MicroRNA-34a抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的研究

该文采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的方法将microRNA-34a转染入体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5。应用BrdU法、细胞平板克隆形成实验检测转染microRNA-34a后对细胞增殖的影响,发现M23和SP6.5细胞增殖明显被抑制(P<0.01);并利用流式细胞技术检测转染microRNA-34a后细胞周期的变化,发现细胞停滞于G_1期;同时检测转染microRNA-34a后细胞caspase-3/7酶的活性,发现无明显改变。另外,Real-time PCR检测表明阿霉素处理后M23、SP6.5细胞中microRNA-34a的表达量上调(P<0.01)。用阿霉素处理转染microRNA-34a的M23、SP6.5细胞,检测caspase-3/7酶活性的改变,发现caspase-3/7酶活性显著增加(P<0.01)。本研究表明microRNA-34a通过抑制细胞周期来抑制体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,能够增加细胞对阿霉素的敏感性,但不直接诱导细胞凋亡。     

溶瘤腺病毒靶向杀灭葡萄膜黑色素瘤的实验研究

葡萄膜黑色素瘤是成人最严重的原发性恶性肿瘤之一.传统的治疗方法,包括手术、放射治疗和化学治疗效果都不是很理想.溶瘤腺病毒H101,能够特异性地在p53突变的肿瘤细胞中复制并杀伤肿瘤细胞,同时对正常细胞影响较少,且已由中国国家食品药品监督管理总局批准上市.为了研究H101对葡萄膜黑色素瘤的治疗效果,通过体外感染葡萄膜黑色素瘤细胞,发现H101能够显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,抑制细胞周期,而对正常的ARPE-19细胞没有影响.在体内实验中,建立了SP6.5细胞的荷瘤小鼠模型,在H101治疗后抑制了肿瘤的生长,延长了动物寿命.上述结果表明,溶瘤腺病毒H101治疗葡萄膜黑色素瘤是一种可行的方法.     

波形蛋白在细胞中的潜在功能

波形蛋白(vimentin)是主要存在于间充质细胞中的一种中间纤维蛋白,近些年研究显示其作为细胞骨架成分,除具有支撑和维持细胞形态的功能外,还参与调节细胞的多种生命活动如:细胞粘附和迁移、信号转导、基因表达和细胞凋亡等。本文就近年来发现的vimentin在细胞中具有的潜在功能进行综述。     

核转录因子Foxp3在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的:检测小鼠黑色素瘤细胞中核转录因子Foxp3的表达。方法:用TRIzol试剂提取小鼠黑色素瘤细胞RNA,通过实时荧光定量PCR检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3 mRNA的表达,通过Western印迹和流式细胞术检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3蛋白的表达,通过免疫荧光检测小鼠黑色素瘤细胞中Foxp3分子的表达。结果:在小鼠黑色素瘤细胞中存在Foxp3的mRNA转录和分子表达,免疫荧光显示Foxp3定位于黑色素瘤细胞的胞核及核周部位。结论:证实了小鼠黑色素瘤细胞表达Foxp3,将为临床黑色素瘤的免疫治疗提供新的靶标和治疗策略。     

MITF与黑素细胞的发育、分化和功能调节

MITF是一种具有基本-螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链(basic-helix-loop-helix-leucine zipper,bHLHZ-ip)结构的转录因子,研究证实其在色素细胞的发育、分化和功能调节中发挥关键性作用。MITF基因突变导致色素细胞的发育缺陷与功能障碍,同时MITF与其他信号分子发生复杂的相互作用。深入研究MITF对色素细胞发育分化和功能调节的影响对色素细胞生物学的发展具有重要意义。     

整合素在细胞黏附中的生物学功能

整合素是一种跨膜蛋白,属于黏附分子家族.其主要功能是参与细胞和细胞、细胞和细胞外基质(ECM)的黏附和信号转导.整合素是含有α和β两条肽链的异源二聚体,来源不同的α、β亚基所形成的整合素具有不同的ECM结合能力.阐述了整合素的结构、生物学功能以及生理、病理学意义,并概述了其研究进展.     

丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系(10株)。PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失。Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达。薄层层析(TLC)结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。     

丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究

丙型肝炎病毒（HCV）与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系（10株）。PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失。Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达。薄层层析（TLC）结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶（UGCG）活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。     

siPGK1在调控黑色素瘤细胞对Vemurafenib敏感性中的作用及其机制

目的：研究磷酸甘油酸酯激酶1（PGK1）对BRAF^V600E突变型恶性黑色素瘤（MM）对Vemurafenib （Zelboraf^®）敏感性的影响及其机制。方法：采用分子生物学、细胞生物学、药理学相关实验方法（MTT、Western blot、FCM、Colongenic）探讨：①PGK1以及Vemurafenib对MM细胞的存活增殖能力的影响;②通过siPGK1基因增加Vemurafenib药敏感性的机制。结果：①沉默PGK1基因后再给以BRAF^V600E选择性抑制剂Vemurfenib,MM细胞系的存活率明显下降,并呈一定的剂量依赖性;②siPGK1增加MM细胞对Vemurafenib的药物敏感性与激活凋亡信号通路有关。结论：siPGK1通过激活凋亡信号通路增加MM细胞对Vemurafenib的药物敏感性,从而抑制细胞的存活和增殖能力。     

P38α/β在黑色素瘤细胞辐射应急响应中的作用

P38有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)在肿瘤的发生发展中的作用仍然存在争议。实验结果显示,P38α/β特异性抑制剂SB202190可以显著增加黑色素瘤细胞的倍增时间、降低细胞的微核率,但对γH2AX foci的形成和克隆存活率并没有明显影响。提示P38α/β可能不影响人黑色素瘤细胞的DNA损伤修复能力及细胞的辐射敏感性,而是通过提高细胞的增殖速率、增加基因组不稳定性来促进人黑色素瘤细胞的恶性发展。     

HOPS复合体蛋白在细胞自噬过程中的功能研究

自噬(autophagy)是一种溶酶体依赖性的细胞内降解途径,其主要功能是将生物大分子(蛋白质、多糖等)或细胞器(线粒体等)回收至溶酶体中并将其降解为单糖、氨基酸等小分子以重复利用。发现HOPS复合体中的两个基因vps39和vps41的缺失会导致酵母内GFP-ATG8大量积累。进一步研究表明,积累的原因是GFP-ATG8与液泡不能发生融合。而在HOPS复合体中的另外两个基因vps16和vps18缺失的情况下,自噬融合没有受到影响;在vps16和vps18双敲除的菌株中,自噬融合同样没有受到影响。该实验结果为理解HOPS复合体的功能和自噬体与液泡融合的过程提供了新的线索。     

细胞筛选平台在人类功能基因组研究中的应用

人类基因组全序列的精细图已完成,当前生命科学面临的重要任务就是如何将基因组序列信息转化为基因的功能信息,了解生命活动的分子机理,改善人类健康,为生物技术发展提供动力 . 在一系列功能基因组研究新技术中,高通量 (high-throughput) 和高内涵 (high-content) 的细胞筛选技术平台已经显示出巨大潜力,发挥着越来越重要的作用 . 通过在体外培养的哺乳动物细胞中基因过表达或抑制基因表达,分析所产生信号传导通路和 / 或细胞表型改变,可以直接发现基因功能 . 近年来一些技术上的进展,使细胞筛选平台具有微量、自动、高效、高通量,以及可以系统研究的特点,已经成为功能基因组研究的核心方法之一 . 近 2~3 年来已经出现一批成功应用细胞筛选平台进行大规模功能基因组研究的报道 . 我国在这一领域的研究也开始起步,将对我国生物技术的源头创新研究产生深远的影响 .     

Clin Cancer Res:新生物标志物可鉴别出高转移风险的葡萄膜黑色素瘤

正在一项新的研究中,美国迈阿密大学米勒医学院西尔维斯特综合癌症中心眼癌部位小组负责人J.William Harbour博士和同事们发现一种生物标志物能够鉴定出葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma)有更高风险发生转移的病人。在归类为1级的葡萄膜黑色素瘤中,含有高水平的被称作PRAME m RNA的生物标志物的病人要比含有低水平PRAME m RNA的那些病人更可能发生     

抗黑色素瘤单链抗体在大肠杆菌中的表达

单链抗体是用一段连接肽将抗体重、轻链可变区连接而成的抗体片段,大小为完整抗体的六分之一。具有分子小,免疫原性低,容易进入实体瘤周围微循环,有很强的肿瘤组织穿透力,血循环和全血廓清快,半衰期短,肾脏蓄积少,无Fc段不易与非靶细胞结合,肿瘤/正常组织分布率高,定位成像时本底低,易于基因操作和大量生产等诸多优点,成为目前基因工程抗     

细胞自噬基因Atg6在涡虫中枢神经系统再生中的功能研究

细胞自噬基因Atg6在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能缺陷影响神经发生.涡虫是研究中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出一个新的头部.因此,研究Atg6基因在涡虫CNS再生中的作用对探究自噬调控神经发生具有重要意义.本研究首次报道了日本三角涡虫(...     

Bora在细胞功能调控中的作用和机制研究进展

Aurora蛋白激酶A及Polo样蛋白激酶1（PLK在）作为重要的细胞周期调节蛋白可参与调控纺锤体组装、有丝分裂等细胞进程,但其激活机制及在有丝分裂中的作用机制仍然不是很清楚。Bora作为Aurora蛋白激酶A的结合蛋白,在果蝇和脊椎动物中功能高度保守,其主要通过结合Aurora蛋白激酶A从而调节Aurora蛋白激酶A的活性、促进PLK1的磷酸化、调节纺锤体的组装以及调控细胞周期进程等。随着对Bora研究的深入,人们对AuroraA和PLK1的激活机制以及Bora、Aurora蛋白激酶A、PLK1三者对细胞的调控也有了进一步的认识。主要综述Bora在细胞功能调控中的作用和研究机制。     

溶酶体途径在细胞自噬过程中的功能意义

溶酶体具有高度保守的异质性,是细胞自噬的关键细胞器。细胞质中的蛋白质和细胞器最终在溶酶体降解,故溶酶体在维持细胞结构和功能的平衡方面起着重要生理作用。通过自噬溶酶体途径,细胞可清除某些病原体并参与抗原呈递。细胞自噬与异噬经溶酶体密切联系。自噬过程中溶酶体功能障碍与某些疾病和衰老等相关。对细胞自噬的溶酶体途径及其功能意义作了概述。     

人细胞色素P450在大肠杆菌中的功能表达

研究人细胞色素P450（P450,CYP）在大肠杆菌中的功能表达对新药研发,临床药物治疗和药物早期ADME/T性质研究均有重要意义。异源表达人P450使用最多的宿主是大肠杆菌E.coli,然而要获得足量的有催化活性的P450仍是一个难题。结合作者近年研究,对异源表达的研究意义,P450在E.coli中功能表达的策略,高效表达的影响因素和共表达等方面做一评述,指出今后的研究应用方向。     

内皮抑素基因抗黑色素瘤细胞高转移的动物研究

目的:验证转内皮抑素基因抑制高转移性黑色素瘤细胞的转移能力.方法:将 pcDNA3.1-Endo 真核表达载体转染小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16F10,运用RT-PCR和Western-blot验证Endo的表达后,进行瘤细胞的粘附实验、体外侵袭和运动实验以及C57BL/6小鼠的皮下种植瘤和肺转移瘤试验,并进一步统计分析.结果:内皮抑素基因能明显抑制B16F10黑色素瘤细胞的粘附、体外侵袭和运动、体内成瘤以及肺转移能力,其中粘附抑制率36.4%,体外侵袭抑制率48.4%,细胞运动功能抑制率52.1%,肺转移抑制率为67.3%.结论:转内皮抑素基因能明显抑制黑色素瘤细胞的高转移能力.