中华真地鳖若虫分龄的研究

通过系统测定刚蜕皮中华真地鳖EupolyphagasinensisWalker若虫腹宽、体长及体重值,得出若虫腹宽、体长及体重值变化有一定的规律,腹宽、体长及体重可以作为若虫分龄的标准。     

中华真地鳖中肠主要消化酶的活性研究

以中华真地鳖EupolyphagasinensisWalker为研究材料,测定人工饲养和野生地鳖虫在不同生长阶段消化酶的活性以及温度及pH对人工饲养地鳖虫中肠消化酶活性的影响。结果表明,在地鳖虫生长发育过程中,蛋白酶和脂肪酶活性随发育而逐渐增强,淀粉酶活性却随发育而逐渐减弱。在低龄若虫、高龄若虫和成虫阶段,人工饲养地鳖虫蛋白酶活力比野生地鳖虫低,人工饲养地鳖虫淀粉酶和脂肪酶活力比野生地鳖虫高;在30～60℃的范围内,人工饲养地鳖虫蛋白酶、淀粉酶的适宜温度范围为40～50℃,脂肪酶的适宜温度范围为35～45℃;蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的适宜pH范围分别为6.5～7.5,5.6～6.4和7.5～8.5。     

中华真地鳖的生殖系统

通过解剖分析中华真地鳖EupolyphagasinensisWalker雌雄内生殖系统和外生殖器的构造,比较不同生长期雌虫的内生殖系统变化,并依据雌虫外生殖器和最后一腹节的构造叙述了地鳖虫卵鞘的形成过程。结果表明:中华真地鳖雌性附腺和雄性附腺发达;雄性外生殖器的阳体结构较为复杂;雌虫外生殖器、腹末构造与卵鞘表面形态的形成有必然的关系。     

西沙海藻共附生放线菌的分离鉴定及其抗菌活性评价

【目的】为了探究南海海藻共附生放线菌资源的多样性及潜在的应用价值,对中国西沙群岛来源的海藻进行共附生放线菌的分离鉴定与抗菌活性筛选。【方法】利用稀释涂布平板法,采用2种不同分离培养基对不同采样位点的6种海藻进行放线菌分离;通过16S rRNA基因序列分析、构建系统发育树对分离的放线菌进行鉴定;用打孔法对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)等10种敏感细菌进行抗菌活性筛选;对筛选得到的目标活性菌株HZ014进行全基因组测序,通过AntiSMASH在线工具分析其次级代谢产物生物合成基因簇,预测其产生新型活性物质的潜力。【结果】从6种海藻中分离得到36株共附生放线菌,基于16S rRNA基因序列比对和系统发育分析,鉴定结果为链霉菌属(Streptomyces) 2株、红球菌属(Rhodococcus) 2株、诺卡氏菌属(Nocardia)3株、小单孢菌属(Micromonospora) 5株和盐孢菌属(Salinispora) 24株;抗菌活性筛选结果表明,36株共附生放线菌发酵粗提物对至少1种敏感细菌表现出一定的抑制作用,不同菌株发酵粗提物的抗菌活性存在明显差异,...     

中华真地鳖若虫肠道细菌的研究

中华真地鳖是一种传统中药资源昆虫,从人工饲养种群的正常取食及蜕皮若虫肠道环境中分离、纯化,好氧和厌氧培养获得11个细菌菌株,对其形态、染色反应、培养性状和生理生化反应进行了系统研究。鉴定结果表明,上述11个细菌菌株依次分别属于:不动杆菌属(Acinetobacter)、柠檬酸杆菌属(Citobacter)、沙门菌属(Sal-monella)、芽胞乳酸杆菌属(Sporolacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、地杆菌属(Terrabacter)、放线杆菌属(Actinobacillus)、克雷伯菌属(Klebsiella)、沙雷菌属(Serratia)、预研菌属(Yokenella)。中华真地鳖正常取食和蜕皮若虫肠道环境细菌种类不同。分离未获得真菌和放线菌。     

中华真地鳖生物学特性初步研究

中华真地鳖Eupolyphagesinensis系夜出性昆虫 ,其活动主要发生在夜间 ,1 9～ 2 4时活动最盛 ,且蜕皮高峰主要集中在后半夜。该文描述了初龄若虫的形态特征 ,对若虫的发育历期、蜕皮时间及卵鞘的孵化进行了研究 ,并比较了中华真地鳖若虫的消化道 ,提出了地鳖虫食品开发的流程 ;同时简要论述了地鳖虫基础研究及药用和食用开发过程中存在的问题     

无土壤基质饲养中华真地鳖

设置中华真地鳖Eupolyphaga sinensis Walker的无基质和有基质饲养条件,研究生长繁育期和越冬期各龄段中华真地鳖的生长、蜕皮、存活率和雌虫产卵情况。有基质饲养条件以饲养土为基质;无基质饲养条件不以任何材料作为饲养基质,只用黑色潮湿的材料对试虫保湿和避光。结果表明:在食料充足的条件下,有、无饲养基质对中华真地鳖的生长发育无明显影响。无基质饲养条件下的生长繁育期大龄若虫和成虫存活率较高,且成虫的月产卵数也相对较高。表明无基质饲养技术可在地鳖虫饲养实践中推广,据此初步设想了无基质饲养地鳖虫的容器构造。     

中华真地鳖的断足再生

报道了中华真地鳖Eupolyphaga sinensis Walker的断足再生特征。研究结果表明,不同虫龄期的若虫都有断足再生能力;足的不同部位断足后均能再生;断掉不同数量的足后,只要能成活均可再生。断足再生后,继续断掉再生足的原位或其他部位也可以再生。再生足的跗节均比正常的少一节,具有再生不完整性。断足后,只要经1～2次蜕皮,均可再生。断掉一对足的腿节后,再生足出现大小不一的现象,小的一般发育不全,断足数量多容易出现再生足发育不全。再生足比正常足要小,但生长速度要快,断掉足的腿节或跗节后的再生足经过2次蜕皮后基本可恢复到正常足大小。     

中华真地鳖在饲养池内的分布格局

运用扩散系数、聚集指数、平均拥挤度、聚块性指数和负二相参数等指标比较分析了中华真地鳖EupolyphagasinensisWalker在饲养池内的空间分布格局。结果显示 ,中华真地鳖在饲养池内的空间分布格局为聚集分布 ,并喜好聚集在饲养池的边缘。随着虫口密度的增大 ,向饲养池中央扩散。     

地鳖虫活性物质的超临界CO_2萃取及其药效

应用超临界流体萃取技术萃取地鳖虫Eupolyphaga sinensisWalker活性物质,采用三因素三水平正交试验方案,考察压力、温度、时间等参数对萃取地鳖虫活性物质萃取量的影响。同时,对萃取产物与水提物进行药效比较。结果表明,在试验设计范围内,萃取压力18 MPa、温度55℃、时间90 min为最佳工艺参数组合,地鳖虫活性物质萃取量最大能达到62.50 mg/g,影响萃取量三因素主次关系为压力>温度>时间。地鳖虫超临界萃取产物对镇痛、消炎和抗凝血有较好的效果,相对于水提物有更好的发展潜力。     

地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖(Eupolyphagesinensiswalker)体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带,含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制,但EDTA对其影响不大,提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定,最适温度40℃,最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。     

地鳖虫蛋白提取物对小鼠S180肉瘤及鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

用不同浓度的地鳖虫蛋白粗提物(0.2~0.8g/ml)作用于S180肉瘤荷瘤小鼠,观察各组的抑瘤效果及重要生理指标的差异;同时分别用地鳖虫蛋白粗提物以及经过盐析、离子交换层析、分子筛由地鳖虫蛋白粗提物分离纯化得到的活性蛋白,作用于鸡胚尿囊膜,观察它们对新生血管生成的抑制作用。结果显示,地鳖虫蛋白粗提物对S180肉瘤荷瘤小鼠有显著的抑瘤作用;蛋白质粗提物以及纯化得到的活性蛋白对鸡胚尿囊膜新生血管的生成有明显的抑制作用,纯化品的抑制活性高于粗品,且二者对鸡胚生长发育的影响较阳性对照(地塞米松组)小,差异显著。因此,地鳖虫蛋白提取物有良好的体内抑瘤作用及血管生成抑制活性。     

中华真地鳖雌虫产卵习性及其卵的发育

在室内饲养条件下,通过对不同月龄的中华真地鳖EupolyphagasinensisWalker雌成虫产卵量调查,并对卵块的质量品级和发育进度进行划分。结果表明1月龄至3月龄中华真地鳖的产卵能力较强;饱满、无破损、形状规则的卵块孵化较好;在卵的各发育阶段,卵块和卵粒的形态变化较明显,以此确立了卵发育的分级标准。     

地鳖虫后若虫期蛋白质和能量的需要量

为了探索地鳖虫后若虫期对蛋白质、能量等营养物质的需要量 ,通过双因子交叉分组试验 ,比较了不同能量、蛋白质水平的配合日粮对地鳖虫后若虫期生长速度和饲料转化率的影响。结果为 :在蛋白质水平组中 ,1、2、3、4、5水平组粗蛋白质含量分别为 1 9 1 3 %、1 8 0 9%、1 7 0 7%、1 6 1 0 %、1 5 1 3 % ,日增重与其它水平组差异显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1 ) ;在能量水平组中 ,A、B、C水平组消化能为 1 3 2 7、1 2 2 6、1 1 2 8mJ kg ,日增重与其它水平组差异显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1 )。结合各处理间饲料转化率的差异情况 ,筛选出地鳖虫后若虫期蛋白质和能量适宜需要量为 :粗蛋白 1 5 1 3 %～ 1 6 1 0 % ,消化能 1 1 2 8mJ kg。     

地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达

依据已报道的地鳖虫成熟肽cDNA序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675 bp地鳖虫纤溶活性蛋白 (fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列.将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2 kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符.重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性.     

察汗淖放线菌资源探查及抗菌活性筛选

【背景】细菌耐药形势严峻,寻找新型抗生素迫在眉睫。放线菌是生产抗生素的重要药物资源。盐湖是一种高盐度的内陆水体,既往研究表明其中的放线菌物种多样、新资源丰富、生物活性广泛,极具开发潜力。【目的】探究察汗淖盐湖土壤中放线菌菌种的组成,并筛选抗菌活性菌株,为发现新颖的抗菌化合物储备菌种资源。【方法】采用19种选择培养基,以涂布平板法分离放线菌。基于16S r RNA基因的相似度鉴定菌株,并分析其多样性和新颖性。根据菌属类别及其新颖性,选择代表菌株进行Ⅰ型、Ⅱ型聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)和非核糖体肽合成酶(non-ribosomal polypeptide synthases,NRPS)抗生素生物合成基因的PCR扩增;代表菌株的发酵液上清和菌体分别经乙酸乙酯和丙酮提取后,采用纸片扩散法进行抗菌活性检测。【结果】从9个土壤样品中分离获得250株放线菌,隶属于放线菌纲的9个目16个科28个属,链霉菌属(88株,占比35.2%)和拟诺卡氏菌属(68株,占比27.2%)为优势菌属。15株链霉菌与近缘菌株16S r RNA基因的最高相似度低于98.65%,推测其归属于...     

土鳖虫与其混淆品的微性状鉴别研究

为对目前药材市场流通的中药材土鳖虫进行微性状特征研究,探究土鳖虫与其混淆品的区别。实验通过查阅资料,对市场土鳖虫品种进行调查,运用中药微性状鉴定法对土鳖虫的不同部位采用体视显微镜、生物显微镜、扫描仪等仪器进行图像采集,并利用Photoshop CS5软件景深合成高清晰度微性状特征图片来对其进行鉴别研究。实验结果表明,土鳖虫口器、腹背板边缘、肛上板、生殖板、触角、单眼间距与复眼间距比例、单眼、复眼、前足胫节、跗节、爪、尾须、背甲及腹甲刚毛等方面与混淆品有比较明显的区别。