Ri质粒诱导的植物发根培养系及其应用

阐述了具Ri质粒的发根农杆菌的生物学特性,介绍了毛状根的诱导、筛选及增殖培养的具体方法,提出了农杆菌转化植物细胞的影响因素,对国内外利用植物发根培养系进行次生代谢物质生产方面的研究进行了综述,并对Ri质粒诱导的发根培养系的应用作了展望。     

不同培养条件对大苞栝楼发根诱导的研究

本文采用发根农杆菌R1000和R1601对大苞栝楼无菌苗子叶和茎进行了发根诱导,通过对影响大苞栝楼发根诱导不同培养条件的研究,建立发根培养体系.实验结果表明当温度控制为25℃、无光条件、活化菌的光密度值OD₆₀₀为0.7、溶液的pH维持在6.0及无2.4-D激素的条件下能够有效地诱导大苞栝楼发根,由发根中农杆碱的检测证明,发根农杆菌中的Ri质粒中T-DNA的在无菌苗中获得了转导,为大苞栝楼发根培养体系的建立奠定基础.     

人参发根的诱导及其适宜培养条件的研究

利用发根农杆菌A₄菌株在人参根外植体上直接诱导产生发根。在1/2MS固体培养基上建立起发根离体培养系,经连续多代的培养,发根仍保持旺盛生长状态。PCR扩增结果表明,发根农杆菌R_I质粒的rolC基因已在人参发根基因组中整合并得到表达。液体培养基中发根生长速度约为固体培养的2倍。经对发根中人参皂苷含量及比生长速率的测定,筛选出高产发根系R9923。利用HPLC法测定了R9923发根系中单体皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd的含量,人参总皂苷含量达15.2mg/g。确定1/2MS培养液（30g/L蔗糖）、摇床转速110r/min、每２周更换一次培养液、继代培养时间4周,为人参发根生长适宜条件。探讨了培养容积、发根初始接种量以及分级放大培养工艺对发根大规模生产过程中生物产量和皂苷含量的影响。     

细胞和分子技术在甘薯茎线虫病抗病育种中的应用

甘薯茎线虫病是我国北方甘薯薯区的重要病害之一。为进一步研究甘薯茎线虫病育种中线虫和甘薯的抗感关系,利用细胞培养技术建立发根农杆菌转化甘薯发根,用该发根培养马铃薯腐烂线虫,构建植物寄生线虫培养和抗性鉴定的技术平台;用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分子标记技术筛选甘薯茎线虫病抗感品种的分子标记,并对发根培养马铃薯腐烂线虫体系和分子标记辅助选择抗甘薯茎线虫病品种技术进行了展望。     

Ri质粒诱导的植物发根培养系及其应用

本文阐述了具Ri质粒的发根在杆菌的生物学特性,介绍了毛状根的诱导、筛选及增殖培养的具体方法,提出了农杆菌转化植物细胞的影响因素,对国内外利用植物发根培养系进行次生代谢物质生产方面的研究进行了综述,并对Ri质粒诱导的发根培养系的应用做了展望。     

发根农杆菌介导的药用植物遗传转化研究进展

发根农杆菌介导的植物遗传转人旨近年来发展起来的一项新的植物遗传转化技术。本文就发根农杆菌Ｒ１闰的结构、发根农杆菌介导的植物遗传转化的方法和步骤,以及运用这一技术获得药用植物次生代谢产物的研究进展作一全面介绍。     

毛状根培养与植物次生代谢物的生产

综述了发根土壤杆菌诱导植物产生毛状根的方法及毛状根的特点,重点介绍了国内利用毛状根培养技术生产植物次生代谢物的最新研究进展。     

发根农杆菌介导的药用植物遗传转化研究

利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)诱导药用植物产生的毛状根具有生长迅速,合成能力强和遗传性稳定等优点,已成为一种新的培养系统。就影响发根农杆菌介导的药用植物遗传转化的因素作一概述。     

发根土壤杆菌在植物次生代谢物生产中的应用与进展

发根土壤杆菌 (Agrobacteriumrhizogenes)是一类极具应用前景的微生物资源 ,就发根土壤杆菌Ri质粒结构、功能、侵染和致病过程及其宿主、转化体特性进行了概述 ,并详细讨论了发根土壤杆菌在生产植物次级代谢产物方面的应用与进展及相关影响因素 ,同时还简单介绍了工业化生产的培养方法、生物反应器种类及存在的问题与困难。     

Ri质粒转化的青蒿发根培养及青蒿素的生物合成

用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)转化药用植物青蒿(Artemisia annua L．)并建立了发根体外培养系统。Southern杂交、NPT Ⅱ酶的检测证明Ri质粒的T—DNA转移并整合到植物的核基因组上。在发根培养系统中,检测了青蒿的重要次生代谢物一青蒿素的含量,检测了不同理化因子对发根生长及青蒿素含量的影响。结果表明：光照(日光灯,12h光周期,20001x)有利于次生产物青蒿素的积累。培养基的pH值为5．4。蔗糖浓度为3％不仅促进发根的生长,而且促进青蒿素的积累。低浓度萘乙酸(NAA)对发根生长具有促进作用,但抑制青蒿素的合成。赤霉素GA,对发根的生长及次生产物的合成都具有促进作用,其最适浓度为4．8mg／L。     

影响毛状根生长及其次生代谢产物合成因素的研究进展

利用发根农杆菌转化药用植物,并对毛状根进行离体培养,大量提取重要成分,是药用资源植物可持续发展的有效途径之一。讨论了毛状根的诱导、影响毛状根生长及次生代谢产物形成的因素、利用毛状根培养技术生产植物次生代谢物的最新研究进展。     

纤维植物罗布麻发根的诱导及植株再生

利用3种发根农杆菌(LBA9402.R601,和R1000)转化纤维植物罗布麻无菌种子苗的根茎叶不同外植体部位,首次诱导其生成发根并实现了直接由发根途径的植株再生.罗布麻发根诱导与所用的发根农杆菌菌株,外植体部位及光周期密切相关.发根农杆菌LBA9402感染罗布麻的根外植体,实现了最高转化率达100%.与LBA9402及R601相比,被发根农杆菌R1000感染的根外植体适合在黑暗环境下培养.其诱导生成的发根密度可达平均每个外植体22条.在不加激素的1/2 MS培养基上,LBA9402和R601诱导产生的发根可以诱导生成不定芽,不定芽诱导率达20%.不定芽切下后,在不加激素的1/2 MS培养基上2周内可以诱导生根.通过聚合酶链式反应(PCR)对发根及再生植株进行了鉴定,证明发根农杆菌的T-DNA插入了植物的基因组.为罗布麻的分子育种建立了稳定的转化及再生体系,为下一步通过转入外源基因改善其农艺性状奠定了基础.     

甘薯、胡萝卜发根单寄主培养体系繁殖马铃薯腐烂线虫的研究

利用发根农杆菌A4转化甘薯品种徐薯18和胡萝卜品种天红2号的发根,建立甘薯茎线虫病病原线虫(马铃薯腐烂线虫)的单寄主培养体系。通过该体系对马铃薯腐烂线虫的行为进行观察以及繁殖情况进行调查。结果表明:(1)马铃薯腐烂线虫在甘薯和胡萝卜发根上都能正常发育和繁殖,完成其生活周期;(2)培养4周和8周后,在甘薯发根上线虫繁殖倍数分别为2.6和50.6倍;在胡萝卜发根上线虫繁殖倍数分别为1.7和9.9倍;相同培养时间内,线虫在甘薯发根上的繁殖数极显著高于在胡萝卜发根上的繁殖数。(3)利用发根系统繁殖马铃薯腐烂线虫,便于研究其行为,在显微镜下可以直接观察到线虫在发根上活动情况,这对研究发根和线虫相互关系十分有利。基于上述结果,初步证实构建甘薯发根单寄主培养体系繁殖马铃薯腐烂线虫是可行的,且优于胡萝卜发根繁殖马铃薯腐烂线虫体系。     

利用栝楼发根生产天花粉蛋白的研究

利用发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes)菌株 R1 60 1 ,成功地从药用植物栝楼 (Trichosantheskirilowii Maxim.)中诱导出发根并建立了栝楼发根的离体培养系统。通过蛋白质印迹法对栝楼发根的天花粉蛋白进行了鉴定。利用 SDS- PAGE和 TLC扫描 ,测定出每克鲜重栝楼发根中天花粉蛋白的含量可达 8.1 6mg。     

发根农杆菌介导的长春花高效转基因体系的建立

以长春花幼叶为外植体建立了发根农杆菌介导的长春花高效遗传转化体系,主要技术环节为：用携带有基因表达载体的发根农杆菌R1000侵染幼嫩叶片,侵染的叶片外植体与发根农杆菌共培养2d,外植体移至除菌培养基除菌培养2～3周,切取外植体上诱导长出的毛状根置于筛选培养基上培养1-2周,最后对筛选出的阳性毛状根无性系进行扩繁。筛选出的阳性毛状根经GUS染色和PCR分子鉴定表明,该方法的发根诱导率和阳性转化率分别为82％±2．49％和100％。该转化方法所获得的毛状根系数量大、质量高、遗传稳定且所需时间短,明显优于现有的长春花遗传转化技术,是长春花遗传转化的高效便捷体系。     

不同理化因子对发根农杆菌Ri质粒转化骆驼刺的影响

骆驼刺苗茎切段有很强的离体培养再生能力,用野生型发根农杆菌Ａ,菌株转化骆驼刺度轩茎段,并建立了发根转化体的培养体系。高压纸电泳显示转化组织可合成冠瘿。试验不同试验经条件及理化因子对提高转化率和加快发根生长的影响。结果表明,经过３天预培养及０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇１２ｈ高渗处理后培养于ＭＳ培养基中可有效提高转化率。而２％～３％蔗糖,３ｍｇ／Ｌ,ＧＡ３,１０μｍｏｌ／ＬＣｕ＾２＋,１０ｍｇ／ＬＡｇ＾＋,     

基于发根培养体系的甘薯品种抗线虫特性鉴定研究

利用发根农杆菌诱导的甘薯发根体系,鉴定甘薯品种抗线虫的特性。试验在甘薯品种徐薯18、栗子香和鲁78066诱导的发根体系上,接种马铃薯腐烂线虫,六周后调查发根繁殖线虫情况及线虫侵染发根情况,然后评价它们的抗线虫特性。结果表明:培养六周后,线虫在徐薯18、栗子香和鲁78066发根上繁殖倍数分别为8.82,0.76和0.70;在徐薯18发根上观察到多处线虫侵入位点,在栗子香和鲁78066发根上只观察到一处线虫侵入位点;基于以上结果,鉴定徐薯18为易感线虫病品种,栗子香和鲁78066为抗线虫病品种,徐薯18和鲁78066的鉴定结果和发病地自然诱发鉴定结果相一致,栗子香不同于发病地自然诱发鉴定结果。鉴定结果表明:用不同品种的甘薯发根作鉴定其抗线虫特性,具有体系简单、直观方便、重复性好以及不受自然环境影响等优点,进一步完善可以作为植物对线虫病抗性鉴定新的体系。     

何首乌毛状根的诱导和培养(简报)

发根农杆菌（Agrobacteriumrhizogenes）侵染后,通过其Ri质粒的T－DNA片段在植物细胞基因组中整合,诱导形成毛状根（hairyroot）l’l。利用生长迅速、生产效能高而稳定的毛状根培养物生产药用植物的次生物质,已有不少报道「一习。但未见发根农杆菌对何首乌遗传转化的报道。何首乌（Polygonu。。ltij7orumThunb．）为常用中药,其块根为乌须发、悦颜色、益精养血和抗衰老的要药。本文报道发根农杆菌对何首乌遗传转化的实验结果,为今后用毛状根培养物生产何首乌的次生物质打下基础。l材料和方法细菌菌株及培养发根农杆菌（Agrobacteri…     

发根农杆菌的Ri-质粒转化和赛莨菪的发根培养

将赛莨菪（Scopolia Iurida)的无菌苗被含有Ri-质粒的发根农村菌（Agrobacterium rhizogenes)感染后,诱导出发根（hariy root)将发根分离,除菌后,在不含激素的琼脂或液体MS培养基上培养,发根能产生正常植物体中含有的莨菪碱和东莨菪碱等生物碱,在发根培养物中检测到agropine和mannopine,说明发根农杆菌Ri-质粒的T－DNA部分已转化到赛菪莨细胞的DNA中。     

发根农杆菌的Ri-质粒转化和赛莨菪的发根培养

将赛莨菪（Scopolia Iurida)的无菌苗被含有Ri-质粒的发根农村菌（Agrobacterium rhizogenes)感染后,诱导出发根（hariy root)将发根分离,除菌后,在不含激素的琼脂或液体MS培养基上培养,发根能产生正常植物体中含有的莨菪碱和东莨菪碱等生物碱,在发根培养物中检测到agropine和mannopine,说明发根农杆菌Ri-质粒的T－DNA部分已转化到赛菪莨细胞的DNA中。