一种改进的甲醛—琼脂糖凝胶电泳

构建ｃＤＮＡ文库,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ－ＰＣＲ等分子生物学研究,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛－琼脂糖凝胶电泳。然而,传统的甲醛－琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂［１］,本文提出一种改进的甲醛－琼脂糖凝胶电泳,不仅简化了操作,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｃＤＮＡ甲醛－琼脂糖凝胶电泳为例,对这一方法进行介绍。１ 材料与方法１．１ 总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离：取向日葵花蕾１ｇ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ［２］。利用磁珠法分离ｍＲ－…     

外来入侵植物紫茎泽兰不同组织RNA提取方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行cDNA文库构建等分子生物学研究的前提。在苯酚法的基础上,改进并得到了一种适合紫茎泽兰根、茎、叶总RNA快速提取的方法,消除了蛋白质、DNA、多糖等的污染。该方法提取的紫茎泽兰不同组织总RNA纯度高、完整性好,可用于RT-PCR、cDNA文库构建、Northern杂交等分子生物学实验,而且简单、经济、重复性好,适合于多种植物组织总RNA的提取。Northern杂交表明F3’H基因在紫茎泽兰的根、茎、叶等组织中广泛存在,但在叶中的表达量最高,在根中的表达量最低。     

一种快速提取小麦叶片总RNA的方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取.     

一种简易RNA甲醛—琼脂糖凝胶变性电泳

构建ｃＤＮＡ文库 ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ ＰＣＲ等分子生物学研究 ,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛 琼脂糖凝胶电泳。然而 ,传统的甲醛 琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂[1 ] ,本文提出一种改进的甲醛 琼脂糖凝胶电泳 ,不仅简化了操作 ,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｍＲＮＡ甲醛 琼脂糖凝胶电泳为例 ,对这一方法进行介绍。1　材料与方法1.1　总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离取向日葵花蕾 1ｇ ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ[2 ] 。利用磁珠法分离ｍＲＮＡ[3] 。…     

一种有效的花粉线粒体RNA分离技术

线粒体有自己的基因组和独特的表达系统,对其研究可以了解ＲＮＡ编码及核与线粒体之间协同调控等机制,进而阐明呼吸作用、植物细胞质雄性不育等生命现象［１,２］。因此线粒体基因组结构及其表达是目前生命科学研究中一个很活跃的研究领域。由于花粉是世代交替的关键阶段,雄性不育仅表现花粉不育而其他营养器官正常,因此研究花粉线粒体基因表达显得尤为重要。花粉线粒体基因表达研究中重要的步骤之一是分离线粒体ＲＮＡ（ｍｔＲＮＡ）。目前仅见营养器官ｍｔＲ－ＮＡ［３］,而未见花粉（特别是不同发育时期的花粉）ｍｔＲＮＡ提取技术…     

同时抽提DNA和RNA的简便方法

同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的简便方法刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词ＤＮＡＲＮＡ抽提在研究工作中,常同时需要培养细胞的ＤＮＡ和ＲＮＡ,从同一样品中同时提取ＤＮＡ和ＲＮＡ。目前,已有好几种同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的方法［１～４］。作...     

人颌下腺cDNA文库的构建

本研究从新鲜的人颌下腺组织中提取总ＲＮＡ,从中分离出带ｐｏｌｙ（Ａ）尾的信使ＲＮＡ［ｐｏｌｙ（Ａ）〕ｍＲＮＡ］,并合成带ＮｏｔＩ位点的双链ｃＤＮＡ后,接上ＥｏｃＲＩ接头定向插入λｇｔ１１表达载体,经体外包装后转染Ｙ１０９０宿主菌,遂构建成人颌下腺ｃＤＮＡ文库。该文库有４．１×１０５个噬菌体,重组率为１００％,可供寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。     

干种子高质量总RNA的快速提取方法

高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01～0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。     

熏蒸法测定土壤微生物量碳的改进

自从Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ和Ｐｏｗｌｓｏｎ［１］创造熏蒸培养方法测定土壤微生物量碳，发展到用多种方法来测定土壤微生物量，如土壤ＡＴＰ含量分析方法［２］，基质诱导呼吸法［３］，精氨酸氨化法［４］，熏蒸浸提法［５］，脂肪酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ等微生物细胞成分分析...     

蝶兰胚珠发育过程中总RNA、Poly＋RNA和PolyA－RNA的变化

蝶兰胚珠发育过程中总ＲＮＡ、Ｐｏｌｙ＋ＲＮＡ和ＰｏｌｙＡ－ＲＮＡ的变化张宪省,马小杰,阎先喜,邢树平（山东农业大学基础部,泰安２７１０１８）近年来随着植物分子生物学理论和技术的发展,人们已将分子生物学技术应用于研究植物的生殖。目前已在基因调控花的分化...     

植物防卫反应基因的类型、表达、调控和应用

植物防卫反应基因的类型、表达、调控和应用何晨阳,王金生（南京农业大学,２１００１４）防卫反应基因是寄生植物中被诱导表达抗病反应的一类基因。早在７０年代人们就发现寄主植物抗病性表达需要ＲＮＡ和蛋白质的合成,也需要新合成的特殊酶类［１］,同时也注意到植物防卫反应常常受到病原物及其激发子的诱导。从此,在研究植物对病原物防卫反应的生化和分子生物学机制方面取得了很大的进展［２］。     

两种哺乳动物mRNA的编辑

ＲＮＡ编辑的研究始于１９８６年Ｂａｎｎｅ等［１］对锥虫（ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄｓ）线粒体ｍＲ－ＮＡ中插入非编码尿嘧啶的研究。此后,又在植物及一些低等生物的线粒体或叶绿体中相继发现了以尿嘧啶插入ｍＲＮＡ为编辑模式的ＲＮＡ编辑。哺乳类中载脂蛋白Ａｐ...     

双链RNA技术在植物病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤,并列举了ｄｓＲＮＡ在植物病毒研究中的应用,其主要应用有（１）用于检测植物病毒;（２）用于病毒株系分化;（３）用于病毒卫星ＲＮＡ及亚基因组ＲＮＡ研究;（４）用于侵染性测定及病毒基因组功能研究等。     

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

人参植物高质量RNA的分离及其皂苷生物合成相关新基因GBR6的表达分析

为从富含多糖的人参植物组织中分离出高质量的RNA,使用改进的两种异硫氰酸胍法,可从人参植物根组织中提取到较高产量和质量的总RNA、每克新鲜组织的RNA产量在80～110μg之间;经琼脂糖凝胶电泳分析,可见到28S和18S rRNA两条完整、清晰的条带;紫外分光光度法测得的A260／A280比值位于1．8～2.0．而且,使用该改良法分离的RNA,可广泛用于检测基因表达的RT-PCR与Northern印迹杂交分析以及cDNA文库构建等植物分子生物学研究。     

植物组织RNA提取的难点及对策

酚类化合物、多糖、蛋白质和未知次级代谢产物是影响植物组织ＲＮＡ提取的几个主要干扰因素。本文对它们在植物ＲＮＡ提取过程中的干扰作用、现象以及消除它们的一些方法进行了综述。     

莲藕组织总RNA的快速提取方法

莲藕组织富含多糖、脂质、酚类等物质,用一般的方法较难提取高质量的RNA。在改进前人方法的基础上,建立了一种高效、简单的CTAB-LiCl提取法,能快速提取高质量的莲藕组织总RNA,并且产率高、完整性好、纯度高,能进一步满足RT-PCR等分子生物学实验的需要。此外,该方法也适用于其它富含多糖、脂质、酚类等物质的植物组织总RNA的提取。     

SELEX法筛选特异亲和淀粉的小分子RNA

ＳＥＬＥＸ法筛选特异亲和淀粉的小分子ＲＮＡ＊王琛金由辛＊＊王德宝（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海２０００３１）关键词ＳＥＬＥＸ;２．５ＳＲＮＡ;兔肌糖元分枝酶指数式富集法配体进化,即ＳＥＬＥＸ［１］（ｓｙｓｔｅｍ－ａｔｉｃ...     

安捷伦科技与Caliper科技联合推出最新型的RNA6000Pico芯片实验室试剂盒辅助癌症研究

该芯片实验室试剂盒可用于微量采样的ＲＮＡ分析以及极少量ＲＮＡ样品的完整性分析全球领先的跨国高科技公司安捷伦科技 (ＮＹＳＥ :Ａ)和Ｃａｌｉｐｅｒ科技公司 2 0 0 2年 12月宣布推出名为ＲＮＡ 6 0 0 0Ｐｉｃｏ的芯片实验室试剂盒 ,用于总ＲＮＡ和信使ＲＮＡ样品的自动质量控制分析。同ＲＮＡ 6 0 0 0Ｎａｎｏ芯片试剂盒相比 ,ＲＮＡ 6 0 0 0Ｐｉｃｏ灵敏度提高了 2 5倍 ,因而在临床微量采样技术的样品分析中非常有用 ,比如在癌症研究中 ,可用于比较肿瘤组织与相邻组织的基因表达差异。虽然现在的研究手段能够成功地分离单个细胞 ,并从…     

苎麻不同组织总RNA的有效分离

从植物组织中提取总RNA是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提,通过选用5种不同的试剂,我们找到一种新的RNAplant分离试剂,可以很有效的提取苎麻叶、茎皮、雌花、果的RNA,且质量很好,可以进行cDNA的合成和RT—PCR等下游实验,并对不同试剂提取和多糖、多酚的去除进行了讨论．