苎麻不同组织总RNA的有效分离

从植物组织中提取总RNA是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提,通过选用5种不同的试剂,我们找到一种新的RNAplant分离试剂,可以很有效的提取苎麻叶、茎皮、雌花、果的RNA,且质量很好,可以进行cDNA的合成和RT—PCR等下游实验,并对不同试剂提取和多糖、多酚的去除进行了讨论．     

一种有效的花粉线粒体RNA分离技术

线粒体有自己的基因组和独特的表达系统,对其研究可以了解ＲＮＡ编码及核与线粒体之间协同调控等机制,进而阐明呼吸作用、植物细胞质雄性不育等生命现象［１,２］。因此线粒体基因组结构及其表达是目前生命科学研究中一个很活跃的研究领域。由于花粉是世代交替的关键阶段,雄性不育仅表现花粉不育而其他营养器官正常,因此研究花粉线粒体基因表达显得尤为重要。花粉线粒体基因表达研究中重要的步骤之一是分离线粒体ＲＮＡ（ｍｔＲＮＡ）。目前仅见营养器官ｍｔＲ－ＮＡ［３］,而未见花粉（特别是不同发育时期的花粉）ｍｔＲＮＡ提取技术…     

一种快速分离真核细胞RNA的方法

以改良的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿法从真核细胞中制备RNA,经琼脂糖微电泳检查,可清楚见到三条真核细胞核糖体RNA带(28S,18S,和5S);经Norther blot检测可见未降解的1.9Kb肌动蛋白mRNA杂交区带。该法具有快速、简便、产率和纯度均较高等优点。     

蒙古沙冬青总RNA提取与mRNA分离方法的研究

蒙古沙冬青是分布于我国西北荒漠区的常绿旱生阔叶灌木,因其富含多糖和多酚等次生代谢物质,用常规RNA提取方法难以从中获得高质量总RNA.本研究通过在热酚法的RNA提取液中加入高浓度的KAc和β巯基乙醇,从该植物的不同样品中提取到高质量总RNA,并用筛选到的合适试剂盒分离到高纯度的mRNA.所得到的总RNA和mRNA已被成功应用于基因克隆和SMART全长eDNA文库的构建.     

酵母RNA酶解液中核苷酸分离技术研究

本文着重研究了利用离子交换层析技术从酵母RNA的酶解液中分离核苷酸的现实性与可行性,探讨分离核苷酸的最佳工艺条件。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

不同品种香蕉内生菌分离及广谱拮抗菌的筛选

旨在探究抗病品种与易感品种香蕉的健康株和病株内生菌与其中广谱拮抗菌的主要分布规律,并对广谱拮抗菌进行拮抗活性的测定。以样品根、球茎、假茎、叶为材料分离培养内生菌,在实验室条件下,筛选对供试的10种香蕉致病菌均有良好拮抗活性的菌株并测定它们的拮抗活性,对活性最强的菌株进行形态学、16S rDNA序列同源性分析。结果显示,分离得到内生菌438株,其中细菌240株,放线菌142株,真菌56株。抗病品种南天黄病株中分离得到的内生菌最多,共计128株。内生菌数量在香蕉植株中的分布呈现规律为:根部球茎部假茎部叶部。内生真菌在各香蕉种病株中的分布最广泛。筛选出具广谱活性的放线菌10株、细菌2株。其中内生放线菌菌株041的广谱拮抗活性最强,最大抑菌带宽为28.13±1.89 mm。对广谱拮抗内生放线菌菌株041、04-1、19-1、03A-1进行的形态学和16S rDNA序列分析表明,它们属于链霉菌属。     

银杏不同组织的总RNA提取方法的改进

方法:采用改进的CTAB法高效地从富含多糖、多酚类化合物的银杏的根、茎、叶和果实四个组织中提取RNA。结果:抽提的不同组织的RNA经电泳检测,可见28S和18S两条清晰的主带,且28S rRNA在亮度上均为18S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;根、茎、叶、果所提的RNA的经紫外吸收检测得到A260/A230分别为1.9、1.4、2.1、1.7,测得A260/A280分别为1.8、2.0、2.3、1.8,鲜重分别达到78μg/g、69μg/g、150μg/g、90μg/g;通过RT-PCR及凝胶检测,得到了银杏看家基因18S基因的约150bp清晰的条带,从而进一步检测提取RNA的质量。结论:提取的总RNA纯度高,质量好,足以为研究提供RNA材料。     

一种适合从柑橘果皮提取总RNA的方法

柑橘果皮由于富含果胶、酚类物质等干扰RNA分离的物质,较难提取到纯度高的RNA。本试验建立了一种适于从柑橘果皮提取RNA的方法,从脐橙和蕉柑两种柑橘的果皮提取总RNA,经凝胶电泳、紫外分光光度法检测所提RNA的品质。研究结果表明,该法所提RNA条带清晰、无降解。OD260/OD280接近2.0,具有较高的纯度。RT-PCR试验结果进一步表明,该法提取的RNA纯度高,完全能够用于后续的分子生物学研究。     

日本结缕草总RNA提取和mRNA分离方法的优化

介绍了分别以日本结缕草根部、叶部、匍匐茎等为材料的总RNA提取的改良步骤,质量和浓度检测及其注意事项,并采用Promega公司的Poly ATract Systems Ⅲ(Z5300)试剂盒进行mRNA分离,尽管这一方法成熟可行,但仍存在洗脱体积较大,常需先沉淀浓缩后才能进行后续试验(如cDNA合成),在制备少量mRNA时回收率较低等问题。据此,对mRNA分离方法作了改良,介绍了mRNA分离的优化步骤,通过增加体系形成了一种更适合于日本结缕草mRNA分离的方法,从而为日本结缕草的分子生物学研究提供基础资料。结果证明所提取的总RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到日本结缕草cD-NA文库的构建。     

流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

流感病毒的RNA词是由3个亚基组成的复合物,这3个亚基统称为3P蛋白,分别由2个碱性亚基PBI、PBZ和1个酸性亚基PA组成。在病毒体内,3P与IUqA形成较紧密的3P－RNA复合物,该复合物又往往与NP形成核蛋白体（ribonu－cleoProteinRNP）。3P与RNA及3P－RNA与NP之间结合都比较紧密,三者之间不易被分离。本文用不同介质组合的分步密度梯度超速离心法成功地将3P与RNA及NP分离开来,获得了较纯的3P蛋白,为进一步研究流感病毒RNA铜的结构和功能奠定了基础。1材料与方法1．亚病零培养及病毒粒子分离4k．xH验所用病毒为甲型流感病…     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

从棉铃虫体中提取总RNA的一种有效方法

昆虫组织细胞中含有大量的RNA酶 ,在提取其RNA时 ,防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键。目前提取动物组织细胞总RNA的方法主要采用“异硫氰酸胍 酚 氯仿抽提”一步法操作 ,但从昆虫组织细胞中提取RNA尚无明确的方法。本实验根据昆虫组织细胞中RNA的分子结合其它蛋白等次生物质的特性不同 ,适当的调整该方法 ,从棉铃虫中提取到了完整、无降解、纯度高的RNA ,适用于Northern杂交和cDNA合成等分子生物学操作     

细菌RNA分离试剂盒

Bioscience Technology 2003年7月31页报道：美国Amersham Biosciences公司最近推出GenomiPhi^TM DNA扩增试剂盒。利用这种试剂盒可从有限的生物材料制备高质量的DNA。这是一种简单的等温扩增技术，它不需要使用热循环器。原材料可以是来自全血、颊面拭子、细胞印迹纸、     

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

介绍一种简便的RNA分离制备方法

用酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿混合物,从人外周血白细胞、组织培养的细胞株及人胚组织中分离制备总RNA,所得产品纯度高,未降解,方法简便,可以同时操作较多的样品。此法确是一种较好的RNA分离制备方法,值得推广。