溴氰菊酯对鸡脑突触膜蛋白磷酸化和Ca-ATP酶活力的影响

研究了神经毒性杀虫剂———溴氰菊酯对体内源性蛋白质磷酸化作用的影响。结果表明,浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ溴氰菊酯明显抑制正常鸡和经三甲基苯基磷酸酯处理的鸡脑突触膜中５５ｋＤ和６０ｋＤ两种蛋白的磷酸化。而０２５ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋加０２５ｍｍｏｌ／Ｌ的钙调蛋白则明显地促进这两种蛋白质的磷酸化,但较低浓度（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）时,溴氰菊酯明显抑制４８ｋＤ蛋白的磷酸化。而００３ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋加００３ｍｍｏｌ／Ｌ的钙调蛋白则明显地增强４８ｋＤ和４５ｋＤ两种蛋白的磷酸化。此外,还发现溴氰菊酯可抑制鸡脑突触膜中ＣａＡＴＰ酶活力。     

银杏花粉微管蛋白的纯化及鉴定

采用丙酮粉抽提,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００、ＭｏｎｏＱ柱层析,从银杏花粉中分离纯化出微管蛋白,其两个亚基的分子量分别为５４ｋＤ和５２ｋＤ纯化的微管蛋白可与鸡脑微管蛋白抗体发生免疫交叉反应。     

鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示,纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件,但３２ｋＤ分子却不能．结果提示,３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子,３２ｋＤ分子属性有待进一步研究证实     

鸡Zong凝集素的分离纯化与性质研究

鸡Ｚｏｎｇ菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析３个主要步骤纯化得到一种凝集素（ＴＡＬ）。纯化的ＴＡＬ在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。ＴＡＬ的分子量为８９．４ｋＤ,亚基分子量为３８ｋＤ和５１ｋＤ,提示ＴＡＬ分子由两个不同亚基组成。ＴＡＬ具有供血动物种属专一性,使Ｗｉｓｔａｒ大鼠红细胞凝集所需ＴＡＬ最     

苏芸金杆菌广谱杀虫Tm13－14菌株晶体毒素及毒力特性

以新筛选的对鞘翅目、鳞翅目、双翅目均具毒性的Ｂ．ｔ．Ｔｍ１３－１４菌株为材料,用ＨＤ－１、３３７０－１为参考菌株,比较了伴孢晶体蛋白的多肽组成,以及经三种昆虫肠道酶降解产生的抗酶多肽组分。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：Ｔｍ１３－１４晶体蛋白含１３８ｋＤ、１３２ｋＤ主要成分和６５ｋＤ次要成分。其晶体分别由三种昆虫肠道酶消化产生绚毒性多肽,经生物测定,杀家蚕的毒性成分为６８．５ｋＤ、５９ｋＤ多肽;杀斜纹夜蛾毒性成分为７１ｋＤ,６７ｋＤ和５９．６ｋＤ多肽杀马铃薯瓢虫毒性成分为６９ｋＤ、６５ｋＤ多肽。它与ＨＤ－１、３３７０－１晶体均有明显差异。     

人神经生长因子融合蛋白的纯化及其生物活性的研究

用一株基因工程菌Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６／ｐＭＮ表达了麦芽糖结合蛋白－人神经生长因子融合蛋白．菌体超声破碎后,上清液经直链淀粉亲和柱一步即可获ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯融合蛋白（５５ｋＤ）,为麦芽糖结合蛋白（４２ｋＤ）与人神经生长因子（１３ｋＤ）的络合物,产率约１０％．产物用鸡胚背根神经节检测生物活性,１ＢＵ不大于１０ｎｇ,与小鼠颌下腺β神经生长因子具有类似生物活性     

与光系统Ⅱ颗粒结合的对DTT敏感的蛋白酶的纯化和性质

菠菜光系统Ⅱ颗粒的１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ抽提液经ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｍ疏水层析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析分离得一种对ＤＴＴ敏感的蛋白酶。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２凝胶过滤测得该酶的分子量为３７ｋＤ,其为单体酶。该酶可降解１８ｋＤ和２４ｋＤ水溶性蛋白质,分别产生１３．２ｋＤ、１２ｋＤ、１０．５ｋＤ和２３ｋＤ、２２ｋＤ、２０ｋＤ片段,最适ｐＨ为８．０,对ＮａＣｌ不敏感,对ＤＴＴ和β－Ｍｅ敏感。抑制实验表明该酶不属丝氨酸类蛋白酶。     

以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D的重组活疫苗的建立

从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１－１６８株）病毒基因组中,分离出含有糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的１．２ｋｂ片段,插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ区的质粒ｐＪＳＢ１１７５Ｐ７．５ｋ启动子下游,转染无白血病鸡胚原代细胞,获得带有ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ糖蛋白抗原,能与特异性单克隆抗体反应。在感染细胞中表达的膜抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达分子量为５４ｋＤ糖蛋白。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了重组病毒ＤＮＡ中特异的ｇＤ基因,对作为活疫苗的重组痘苗病毒株进行了一些微生物学活性、免疫原性和毒力等方面的研究。     

汉滩病毒核蛋白的分段表达及抗原表位分析

在大肠杆菌中对汉滩病毒Ｓ基因４种不同长度片段的重组表达质粒进行诱导表达。结果表明表达的４种ＧＳＴ－ＮＰ融合蛋白均以不溶性包含体形式存在于茵体细胞内,表达量分别占菌体蛋白总量的２９－３６％,分子量分别约为７２ｋＤ、６６ｋＤ、５４ｋＤ和４４ｋＤＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示５４ｋＤ和７２ｋＤ融合蛋白用酶标记汉滩病毒ＮＰＭｃＡｂｌＡ８和抗ＧＳＴ ＭｃＡｂ ３Ｃ１１染色呈阳反应。６６ｋＤ和４４ｋＤ融合蛋     

一种可识别神经元特异微管蛋白的抗体

通过人工合成大鼠巢蛋白Ｃ－末端的一段２０肽,制备得到了抗巢蛋白的抗体－Ａｎｔｉ－Ｎｅｓ－２。我们发现该抗体除了能识别小鼠２４０ｋＤ的巢蛋白条带外,还特异性识别另一分子量约为５０ｋＤ的蛋白条带,蛋白印迹反应提示,该５０ｋＤ蛋白可能与神经细胞的增殖和分化相关。经分离纯化和Ｎ－端氨基酸序隐测定证实：该５０ｋＤ蛋白为微管蛋白。     

流行性出血热循环免疫复合物组分分析

应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫转印技术对流行性出血热患才血清中免疫合物组分进行了分析。流行性出血热循环免疫复合物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离,考马斯亮兰染色,显色主要有７条带,分子量分别为２３ｋＤ,５０ｋＤ,５２ｋＤ,６５ｋＤ,７２ｋＤ,８０ｋＤ及１００ｋＤ。采用该病毒特异性抗血清、单克隆抗体以及人免疫球蛋白、补体成分抗血清识别,在其特环免疫复合物中可检出特异性病毒抗在及相应的免疫球状蛋白和补体成     

黑曲霉木聚糖酶的纯化与性质

由凝胶电泳酶谱检测到黑曲霉１４９发本酵液中存在两型木聚糖酶,依次为Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ。通过硫酸铵分级沉淀及ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０柱层析分别将Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ纯化到凝胶电泳均一。由ＳＤＳ－凝胶电泳和浓度梯度凝胶电泳测得Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ的分子量分别为３７ｋＤａ,２４ｋＤａ和２３ｋＤａ,Ｘ－Ⅰ具有亚基。二者的含糖量分别为２７．６％和７．３％。Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ最适返应温度分别为５０℃和５５℃,ｐＨ为４．     

不同类型兔2‘,5’—寡聚腺苷酸合成酶的比较研究

新城疫病毒（ＮＤＶ）诱导的兔网织细胞中只含有一种１１０ｋＤ的２’５‘－寡聚腺苷酸合成酶（２’,５‘－ＯＡＳＥ）,而ＮＤＶ诱导的兔脾脏中含有１１０ｋＤ和４０ｋＤ的２’,５‘－ＯＡＳＥ。网织细胞和脾脏中的１１０ｋＤ大酶皆位于核糖体中,脾脏中的小酶在细胞液,核糖体中皆有分布。纯化的兔２’,５‘－ＯＡＳＥ性质研究表明ＮＤＶ诱导的兔 钢织细胞中的Ｐ１１０和ＮＤＶ诱导的兔脾脏中的Ｐ１１０２’,５‘－ＯＡＳＥ是     

人白介素6受体功能区片段在E．coli中的表达

通过ＤＮＡ体外重组技术,以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体,构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４,分别编码２８ｋＤ的ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白,并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３。重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＬ－６Ｒ的抗原性。     

人白介素6受体功能区片段在E.coli中的表达

通过ＤＮＡ体外重组技术,以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体,构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４,分别编码２８ｋＤ和ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白,并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右,重组蛋白主要包涵体形     

非洲爪蟾孵化酶的纯化及其部分生化特性研究

本文以ＧＳＴ－ＵＶＳ．２抗体和卵黄膜为检测手段,采用凝胶过滤和离子交换等方法将非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）孵化酶纯化了９０倍以上,并研究了其酶活性和生化特性。实验发现,孵化酶分子量为６０ｋＤ,有很强的蛋白酶活性和卵黄膜溶解活性;它很不稳定,在纯化时极易降解为４０ｋＤ分子,４０ｋＤ分子没有卵黄膜溶解活性,但仍有很强的蛋白酶活性。４０ｋＤ分子很可能只代表６０ｋＤ分子中的蛋白酶功能区,而丢失了两个ＣＵＢ重复区。孵化酶对ＥＤＴＡ和金属离子非常敏感、又为ｐ－ＡＰＭＳＦ等胰蛋白酶抑制剂所强烈抑制,表明它是属于胰蛋白酶类型的一种金属蛋白酶。其特异性ＭＣＡ－底物为Ｂｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＭＣＡ。     

小鼠骨髓 内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞？…

本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞,惧无血清条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）,将其作多级串联超滤,获得分子量大于１０、３￣１０、１￣３、０．５￣１ｋＤ和小于０．５ｋＤ超滤组分。进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验。检测了它们的ｍＢＭＥＣ－ＣＭ和３￣１０组分对粒巨噬系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）生长未见明显影响,而分子量大于１０ｋＤ和０．５￣１ｋＤ组分促进ＣＦＵ－ＧＭ的增殖,分子量１￣３ｋＤ和小于０．５     

激素对枸杞体细胞胚发生及可溶性蛋白质含量和组分的影响

以宁夏枸杞无菌苗叶片为材料,对体细胞胚发生过程中激素作用、可溶性蛋白质变化及体细胞胚发生频率进行了研究。发现不同激素处理、可溶性蛋白质含量、组分和体细胞胚发生频率均有一定的差异,三者之间存在着相关性。结果如下：（１）ＭＳ＿１、ＭＳ＿２和ＭＳ＿３三种培养基上继代的愈伤组织难以诱导形成体细胞胚,为非胚性愈伤组织;而从ＭＳ＿１、ＭＳ＿２和ＭＳ＿３分别转到ＭＳ＿０和ＭＳ＿４培养基上的愈伤组织体细胞胚发生频率高,属于胚性愈伤组织。其中以ＭＳ＿３转至ＭＳ＿０后的体细胞胚发生频率最高。（２）可溶性蛋白质ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：非胚性愈伤组织有特异性蛋白质６７ｋＤ,胚性愈伤组织有特异性蛋白质３５ｋＤ和４４ｋＤ;蛋白质３３ｋＤ和６７ｋＤ受２,４－Ｄ调控,蛋白质４９ｋＤ、５７ｋＤ受６ＢＡ调控,而蛋白质３７ｋＤ、５１ｋＤ受２,４－Ｄ和６ＢＡ协同调控。     

从云南烟草上检测到的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物*

在对云南省烟草病毒病的研究中,分离到一种直径约２６￣３０ｎｍ的球形病毒。提纯病毒进行的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ发现一条５５ｋＤ蛋白带。５５ｋＤ蛋白Ｎ－端１０个氨基酸与ＣＭＶ亚组Ⅱ的Ｑ株系外壳蛋白Ｎ－氨基酸同源性为１００％。以ＣＭＶ－Ｑ抗血清对５５ｋＤ蛋白进行了Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测,发现５５ｋＤ蛋白与ＣＭＶ Ｑ株系抗血清有血清学反应。根据已报道的ＣＭＶ亚组Ⅱ外壳蛋白基因序列合成引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ     

以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒I型糖蛋白D的重组活疫苗…

从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ｉ型病毒基因组中,分离出含有糖蛋白Ｄ基因的１．２ｋｂ片估,插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ区的持粒ｐＪＳＢ１１７５Ｐ７．５ｋ启动子下游,转染无白血病鸡胚原供细胞,获得带有ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ糖蛋白抗原,能与特异性单克隆抗体反应。