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1.
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带:分子量为38.5Kd的主带和分子量为40.0Kd的次带。配基结合免疫印迹和125I-hCG 相似文献
2.
大鼠卵巢绒毛膜促性腺激素受体在CHO中的表达和扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了利用二氢叶酸还原酶放大系统将大鼠LH/hCG受体(记为F-hCGR)及其胞外肽段(记为T-hCGR)在中国苍鼠卵巢细胞(CHO)中的表达。SDS-PAGE分析表明,F-hCGR为一条蛋白质带,其表观分子量为92kd,而T-hCGR为35kd和37kd两条带。表达受体对其配基hCG表现出高的亲合力,F-hCGR的解离常数为7×10-9mol/L,T-hCGR为6.4×10-9mol/L。表达F-hCGR的转染CHO细胞可结合125I-hCG,而表达T-hCGB者不结合125I-hCG。这提示F-hCGR主要存在于细胞质膜表面上。表达F-hCGR的转染CHO细胞能刺激。cAMP的形成,而表达T-hCGR者不能刺激cAMP形成。免疫荧光定位结果表明,T-hCGR主要分布于质膜的细胞质侧以及胞内其他一些细胞器膜上。用免疫亲和层析可以得到纯化的T-hCGR。 相似文献
3.
人肿瘤坏死因子受体I死亡域融合蛋白基因的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过设计4个引物进行重叠PCR,由此克服了人肿瘤坏死因子受体I死亡域与氯霉素乙酰转移酶(CAT)的融合蛋白基因(DdLcat)。该融合蛋白基因经测序,证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒pLT10DdLcat转化大肠杆菌后发酵,IPTG诱导2h,SDS-PAGE测定DdLcat蛋白质的分子量为39kD。Western印迹实验进一步作了鉴定。表达产物大部分为包涵体。DdLcat经Q-Sepha 相似文献
4.
从化脓性链球菌的染色体DNA分离得到的目的基因片段定向插入载体Pbv220中,获得有目的基因插入的重组质粒PbvSK。双脱氧链终止法手工测序和Beckman自动测序仪分析Rsk基因的全长序列,测序结果表明我们所获得的Rsk基因与文献报道的基本一致。重组质粒PbvSK转化受体菌E.ColiDH5α株,温敏诱导后表达一个分子量约47kDa的特异蛋白,其表达量为60%。表达产物以包涵体的形式存在,包涵体经过洗涤、溶解和纯化后,最终纯度达到95%以上。复性的重组蛋白用体外血块溶解法测定生物活性,结果表明我们所获得的Rsk蛋白具有较好的溶解血块的活性,其比活性为1.3×105u/mg。 相似文献
5.
将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中,在粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中进行表达。SDS-PAGE分析结果表明,表达产物分子量为41kD左右,Western印迹分析结果表明,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在41kD处可见表达条带,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv-CS蛋白能特异性结合癌胚 相似文献
6.
可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体(shTNFR55)在变铅青链霉菌中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从 He La 细胞中提取总 R N A,采用反转录 P C R 技术,从该总 R N A 中扩增了约 530 bp 的sh T N F R55 基因的 c D N A,并克隆至质粒 p U C m el中酪蛋白酶 m el Cl 分泌信号肽编码序列的下游,构建成含融合基因 m el/ T N F R 的重组质粒 p U C m el/ T N F R.把融合基因 m el/ T N F R 插入链霉菌表达质粒 p I J459 的多克隆位点,使之位于 erm 强启动子的下游,得到重组表达质粒 p I J459 m el/s T N F R.经 Southern 杂交证明重组质粒 p I J459 m el/s T N F R 插入了 s T N F R55 基因片段.对重组菌株 Streptom yces lividans(p I J459 m el/s T N F R)的发酵液进行 S D S P A G E、受体配基杂交( Ligand blot)分析、对 T N F 敏感的 L929 细胞的细胞毒性中和试验表明,可溶性肿瘤坏死因子受体 s T N F R55 在链霉菌中得到了分泌表达,表达产物具有生物学活性.表达产物的分子量约在 26~28 k D 之间. 相似文献
7.
t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
应用PCR方法,在tPAcDNA5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽,与酵母表达载体pPIC9重组,构建表达质粒pSTEY,利用LiCl转化法转化酵母菌YS108,在MM和MD平板上筛选表型,PCR筛选tPAcDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆,阳性克隆经甲醇诱导表达后,用SDSPAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右,用酪蛋白板溶圈法测定tPA的活性。Muts表型菌表达产物活性最高为2500IU/ml,Westernblot证实表达产物具有天然tPA分子的免疫原性。 相似文献
8.
本文综述M-CSFR家族受体M-CSFR、Kit、PDGFR等与其相应配基M-CSF、SCF及PDGF等相结合的区域的研究进展;讨论了该家族受体的二聚化区域;关提及K-受体的结合方法-Scatchard分析。 相似文献
9.
产β1 ,4D甘露聚糖酶的诺卡氏菌形放线菌( Nocardioform actinomycetes) 菌株NA3540 ,发酵培养72h ,发酵液离心去菌体,上清经硫酸铵沉淀,95 % 乙醇沉淀,CMSephadex A50 柱层析、羟基磷灰石柱层析、DEAE纤维素离子交换及Sephadex G100 分子凝胶过滤柱等步骤,β甘露聚糖酶的比活提高了137 倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品。经SDSPAGE 和凝胶过滤法分别测定β甘露聚糖酶分子量为41kD和40kD,证明该酶为单聚体;用等电聚焦电泳测得其等电点为4-8 ;经氨基酸组成分析,发现蛋白中有较高含量的Gly、Asp、Ala 及Glu 残基。该酶的最适反应温度为75 ℃,在不超过60 ℃时酶活较稳定;酶反应的最适pH 为8-0 ,pH 稳定范围为6-5~11-0 。重金属离子Hg2+ 、Cu2+ 、Pb2+ 、Fe3+ 、Co2+ 、Zn2+ 能强烈抑制该酶活性,而Mn2+ 、Fe2+ 、Ag+ 对该酶有部分的抑制作用,低浓度的Na+ 、K+ 、Li+ 对该酶基本没有影响。 相似文献
10.
大鼠卵巢促黄体激素受体膜外微区(1-341)在昆虫细胞中的表达及其性质的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带:分子量为38.5Kd的主带和分子量为40.0Kd的次带。配基结合免疫印迹和~(125)IhCG结合印迹分析表明,表达产物R341具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Scatchard分析结果显示,重组受体R341和配基hCG有较高的亲和力,与hCG反应的Kd为5.68×10~(-10)mol/L。 相似文献
11.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。 相似文献
12.
为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Hca-F和Hca-P进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的5种凝集素(ConA、WGA、UEA、SBA、PNA)结合糖蛋白谱的对比分析.结果表明:高、低转移两株细胞的SDS-PAGE谱基本相同;ConA特异结合糖蛋白共有5种(~72,80~90,~104,~150,~200kD);其中较明显的差异为~72kDConA特异结合糖蛋白,它在Hca-P细胞的表达明显高于Hca-F细胞.WGA特异结合糖蛋白1种(~150kD),在Hca-P细胞的表达略高于Hca-F细胞.此外,实验发现两种性质未明的蛋白质(~79,~130kD),后者在Hca-P细胞的含量明显高于Hca-P细胞.结果提示Hca-F和Hca-P细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联. 相似文献
13.
烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA在大肠杆菌中的表达 总被引:8,自引:0,他引:8
对经过修饰的烟草Ⅰ类几丁质酶(Ⅰchitinase,ⅠChi)和β1,3葡聚糖酶(Ⅰglucanase,ⅠGlu)cDNA分别构建了原核表达载体,并转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导表达,SDSPAGE法证明表达产物ⅠChi和ⅠGlu的分子量分别约为30kDa和31kDa,在菌内以包涵体形式存在。经包涵体的收集、洗涤、裂解和复性,两种表达产物在体外均表现出较强的抑病原真菌活性,且ⅠChi的抑菌活力大于ⅠGlu,二者具有很强的体外抑菌协同性 相似文献
14.
抗癌胚抗原单链抗体基因的构建及高效表达 总被引:8,自引:2,他引:6
采用重组PCR技术将已获得的抗癌胚抗原鼠源单克隆抗体E7B10重,轻链可变区基因经(Gly3Ser)3编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因,并在大肠杆菌中高效表达了单链抗体C端的融合蛋白,其表达量达到菌体总蛋白的20%,SDS-PAGE和Western印迹图谱显示表达产物分子量为27kD,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。 相似文献
15.
采用PCR方法引入编码氨基酸残基序列为GGGGSGGGGS的镜头,将sTNFR1 cDNA与人IgG:Fc cDNA片段连接,构成融合基因fusion 1。将fusion 1克隆在pBSⅡ SK^+载体上。测定序列后,转入pRSET-B表达载体,在大肠杆菌中表达,得到分子量为45kDa的蛋白,超声破碎后电泳证明表达的蛋白为包涵体,经免疫蛋白印迹证实为我们构建的融合蛋白。 相似文献
16.
人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达 总被引:16,自引:1,他引:16
用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),以人胎肝组织总RNA为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,ZnSOD)的cDNA,并进行序列分析,将该hCu,ZnSODcDNA重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDSPAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为19kD的蛋白质,与抗人SOD多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的30%,具有特异性SOD酶活性,酶活力可达1797u/ml培基。 相似文献
17.
以 P R R S V 弱毒株膜蛋白( M) 和核衣壳( N) 蛋白基因为模板,设计的一对含有 Eco R I 和 Bam H I酶切位点的引物,通过 R T P C R 扩增出一约900 bp 的 M N 基因片段,将此基因片段成功克隆于高效表达载体p B V220 ,构建成重组质粒p B V M N,导入大肠杆菌 D H5α,经温敏诱导,成功地表达了 M N 基因。表达产物经 S D S P A G E 电泳和 Western blot 印迹分析,其分子量约34 k D,与兔抗 P R R S V 高免血清发生反应,经光密度扫描分析,表达产物量占菌体总蛋白的12 % 。该研究为 P R R S 基因诊断抗原的研制奠定了基础 相似文献
18.
对酵母NMT基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为p15A并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒pKZMT,将其与表达质粒pCZmCα1共转化进大肠杆菌BL21(DE3)F′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中pCZmCα1表达底物蛋白小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α(PKA-mCα)。SDSPAGE及Westernblot分析表明,双质粒表达系统中,PKA-mCα都得到了稳定的高表达,尤其在23℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母NMT被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。[3H]myristicacid标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组PKA-mCα被豆蔻酰化修饰。 相似文献
19.
2-酮-L-古龙酸还原酶分离纯化及其理化、酶学性质的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从发酵L山梨糖的Gluconobacteroxydans和Bacilusmegaterium2980混和菌株的无细胞抽提液中分离到了2酮L古龙酸还原酶(KGR),测得其分子量为90kDa。动力学性质研究表明它为一个典型的MichaelisMenten氏酶,对2-酮-L-古龙酸作用的Km值为3.42×10-3mol,最适作用pH为6.5,最适作用温度为30℃。2-酮-L-古龙酸还原酶的合成不受L-山梨糖和2-酮-L-古龙酸的诱导,故推测2-酮-L-古龙酸还原酶是Gluconobacteroxydans的一个组成酶。 相似文献
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日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达. 相似文献