT)对大鼠心肌缺血/再灌注(myocardia1 ischemia/reperfusion,MI/R)损伤的影响。方法:可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注3 h复制MI/R模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、s AT低、中、高剂量组,每组10只。采用伊文思蓝(EB)、2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)双染法测定心肌梗死面积,苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌病理学形态变化,并检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果:与模型组比较,s AT中、高剂量组可明显缩小心肌梗死面积(P0.05),并显著降低血清中LDH、CK-MB及MDA的含量,同时使得血清中SOD、CAT和GSH-Px的活性增加。且所有给药组心肌组织的病理损伤也小于模型组。结论:s AT对大鼠MI/R损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化作用相关。     

豚鼠冰水游泳应激后血浆、肾上腺髓质和脑内组织的亮—脑啡肽含量变化

豚鼠冰水游泳应激3min后,用放射免疫法测定血浆、肾上腺髓质和脑内三个脑区组织的亮—脑啡肽(Leu-enkephalin,LEK,)含量和血浆的血管紧张肽Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,ATⅡ)浓度变化。结果表明:在冰水中游泳应激组豚鼠的血浆、肾上腺髓质、下丘脑和纹状体组织的LEK含量和血浆的ATⅡ浓度,均较对照组豚鼠明显升高(P值均<0.01)。提示:豚鼠在冰水中紧张、剧烈游泳后,可能激活了中枢神经和周围组织内的脑啡肽能神经元和血管紧张肽原酶—血管紧张肽Ⅱ系统,从而促进LEK和ATⅡ的释放增加。     

用灵敏的血管紧张素Ⅰ放射免疫分析法测定血浆肾素酶活性

报导一个简单的血浆肾素活性(PRA)测定法,利用灵敏的放射免疫分析法(RIA)测定血管紧张素Ⅰ(ATⅠ)产生速率。抗ATI血清是用多聚左旋赖氨酸-琥珀酰-ATⅠ免疫家兔而获得,它和七种肽类激素的免疫学交叉反应是可以忽略的,其中与ATⅡ为低于0.2%。它的有效亲和常数K_(eff)高至4.4×10~(10)升/克分子。使用这个优质抗血清及~(125)Ⅰ标记ATⅠ,并结合双抗体分离技术,已建立了一个特异而灵敏的RIA。其检出极限是9.1±2.7微微克ATⅠ/管(均值±标准差),精密度是1.5±0.8%;测定保温后血浆中ATⅠ(136微微克量及3批连续测定中)批内变异系数C.V是2.5%,批间C.V.是15%。当确定PRA方法学时,研究了一些影响因素,并证实了血浆保温条件显著地影响ATⅠ的产生速率。我们的方法具有某些优点,例如:1)一旦血液被采集,立即加入作为抗凝剂和ATⅠ保护剂的Na_2·EDTA,8-羟基喹啉和二巯基丙醇;2)保温的血浆中加入1/10体积4MTris-HCl缓冲液(pH 7.4),使它维持在生理条件而又尽可能减少稀释;3)证明当保温期间ATⅠ的生成量线性范围可维持3～6小时以上;4)加至血浆中未标记ATⅠ的回收率达98.5%,表明在37℃3小时(PRA)及4℃3天(RIA)的整个保温期间,满意地抑制了蛋白水解酶的作用。为了测试PRA法的精密度,对二份混合血浆,在连续5批检定中进行复管测定,得均值是0.88毫微克AT Ⅰ/毫升/小时和2.35毫微克AT Ⅰ/毫升/小时,其批内C.V.分别是4.3%和1.7%,批间C.V.分别是20%和10%。     

有氧运动上调Agtr1a基因甲基化改善高血压肠系膜动脉ACE1-AT1R收缩轴功能

血管紧张素Ⅱ 1A受体(angiotensin Ⅱ type 1A receptor, AT1aR)是Ang Ⅱ的主要受体亚型。AT1aR基因(Agtr1a)启动子区DNA甲基化水平的变化是调控AT1aR表观遗传的重要机制。为明确运动是否通过调节Agtr1a基因启动子区甲基化水平而减弱ACE1-AT1R收缩轴功能,从而起到改善高血压血管功能的作用,本研究选用3月龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)和正常血压对照组大鼠(Wistar-Kyoto, WKY),随机分为正常血压安静组WKY-C、正常血压有氧运动组WKY-E、高血压安静组SHR-C、高血压有氧运动组SHR-E,各组n=24。12周跑台运动结束后,有氧运动显著减低运动组大鼠血压和体重(P0.05);采用微血管环张力测定技术测定肠系膜动脉对去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)的反应性。结果显示,有氧运动显著减弱高血压大鼠肠系膜动脉对血管收缩因子NE、AngⅡ的收缩反应(P0.05);高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定血浆中ACE1-AT1R收缩轴主要活性肽血管紧张素原(angiotensinogen, AGT)、AngⅡ的水平。结果显示,有氧运动显著减弱高血压大鼠肠系膜动脉对血管收缩因子NE、AngⅡ的收缩反应(P0.05);免疫印迹法和q-PCR技术测定肠系膜动脉ACE1、AT1R蛋白质和AT1aR的mRNA水平相对含量。结果显示,有氧运动显著降低高血压大鼠肠系膜动脉ACE1、AT1R蛋白质和AT1aR mRNA水平(P0.05);亚硫酸氢盐测序BSP法测定Agtr1a基因的启动子区甲基化水平。结果显示,有氧运动显著上调高血压大鼠肠系膜动脉Agtr1a基因启动子区甲基化水平(P0.05)。本研究表明,有氧运动通过上调高血压肠系膜动脉Agtr1a基因启动子区甲基化水平,即而减弱RAS系统ACE1-AT1R收缩轴功能,从而抑制高血压血管张力增高,缓解血压增高。