子宫内膜异位症患者在位内膜及异位内膜中Claudin-1、Claudin-3的表达及意义

目的:探讨紧密连接蛋白claudin-1、claudin-3在子宫内膜异位症(内异症)发生发展中的作用及意义.方法:免疫组织化学方法检测正常子宫内膜、内异症患者的在位内膜和异位内膜组织中claudin-1、claudin-3蛋白质的表迭.结果:chudin-1、claudin-3蛋白主要定位于子宫内膜细胞的细胞膜/质,内异症患者的异位内膜中claudin-1、claudin-3蛋白的表达显著低于在位内膜及正常子宫内膜(P＜0.01).结论:claudin-1、claudin-3蛋白在内异症患者异住内膜中的表达明显下调,二者可能与内异症的发生发展相关.     

紧密连接蛋白Claudin-7参与调节恶性肿瘤发生发展过程的研究进展

claudin-7是构成细胞间紧密连接的重要分子,在维持细胞极性和紧密连接屏障功能方面起着重要的作用。近年来的研究发现claudin-7的异常表达与多种恶性肿瘤的发生发展有密切关系。ERK1/2等信号分子参与了调节claudin-7在恶性肿瘤细胞中的表达。本文对claudin-7分子在多种恶性肿瘤中的表达变化及相关机制进行综述。     

紧密连接蛋白claudin-4 在肾透明细胞癌中的表达及预后意义

目的:探讨claudin-4在肾透明细胞癌中的表达及与临床病理特征及预后的相关性。方法:应用免疫组织化学技术检测50例肾透明细胞癌组织及10例正常肾组织标本中claudin-4的表达情况,并分析与临床病理参数的相关性;随机选取其中4例肾透明细胞癌患者癌组织及4例正常肾新鲜组织,Western blot检测claudin-4的表达情况,并与免疫组化检测结果进行相关性分析;结合随访结果分析claudin-4的表达水平与患者无疾病生存期的关系。结果:Claudin-4在肾透明细胞癌组织中的表达显著高于肾正常组织(P<0.05),表达水平与肿瘤的直径、TNM分期、临床分期及淋巴结转移相关;Western blot结果也表明claudin-4在肾透明细胞癌组织中的表达显著高于肾正常组织(P<0.01),与免疫组化结果呈显著正相关(r2=0.748,P<0.01);Kaplan-Meier分析显示claudin-4高表达组患者的患者无疾病生存期为20.7个月,显著低于低表达组的30.8个月。COX多因素比例风险模型分析显示,claudin-4的表达不是肾透明细胞癌的独立预后因素(RR值=1.686,95%CI 0.174~16.311,P=0.652)。结论:claudin-4蛋白表达上调可能促进肾透明细胞癌的发生和发展,有可能作为肾透明细胞癌潜在的治疗靶点及影响不良预后的指标。     

整肠生对溃疡性结肠炎 小鼠肠上皮屏障的保护作用

目的探讨整肠生对溃疡性结肠炎小鼠肠道紧密连接蛋白表达以及对氧化应激反应的影响。方法选用雄性8~10周龄C57BL/6小鼠40只,随机分为4组:对照组、模型组(3%DSS)、5-ASA组(3%DSS+5-ASA 200mg/kg灌胃)和整肠生组(3%DSS+联合整肠生及5-ASA灌胃),每组10只,造模7d。观察各组小鼠便血程度、组织学损伤情况,通过投射电镜观察各组肠道上皮间紧密连接改变情况,应用Western blot和RT-PCR的方法,检测小鼠结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-2的表达情况。结果 (1)与模型组比较,5-ASA组和整肠生组小鼠便血程度明显减轻,DAI评分显著降低(P0.05)。整肠生组与5-ASA组比较,便血减轻,DAI评分降低(P0.05)。(2)电镜显示,对照组肠上皮间紧密连接呈一条致密条带,结构完整,见细胞桥粒,微绒毛光滑、排列整齐,细胞间隙狭窄;模型组肠上皮间紧密连接结构松散、模糊、密度降低,桥粒结构消失,微绒毛稀疏,短缩且长短不一,细胞间隙增宽;各治疗组的紧密连接的破坏情况较模型组有不同程度的改善,整肠生组紧密连接清晰,细胞间隙缩窄,微绒毛排列整齐,出现细胞桥粒。(3)应用Western blot和Real time-PCR法检测,与正常组相比,模型组Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达显著下降,Claudin-2表达显著上调(P0.05);各治疗组较模型组Occludin、ZO-1蛋白表达上调,Claudin-2蛋白表达下调(P0.05),整肠生组较单用5-ASA组更明显提高Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达。(4)与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活性降低,与5-ASA组相比,整肠生组能更显著地降低MDA含量,提高SOD活性(P0.05)。结论联合应用整肠生通过调节紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达和降低氧化应激反应,来改善溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障功能。     

Claudin-10b促进成釉器中间层细胞分化与釉质矿化

正紧密连接是由多种蛋白构成的大分子复合物,位于连接复合体的顶端。已有研究表明,紧密连接在牙齿发育以及釉质发生中具有重要意义。Claudin家族分子是构成紧密连接的一类重要跨膜蛋白,其在牙齿发育过程中的基因表达与功能变化尚未完全清楚。首先,作者对出生后7天的Krt14-RFP小鼠切牙进行单细胞测序,发现claudin-1在成釉细胞中大量表达,claudin-10在成釉器中高表达。接着,作者检测了claudin-10的两种同工型,claudin-10a仅在肾脏中表达,而claudin-10b在牙、     

二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的观察二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响,研究其对血脑屏障紧密连接是否具有保护作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及二氮嗪预处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色和Western blot检测各组大鼠ZO-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果 1.假手术组ZO-1、Claudin-5在血管上的染色连续、丰富,缺血再灌注组ZO-1、Claudin-5的染色稀少、断续,二氮嗪预处理组染色较缺血再灌注组有所改善;2.Western blot定量测定与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠脑组织中ZO-1和Claudin-5蛋白表达均明显下降(P0.01),与缺血再灌注组相比,二氮嗪预处理组ZO-1和Claudin-5的蛋白表达明显增多(P0.05)。结论二氮嗪对血脑屏障紧密连接具有保护作用,其机制可能与增加紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5的表达有关。     

下咽鳞状细胞癌组织claudin-1和MMP-9的表达及与临床病理特征及预后的关系研究

摘要 目的：研究下咽鳞状细胞癌组织紧密连接蛋白1（claudin-1）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法：选取2015年1月-2017年3月我院收集的75例下咽鳞状细胞癌组织标本进行研究,同期选取60例癌旁正常黏膜组织标本作为对照。采用免疫组织化学法检测claudin-1、MMP-9在下咽鳞状细胞癌组织与癌旁正常黏膜组织中的表达差异,分析claudin-1、MMP-9阳性表达与临床病理特征关系;Spearman相关性分析癌组织claudin-1与MMP-9的相关性。对患者进行5年随访,分析claudin-1、MMP-9表达与预后的关系。结果：下咽鳞状细胞癌组织claudin-1、MMP-9阳性表达率高于癌旁正常黏膜组织（P＜0.05）。claudin-1、MMP-9阳性表达与下咽鳞状细胞癌患者组织分化程度、淋巴结转移有关（P＜0.05）。经Spearman相关性分析显示,下咽鳞状细胞癌组织中claudin-1阳性表达与MMP-9阳性表达呈正相关（rs= 0.463,P＜0.05）。术后随访5年,2例失访,73例患者获得随访。Kaplan-Meier生存曲线显示,claudin-1阳性表达患者的5年生存率为35.71%,低于阴性表达患者的66.67%（P＜0.05）,MMP-9阳性表达患者的5年生存率为34.85%,低于阴性表达患者的57.14%（P＜0.05）。结论：下咽鳞状细胞癌组织中claudin-1、MMP-9阳性表达升高,其表达与组织分化程度、淋巴结转移和预后不良有关,两者呈正相关,可能发挥协同作用促进肿瘤发生发展。     

MMP-3与乳腺癌上皮间质转化的关系及其意义

为了探讨MMP-3在乳腺癌中表达与乳腺癌上皮间质转化的关系及其在乳腺癌浸润转移中的作用.采用免疫组织化学检测正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织、乳腺癌组织中MMP-3、Claudin-1、Vimentin的表达情况.研究发现:1)MMP-3在乳腺癌组织的阳性表达率较癌旁组织及正常乳腺组织高且具有统计学意义(P<0.05).Claudin-1在乳腺癌中的阳性表达率明显低于癌旁组织及正常乳腺组织具有统计学意义(P<0.05).Vimentin在乳腺癌组织阳性表达率高于癌旁组织及正常乳腺组织具有统计学意义(P<0.05);2)随着乳腺癌病理分期的增加MMP-3表达逐渐增加,同时出现Claudin-1蛋白表达降低及Vimentin蛋白表达升高.相关分析表明MMP-3与Claudin-1的表达呈负相关(r=-0.301,P=0.019),与Vimentin的表达呈正相关(r=0.378,P=0.03),Claudin-1与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.278,P=0.031).结果提示,MMP-3可能是通过介导乳腺癌细胞发生上皮间质转化来参与乳腺癌的浸润转移.     

Zonulin介导的肠道微生物对肠上皮细胞屏障功能的调节

利用Caco-2肠上皮细胞单层屏障模型研究四种肠道微生物对肠道屏障的影响。实验设置空白对照组(control)、大肠埃希菌组(Eco)、肺炎克雷伯菌组(Kpn)、粪肠球菌组(Efa)、乳酸杆菌组(Lac)。加入各组细菌共培养,结果表明大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌均引起单层细胞跨膜电阻值(transepithelial electrical resistance,TEER)明显下降(P0.001);Eco组、Kpn组作用后细胞释放zonulin蛋白增加(P0.01),Efa组作用于Caco-2细胞单层后,zonulin释放量较对照组升高,但差异无统计学意义(P0.05);Eco组、Kpn组三种紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达明显减少,Efa组、Lac组occludin、claudin-1表达与空白对照组相比无明显变化,胞浆蛋白ZO-1表达降低;细菌与细胞共培养6 h后免疫荧光观察紧密连接蛋白分布情况,Eco组、Kpn组可见荧光强度减弱,荧光不连续,甚至有缺口及裂隙,Efa组、Lac组荧光强度稍减弱,但仍沿胞膜分布,条带较清晰,与空白对照组差异不明显。肠道四种微生物中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌可能通过zonulin途径降低紧密连接蛋白表达、改变蛋白分布,最终导致肠道屏障功能受损,益生菌对肠道屏障无损伤作用。     

扣带素——调节血管内皮细胞屏障功能的新靶点

正血管内皮细胞间连接最顶端的紧密连接是构成旁细胞屏障的重要结构。紧密连接由跨膜蛋白和胞浆蛋白组成,其中胞浆蛋白作为桥梁连接跨膜蛋白和细胞骨架蛋白,因此在决定紧密连接结构的完整性中发挥了重要的作用。然而目前,关于血管内皮中特异性表达的重要胞浆蛋白的研究仍十分有限。扣带素(cingulin)是1988年发现的一种紧密连接胞浆蛋白,已有研究表明cingulin在上皮细胞中参与调控紧密连接跨膜蛋白的表达以及细胞的增殖能力。然而,cingulin在血管内皮中的作用     

四君子汤对溃疡性结肠炎小鼠模型occludin和claudin-1表达的影响

目的:探讨四君子汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型结肠粘膜中occludin、claudin-1表达的影响。方法:采用右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC小鼠模型,实验分为五组,即正常组、模型组、四君子汤低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、西药组,共治疗7天。对小鼠肠黏膜的大体形态和组织病理变化进行观察,使用RT-PCR和Western blot检测occludin、claudin-1 m RNA和蛋白的表达。结果:与模型组相比较,四君子汤低、中、高剂量治疗组以及西药组小鼠的饮食、体重、精神、活动度、脓血便等一般情况有所改善,黏膜层缺损、隐窝破坏、炎症细胞浸润等病理表现有所缓解。与模型组相比较,高剂量治疗组小鼠结肠组织中occludin、claudin-1蛋白和m RNA的表达升高(P0.05),低剂量和中剂量治疗组也有不同程度的升高。与西药组相比较,低、中、高剂量治疗组小鼠结肠组织中occludin、claudin-1蛋白和m RNA的表达无统计学差异(P0.05)。结论:四君子汤可以改善脓血便等症状,缓解肠粘膜的损伤,上调occludin和claudin-1的表达,对UC小鼠有治疗作用。     

Claudins蛋白在胃癌组织中的表达

紧密连接（tightjunctions,TJs）对于维持上皮细胞或内皮细胞的正常结构和发挥生理功能起着重要作用。Claudins（CLDNs）蛋白是构成细胞膜紧密连接的主要成分之一,其异常表达导致上皮细胞或内皮细胞结构破坏、功能受损,与多种疾病的发生、发展关系密切。近年来,越来越多的文献报道了claudins蛋白在胃癌组织中的异常表达。不同claudin蛋白亚型在胃癌组织中的表达降低或增高所起作用亦不相同。Claudins蛋白与肿瘤形成、癌细胞的增殖、转移、以及预后关系密切。因此,深入研究claudins蛋白与胃癌发生、发展的关系具有重要意义。     

白介素1受体样1蛋白ST2与肿瘤相关研究进展

白介素1受体样1蛋白ST2(interleukin 1 receptor-like 1)属于TOLL/IL-1受体超家族成员,主要功能型ST2L蛋白由胞内结构域、跨膜结构域和3个细胞外免疫球蛋白样结构域组成。IL-33/ST2信号通路参与机体多种炎性免疫反应,ST2在变态反应性疾病、自身免疫性疾病和心血管性疾病等中发挥了重要作用,近年来研究发现ST2在胃癌、乳腺癌、肝癌等多种肿瘤组织高表达,且与肿瘤的发生和侵袭转移密切相关,其主要机制与影响肿瘤免疫微环境及表达于肿瘤细胞直接影响细胞的生物学行为有关。本文主要就ST2的结构功能及与肿瘤等疾病的关系做一综述。     

Claudin-7和β-catenin在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达和意义

目的恶性肿瘤转移过程与细胞间粘附作用的丧失密切相关。本研究旨在探讨细胞间粘附分子claudin-7和β-catenin在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达及其在子宫内膜癌中的临床病理意义。方法应用免疫组化检测30例正常增生期子宫内膜、27例非典型增生子宫内膜和43例子宫内膜癌组织中claudin-7和β-catenin的表达情况,统计分析它们与子宫内膜癌病理分级、临床分期、浸润深度及淋巴结转移等指标之间的关系,并对二者表达之间的关系进行探讨。结果在正常增生期子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中,claudin-7的表达依次减低,阳性率分别为96.7%,66.7%和39.5%,三组之间具有显著差异（P〈0.05）;β-catenin在非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的异位表达率分别为40.7%和74.4%,均显著高于正常增生期子宫内膜（3.3%）（P〈0.01）,子宫内膜癌组织中β-catenin的异位表达率显著高于非典型增生子宫内膜（P〈0.01）。在子宫内膜癌中,claudin-7的表达与临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关（P〈0.01）;β-catenin的异位表达与病理分级、临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关（P〈0.01）;Claudin-7的表达和β-catenin的异位表达呈显著负相关（r=-0.813,P〈0.01）。结论Claudin-7和β-catenin的异常表达与子宫内膜癌的发生发展有关,并且在此过程中claudin-7逐渐缺失以及β-catenin的异位表达可能对肿瘤的侵袭和转移产生一定作用。     

促炎因子调控紧密连接的研究进展

紧密连接存在于所有上皮或内皮细胞间连接的最顶端,是物质经过旁细胞途径进行物质转运的结构基础,具有"屏障"和"栅栏"的作用。在炎症及免疫因素介导的多种疾病中,如炎症性肠病、囊肿性纤维化、舍格伦综合征和神经系统炎症等,患者血清及疾病累及的上皮或内皮组织均出现多种促炎因子含量升高。促炎因子作用于相关的上皮或内皮组织,通过影响紧密连接蛋白的表达、结构和功能从而调控上皮或内皮的旁细胞途径通透性,是炎症性疾病的一个重要的发病机制。本文重点综述了促炎因子对肠道、呼吸道、唾液腺上皮以及脑微血管内皮紧密连接的调控及其相关分子机制。     

肾小管髓襻升支粗段claudin-10缺失减少Na^+通透性并引起高镁血症和肾钙化北大核心CSCD

在肾小管髓襻升支粗段（thick ascending limb,TAL）,Cl-只能通过跨细胞途径进行重吸收,而约50%的Na＋以及Ca2＋和Mg2＋通过旁细胞途径重吸收。位于上皮细胞间的紧密连接蛋白复合体可以调控旁细胞途径对离子的选择性和通透性,对肾小管的重吸收起重要作用。Claudin-10是紧密连接蛋白claudin家族的成员,可在TAL表达,但其功能尚不了解。     

HPV16 E6通过影响外泌体中β-联蛋白和紧密连接蛋白1表达促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨人乳头瘤病毒16(human papillomavirus 16,HPV16)E6癌蛋白对宫颈癌细胞的生物学行为及外泌体中β-联蛋白(β-catenin)和紧密连接蛋白(claudin-1)表达的影响，本研究利用RNA干扰技术建立HPV16 E6敲低细胞模型(shE6组),通过CCK8试剂盒、流式细胞仪、划痕实验和Transwell实验对细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭特征进行检测，发现shE6相对于对照组(NC组),细胞增殖速率减慢、细胞周期阻滞在G₀/G₁期向S期的过渡阶段，细胞迁移能力显著降低，侵袭能力下降。同时提取细胞上清液中外泌体，利用Western印迹对β-联蛋白和紧密连接蛋白-1表达量进行检测，发现相对于NC组，shE6组细胞内β-联蛋白表达量减少，但外泌体中β-联蛋白量增加，紧密连接蛋白-1在细胞内和外泌体中均增加。上述结果提示，HPV16 E6促进细胞恶性表型可能与E6蛋白能够抑制β-联蛋白以外泌体形式释放，从而增加其在细胞内的积累，以及抑制紧密连接蛋白-1在细胞内和外泌体中的积累有关。     

解析紧密连接分子claudins的组装方式

正紧密连接是一组由跨膜蛋白和胞浆蛋白构成的复合物,在调节溶质和水等经旁细胞途径的转运中起着决定作用。其中,claudins家族作为重要的四次跨膜蛋白,其组装方式及过程尚不清楚。作者选取在屏障形成(barrier-forming)和孔道形成(pore-forming)中发挥作用的两个代表性分子即claudin-3和claudin-10b展开研究。     

IPP软件HSI选色系统分析前列腺癌组织中闭合蛋白-4与血-前列腺屏障相关性

血清tPSA (prostate specific antigen, PSA)值升高反映血-前列腺屏障的完整性的破坏。闭合蛋白4(claudin-4, CLADN-4)是一般屏障中紧密连接的重要组成部分,为了探讨前列腺癌组织中闭合蛋白4与血-前列腺屏障的相关性,本研究收集2008年1月至2015年1月上海市浦东新区人民医院29例住院治疗前列腺癌患者的癌标本,均采用免疫组织化学方法检测癌组织中闭合蛋白4的表达,应用放射免疫法测定术前血清前列腺特异性抗原(tPSA)值,利用IPP (Image-pro plus)软件HSI选色系统分析闭合蛋白4表达强度与血清PSA值的相关性。研究显示,29例患者癌组织中均检测到闭合蛋白4阳性表达,且血清PSA值与闭合蛋白4表达强度具有显著相关性(p0.05)。本研究表明,闭合蛋白4在前列腺癌患者癌组织中的表达强度与血清PSA值相关,闭合蛋白4可能参与血-前列腺屏障的组成。     

miR-155通过促进炎症因子释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展

摘要 目的：探讨miR-155在脓毒症致肠道功能障碍中的表达及作用。方法：（1）临床实验：以2022年5月至2022年8月入住新疆医科大学第一附属医院重症医学科的脓毒症患者和同期健康体检者为研究对象,根据急性胃肠损伤分级（AGI）将脓毒症患者分为AGI组和非AGI组。根据28 d生存情况分为存活组和死亡组,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）法前瞻性观察各组外周血miR-155的变化。（2）体内实验：将20只雄性S/D大鼠按照随机数字表法分为假手术组（sham组）和盲肠结扎穿孔术组（CLP组）,采用qRT-PCR及Western blot法检测miR-155、肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）的表达,ELISA法检测大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18的表达水平。(3)体外实验：培养人结直肠腺癌细胞（Caco-2）,并分为正常对照组(完全培养基培养48 h)、脂多糖组（完全培养基培养24 h后加入10 μg/mL LPS处理24 h）。采用qRT-PCR检测miR-155的表达。在倒置荧光显微镜下观察细胞形态的变化。采用CCK-8检测细胞活力。采用免疫荧光观察Caco-2细胞中紧密连接蛋白ZO-1分布的变化。并行细胞旁通透性实验,观察两组细胞旁通透性的变化。结果：（1）脓毒症组和健康对照组相比,脓毒症患者外周血miR-155较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。AGI组患者外周血miR-155表达较非AGI组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。脓毒症死亡患者外周血miR-155表达显著升高(P<0.05)。（2）应用CLP模型进行体内动物实验,CLP组大鼠肠道组织miR-155表达较假手术组（sham组）明显升高。CLP组大鼠肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）较sham组下降,差异具有统 计学意义(P<0.05)。ELISA结果提示,CLP大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18水平较sham组显著升高（P<0.05）,且肠道组织中miR-155水平与IL-1β、IL-6、IL-18呈正相关（r=0.542,r=0.906,r=868,P<0.05）。（3）与正常对照组相比,经LPS处理后细胞形态破坏、细胞间紧密连接破坏、细胞活力减弱、细胞旁通透性增加。结论：脓毒症发生时伴有肠道屏障功能障碍,miR-155在脓毒症肠道屏障功能障碍中表达升高,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展。miR-155异常表达对脓毒症患者早期肠道功能障碍诊断及预后的评估具有重要价值,可作为脓毒症早期肠道损伤诊断及预后情况的重要指标。