3110009F21Rik基因在小鼠胚胎发育中的表达研究

目的:探讨小鼠胚胎发育过程中3110009F21Rik基因的时空特异性表达模式,为后续功能研究奠定基础。方法:对E15.5小鼠胚胎脑组织进行印记分析,检测基因的印记表达状态;应用全胚胎和组织原位杂交技术检测3110009F21Rik基因在E9.5~E15.5小鼠胚胎中的特异性时空表达模式。结果:印记分析显示3110009F21Rik基因在E15.5脑组织中为父母本等位基因双表达;原位杂交结果显示3110009F21Rik基因在E9.5~E15.5脑组织中持续表达,在E9.5~E11.5主要脏器中未检测到,但自E12.5开始在主要脏器中持续表达,随着发育进程进行,目的基因在胚胎骨骼中的相对表达水平逐步升高,至E15.5阶段大部分骨骼中都检测到目的基因表达。结论:3110009F21Rik基因在脑组织中的持续表达和表达模式的动态变化提示其可能参与胚胎发育过程中大脑神经网络的构建,其在软骨原基和软骨中的相对表达逐渐增强表明其可能参与了小鼠胚胎过程中骨的发育和形成及软骨分化。     

尼古丁影响小鼠胚胎发育的分子机制初探

目的:探讨不同剂量的尼古丁对小鼠胚胎组织器官发育的影响及其分子机制。方法:以妊娠期雌鼠为评价模型,通过皮下注射不同浓度的尼古丁,在E18.5时解剖获取胚胎并称重,同时采集各组织器官,应用HE染色观察相关组织的病理学变化,并采用qRT-PCR检测相关基因表达水平的变化。结果:与对照组相比,尼古丁对小鼠E18.5胚胎的脑、肺、肝脏、肾脏有明显损伤;qRT-PCR分析显示血管形成相关基因(VEGF-α)、神经生长相关基因(Egr-1)及细胞生长分化相关调控基因(c-FOS)有显著的表达差异,其中VEGF-α在心脏和肾脏中表达下调,Egr-1在肺和肾脏中表达上调,c-FOS在脑、心脏和肺中表达上调。结论:妊娠期母鼠注射尼古丁会对小鼠胚胎的脑、肺、肝脏、肾脏产生明显损伤,并导致VEGF-a、Egr-1及c-FOS基因表达异常。     

Gas7在大鼠斜角带核发育过程中的表达

目的研究大鼠发育过程中,生长休止蛋白7(growth arrest-specific protein 7,Gas7)在斜角带核(diagonal band nucleus,DB)的表达。方法应用RT-PCR方法、Western blot方法和免疫组织化学方法观察胚胎期16.5天(E16.5)、E20.5、出生当天(P0)、生后7天(P7)、P14、P21和2月龄(成年)大鼠DB的Gas7表达及定位。结果 RT-PCR和Western blot检测显示,在E16.5时Gas7表达最弱,其后逐渐增强,至P21时达到高峰;免疫组织化学染色显示,斜角带核水平支(horizontal limb of the diagonal band,HDB)在E16.5和E20.5时出现Gas7免疫反应阳性产物,Gas7阳性神经元出现于P0,至P21时阳性神经元数量最多,染色最深;斜角带核垂直支(vertical limb ofthe diagonal band,VDB)至P14时Gas7阳性神经元最多,P21和成年均有所减少。结论 Gas7的表达在大鼠DB发育过程中具有时间和空间上的特异性,提示Gas7可能参与大鼠DB的发育过程。     

小鼠心脏发育中组蛋白乙酰化酶GCN5和PCAF的时空表达特征

目的研究组蛋白乙酰化酶氨合成通用控制蛋白5（general control nonderepressible-5 GCN5）和p300/CREB结合蛋白相关因子（p300/CREB binding protein-associated factor PCAF）在小鼠心脏发育过程中的时空表达规律。方法选取胎龄7.5-18d、出生1d和3月成年昆明小鼠正常心脏,利用免疫组织化学法和RT-PCR或Western blot技术半定量检测GCN5和PCAF在小鼠心脏发育过程中的时空表达变化。结果1.GCN5在E7.5-E9.5心脏原基中不表达;E10.5后心内膜垫及室间隔膜部和房室瓣相对强表达,心肌组织弱表达。GCN5 mRNA在E10.5-E11.5出现高峰表达,E12.5-E15.5表达水平下降,E16.5至成年鼠期表达极低。2.PCAF在E7.5-E9.5心脏原基中广泛弱表达;E10.5后心肌膜较强表达,心内膜、房室瓣和小梁网较弱表达,室间隔肌部弱表达,室间隔膜部极弱表达;PCAF蛋白在E10.5已有相对高表达,E11.5达到表达高峰,此后表达逐渐降低,在E13.5-E15.5和E16.5-生后1d仔鼠期出现两个表达平台期,成年鼠期心脏中表达最低。结论GCN5和PCAF在发育心脏中存在不同表达分布和变化规律,表明二者均参与了心脏的发生发育过程,且二者可能与心脏的特定结构发育密切相关。     

神经管缺陷大鼠模型胚胎形态学改变及PLA2、COX-2表达

目的:研究神经管缺陷大鼠模型胚胎形态学改变及PLA2、COX-2表达.方法:16只SD雌性大鼠分为2组:第一组为正常对照组,8只,受孕后正常饲养;第二组为糖尿病模型组,8只,受孕后第6天经过尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)构建先天性神经管缺陷组大鼠.妊娠12日后取出所有胚胎做HE染色观察胚胎形态学及免疫荧光染色的方法观察PLA2、COX-2表达.结果:(1)HE染色及免疫荧光发现糖尿病胚胎的神经管形态发育明显畸形(2)免疫荧光发现PLA2、COX-2糖尿痛胚胎的表达明显降低.结论:PLA2、COX-2基因表达在SD大鼠神经管的发育过程中起着重要的作用.可能对临床治疗神经管畸形提供了一种新方法.     

IGFs系统成分在维甲酸诱导的马蹄内翻足畸形中的作用

应用全反式维甲酸(All Trans Retinoic Acid,ATRA)构建Wistar大鼠先天性马蹄内翻足畸形(Congenital Crossfoot,CCF)动物模型,以ATRA和雌激素(雌二醇)分别或联合作用于MC-3T3-E1细胞株,应用Northern印迹杂交、RT—PCR和流式细胞仪检测CCF胎鼠的头盖骨组织和MC-3T3一E1细胞中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)和胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)mRNA的表达以及细胞周期及增殖状态。研究发现,100～140mg／kg浓度的ATRA可以诱导大鼠骨骼畸形发育并产生CCF;IGFs家族基因中IGF-Ⅱ和IGFBP-6表达的调控与大鼠骨骼发育以及成骨细胞的增殖密切相关。     

Wnt3a在小鼠孤雌胚胎及正常胚胎早期着床部位的表达变化

目的研究小鼠孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎在子宫中发生着床过程时,在早期着床部位上Wnt3a信号分子的表达变化。方法运用免疫组织化学染色法比较受体子宫中的孤雌胚胎着床位点和体内正常发育胚胎着床位点上Wnt3a的表达状况。结果免疫组织化学染色结果发现:(1)在着床期怀孕第5.5天和6.5天,受体子宫中孤雌胚胎的着床位点处和体内正常发育胚胎的着床位点处,Wnt3a在两种子宫上的表达情况相似,而在两种胚胎上的表达情况不同;(2)Wnt3a信号在空怀假孕母鼠子宫上表达情况与相同怀孕期有正常胚胎着床的子宫上的表达情况相似。结论胚胎着床与否及胚胎正常与否均不影响Wnt3a在小鼠早期着床期子宫上的表达,但在怀孕第5.5天和6.5天时孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎上Wnt3a的表达有差异。     

H1N1流感病毒对小鼠胚胎发育表型的影响

H1N1流感病毒属于常见的致病性病毒。流行病学调查研究表明,新生儿表型缺陷与流感病毒感染有关,但是具体机制还不明确。为了探讨H1N1流感病毒对胚胎发育的影响,本文通过流感病毒感染孕母鼠来构建流感病毒宫内感染的动物模型,分别在胚胎发育至E14.5、E15.5、E16.5、E17.5、E18.5 d以及出生1 d后测量各胚胎的体长,并在体视镜下观察胚胎体表各血管和器官来分析胚胎外表发育的情况,然后采用阿尔新蓝-茜素红染色法观察各发育时期胚胎骨骼发育的情况。结果表明,流感病毒感染的小鼠胚胎的体长明显降低。外部器官发育的差异性可体现在眼、耳等器官,攻毒组成型稍晚,尾部异常卷曲更为严重。各骨骼发育攻毒组较对照组更迟缓,但没有出现长短肢或骨骼缺失等严重异常表型。本研究首次构建了流感病毒宫内感染的动物模型,探究了H1N1流感病毒对小鼠胚胎表型发育的影响。     

海洋酸化对马氏珠母贝胚胎和早期幼虫发育的影响

研究当前预测2100年海洋将达到的酸化程度对马氏珠母贝(Pinctada martensii)胚胎和早期幼虫发育的影响.人工受精卵置于pH=7.70的CO2酸化海水(酸化组)和pH=8.10的对照海水(对照组)中进行胚胎和幼虫发育试验.结果表明:人工受精8 h后,酸化组和对照组胚胎在各发育时期的数量分布没有明显的差异;24 h后,酸化组16.6%±12.0%发育至D型幼虫,且畸形个体百分比为48.2%±9.1%;而对照组44.8%±7.4%发育至D型幼虫,畸形个体百分比仅为18.6%±11.5%.48 h后,酸化组D型幼虫百分比23.0%±9.6%.畸形个体比例高达63.2%±14.1%;对照组D型幼虫59.4%±13.0%,畸形个体百分比仅为26.6%±14.5%;与对照组相比,酸化组中D型幼虫壳长和壳高明显偏小,而且壳长增长缓慢.试验表明,将来马氏珠母贝这类发生生物钙化的典型热带海洋贝类生物,其幼虫发育将会受到海洋酸化的不利影响.     

ERK1/2在高温致神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

目的 探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为防治NTDs的发生提供理论依据.方法 在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,应用免疫荧光染色技术,观察NTDs发生过程中p-ERK1/2在鼠胚神经上皮细胞中的表达变化.结果 对照组和实验组孕鼠在高温水浴处理后16、24h,p-ERK1/2免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后36、60h,p-ERK1/2表达部位出现了由细胞浆向细胞核的转移;高温处理后,p-ERK1/2在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱.结论 ERK1/2参与胚胎神经管的发育过程,其表达降低在高温致神经管畸形的发生中起重要作用.     

猕猴早期胚胎脑的发育与凋亡相关蛋白P53的表达

目的探讨猕猴早期胚胎脑的发育及细胞凋亡相关蛋白P53的表达.方法建立猕猴早孕模型,获取早期胚胎,采用单克隆抗体链霉素亲生物蛋白过氧化酶 (SP)免疫组织化学方法,检测P53蛋白的表达.结果在猕猴25d、40d和55d胚胎脑均检测到P53免疫反应阳性神经细胞,随着胎龄的增加,P53免疫反应阳性表达率逐渐增大.结论在早期猕猴胚胎脑发育的不同时期内P53蛋白均有表达,并在胚胎脑发育过程中表达逐渐增加,调控脑的发育.     

内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达

目的观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏发育不同阶段内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,探讨eNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。方法分别取胚龄13d（E13）、14d（E14）、15d（E15）、16d（E16）、18d（E18）组及新生组（P0）小鼠各10只,共6组。分别用免疫组化及免疫印迹方法对小鼠肾脏内eNOS表达进行定性、定量分析。结果（1）免疫组化结果显示：E14、E15组eNOS在生肾区呈阳性表达;E16组生肾区表达减弱,肾近端小管呈强阳性表达,同时远端小管及肾脏小动脉内皮也有阳性表达;E18组、P0组近端小管呈强阳性表达,远端小管呈阳性表达,髓质中的集合管eNOS表达弱阳性,而致密斑呈阴性表达。（2）免疫印迹结果显示：E14组肾脏eNOS含量较少,随后逐渐增多,PD0组eNOS含量最多。结论（1）eNOS在小鼠肾脏第14d开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高。（2）eNOS表达部位从生肾区开始,以后其表达逐渐减弱甚至消失,而肾近端小管、远端小管的表达晚于生肾区,且呈逐渐增强趋势,至出生时达到最强。这一结果表明eNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要调节作用。     

血小板源性生长因子受体α与高温致神经管畸形发生关系的研究

目的探讨PDGFR-α在高温致神经管畸形(NTDs)中的作用.方法在高温致神经管畸形动物模型上,采用免疫组织化学和图像分析技术,研究血小板源性生长因子受体α(PDGFR-α)在发育不同阶段的神经上皮中的表达,并观察高温对其表达的影响.结果在正常对照组,PDGFR-α广泛分布于神经管及其周围组织中;在高温致畸组,神经上皮中PDGFR-α的表达明显减弱,甚至不表达.结论 PDGFR-α的表达与神经管正常发育密切相关,其表达的减少可能是高温致NTDs机制中的重要环节.     

Gas7在大鼠梨状皮质发育过程中的表达

目的研究生长休止蛋白(Growth arrest-specific protein 7,Gas7)在大鼠梨状皮质发育过程中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测Gas7核酸与蛋白在SD大鼠胚胎第18.5天(E18.5)、E20.5、出生当天(P0)、生后第7天(P7)、P14、P21和成年(Adult)各时期梨状皮质中的表达。结果 RT-PCR结果显示Gas7核酸在大鼠梨状皮质各发育时期均有表达,在P14时表达最强;免疫组织化学方法显示梨状皮质在E18.5时即出现Gas7免疫阳性产物,至P7时出现清晰的Gas7免疫阳性细胞,至P14时细胞数达到峰值,免疫阳性反应最强,P21细胞数少于P14(P0.05),Adult细胞数少于P21(P0.05)。结论 Gas7在梨状皮质的表达具有时间上的差异性,提示Gas7可能在梨状皮质结构形成和功能成熟方面起着重要的调控作用。     

APPSWE转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡研究

目的探讨APPSWE转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡规律。方法取不同发育时间（P0、P7、P14、P30、P00、P180）APPSWE转基因模型鼠与同时问点对照鼠,Nissl染色观察海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法观察海马细胞内Caspase-3表达变化,RT—PCR检测Caspase-3 mRNA表达变化。结果随着小鼠的生长发育,P14时间点以后,模型组CA1区神经元Caspase-3阳性细胞密度比对照组高,RT—PCR检测结果与Caspase-3免疫组织化学结果基本一致。结论APPSWE转基因小鼠发育中的海马神经细胞过度凋亡可能与阿茨海默病的发生、发展具有联系。     

参与小鼠神经发育的mCcd1基因的组织表达

介绍了一种可能在神经发育过程中起重要调节作用的基因mCcd1在小鼠发育过程中的mRNA和蛋白质水平的表达变化。通过对新生和成年小鼠多组织免疫杂交(Western Blot)和反转录PCR(RT-PCR)检测发现:该基因在多种组织中广泛表达,但脑部显示高表达,并且新生鼠各组织表达均高于成体。小鼠11.5 d胚胎切片免疫组化实验也支持这一结果。mCcd1在神经系统发育早期的表达暗示它可能参与了神经系统的发育过程。     

白头翁汤治疗炎症性肠病的分子机制研究

目的：探讨白头翁汤治疗炎症性肠病的分子机制。方法：40只Wistar雄性大鼠随机分为5组（n=8）：正常对照组、模型组、模型＋阳性对照组（美沙拉嗪）、模型＋中药治疗组,中药治疗组又分为中、高剂量组。阳性对照组、中药治疗组分别灌胃给药。疗程结束后取大鼠结肠组织利用免疫组织化学、Western blot等方法检测Smad7及p-Smad3在各组中的表达变化。结果：模型与组相比较,阳性药物及中药组尤其是高剂量组可有效抑制Smad7的表达,同时增强p-Smad3的表达。结论：白头翁汤可能通过激活TGF-β1/Smad3信号通路从而发挥了对炎症性肠病中的抗炎作用。     

精神依赖物海洛因对大鼠胚胎发育和脑组织Bax表达的影响

目的 探讨精神依赖物海洛因对胚胎大鼠发育和大脑Bax表达的影响。方法 将受孕后的Wistar大鼠随机分为对照组和海洛因给药组(分为海洛因低、中、高剂量组)。第7天,分别给予16、32和64mg/kg的海洛因,连续给予海洛因9d,观察精神依赖物海洛因对胚胎大鼠形态结构发育的影响,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胚胎大脑组织Bax表达水平。结果 胚胎观察发现,海洛因低、中、高剂量组活胚胎总数比对照组分别减少了27.27%、37.12%和48.48%;海洛因低剂量组胚胎枕骨发育不全,胚胎出现脑膨出畸形;海洛因中剂量组胚胎枕骨、顶骨发育不全,胚胎脑膨出明显;海洛因高剂量组胚胎枕骨、顶骨、颞骨发育不全,胚胎脑膨出更为明显。ELISA检测发现,海洛因低、中、高剂量组胚胎大脑组织中Bax表达水平比对照组分别增加了11.41%、47.06%、83.74%,差异有显著性(P<0.05,P<0.01);胚胎小脑组织中Bax表达水平比对照组增加了17.16%、52.96%和90.01%,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论 精神依赖物海洛因具有明显抑制胚胎大鼠形态结构发育的作用,抑制作用随给予海洛因剂量的增加而增强,其作用机制可能与海洛因诱导胚胎组织器官Bax表达上调有关。     

精神依赖物(海洛因)对胚胎大鼠形态结构发育和小脑c-Fos基因表达的影响

为了探讨精神依赖物海洛因对胚胎大鼠形态结构发育和小脑c-Fos表达的影响, 将受孕后的Wistar大鼠40只, 随机分为对照组、海洛因低、中、高剂量组, 每组10只孕鼠。于第7天时, 分别给予32.5、65 和130 mg·kg-1的海洛因, 连续9 d, 观察该物对胚胎大鼠形态结构发育的影响, 用免疫组化法检测胚胎大鼠小脑组织c-Fos基因表达水平。结果发现, 海洛因低、中剂量组活胚胎总数比对照组分别减少15.87%和29.37%;海洛因低、中剂量组出现了多指, 脐疝, 双耳、肋骨、腰椎骨、前肢掌骨、脑发育不全等畸形胚胎; 高剂量组孕鼠未见成型的胚胎。海洛因低、中剂量组胚胎小脑皮层中c-Fos表达水平(IOD)比对照组分别增加了48.94%和95.74%(P<0.01)。结果表明, 精神依赖物海洛因能通过母体干扰胚胎表型和组织器官的发育, 诱导胚胎小脑组织细胞c-Fos基因表达, 损伤脑组织细胞的发育。     

抗生素对新生大鼠肠道免疫发育影响及双歧杆菌干预的研究

目的 研究新生大鼠口服抗生素对肠道免疫发育的影响及双歧杆菌干预的效果.方法 选用50只7日龄新生SD大鼠,每组10只,随机分为5组:对照组(A)、抗生素组(B)、益生菌组(C)、益生菌干预组(D)和生理盐水组(E).A组为空白对照,B组给予头孢克洛灌胃,C组给予双歧杆菌灌胃,D组先给头孢克洛灌胃,2h后再灌长双歧杆菌,E组每天灌以等量的生理盐水,持续2周后处死大鼠,取少许新鲜盲肠内容物粪便涂片,免疫组化方法检测末端回肠肠组织中CD4、CD8的表达和组织学观察.结果 粪便涂片结果显示:B组与其余四组相比G+b占肠道总细菌数比率明显下降,G-b及G+c占总细菌数比率明显升高(P＜0.01).组织形态学观察:C组与E组肠黏膜绒毛和腺体发育良好,上皮结构完整,排列整齐,而A组腺体发育少,绒毛高度小;B组肠黏膜绒毛和腺体萎缩,黏膜水肿,部分上皮细胞变性、坏死、脱落;D组肠黏膜绒毛和腺体排列整齐绒毛显示清楚,少部分黏膜上皮细胞脱落、坏死.组肠组织中CD4、CD8的表达:B组CD4、CD8表达程度受到抑制,灰度值增大(P＜0.05);C组与E组相比CD4、CD8表达增加,灰度值比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肠道菌群的正常定植,刺激肠道免疫系统的发育.新生大鼠口服抗生素后肠黏膜结构被破坏以及干扰肠道菌群的定植,影响肠道免疫系统的发育.长双歧杆菌的能预防抗生素引起的菌群紊乱,维持肠道黏膜的完整性,保护肠道免疫系统的正常发育.