姜黄素对兔骨关节炎软骨组织学及CL-2、Mmp9、COX-2、IKKβ、NF-Кb mRNA表达的影响

目的：研究姜黄素对兔关节炎软骨组织的影响。方法：30只新西兰白兔,随机分成对照（A）组、姜黄素（B）组、关节炎（C）组,每组10只。除A组外,其余两组木瓜蛋白酶造骨性关节炎早期模型,后使用5%姜黄素9mg/（kg.week）,生理盐水0.5ml关节腔注射治疗后,采用RT-PCR检测三组的CL-2、Mmp9、COX-2、IKKβ、NF-Кb的mRNA表达情况;采用Tunel法检测软骨细胞的凋亡情况。结果：经过四周治疗,B组的CL-2的mRNA表达比C组增强（P〈0.05）,Mmp9、COX-2、IKKβ、NF-Кb的mRNA表达明显减弱（P〈0.05）,而B组和C组的CL-2的mRNA表达均比A组减弱（P〈0.05）,在Mmp9、COX-2、IKKβ、NF-Кb的mRNA表达增强（P〈0.05）。B组和C组凋亡指数有统计学意义（P〈0.05）。结论：姜黄素关节腔注射可以明显缓解关节软骨的退变,其作用可能与IL-1β/IKKβ/NF-Кb/COX-2、Mmp9两个正反馈信号阻断有关。     

瑞舒伐他汀对压力超负荷型心肌肥厚大鼠TGF-β1表达的影响

目的:观察瑞舒伐他汀对大鼠压力超负荷型心肌肥厚的作用,并探讨其对TGF-β1表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为5组.除假手术组外各组通过不完全结扎大鼠腹主动脉构建心肌肥厚模型,A为假手术组,B为单纯手术组,C为卡托普利组(50mg/kgod),D组为瑞舒伐他汀小剂量组(2 mg/kgod),E为瑞舒伐他汀大剂量组(4 mg/kgod),各组动物术前一周始灌胃给予相应药物直至术后4周,A、B纽给予等量生理盐水.给药第5周末,测定各组大鼠血压和心脏质量指教;采用RT-PCR法和免疫组化法检测左室心肌组织中TGF-β1mRNA和TGF-β1蛋白表达.结果:术后4周各组动物血压和HMI较A组明显增加(P<0.01或P<0.05),而C、D、E组较B组有显著下降(P<0.01或P<0.05);同时各治疗组左室心肌组织中TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白表达较B组有显著下降(P<0.01),且C组抑制表达较D、E组更为显著(P<0.05或P<0.01).结论:瑞舒伐他汀可有效的缓解压力超负荷诱导的大鼠心肌肥厚,且作用类似卡托普利,其可能通过降低左室心肌TGF-β1表达,影响TGF-β信号转导产生作用.     

shRNA靶向干扰COX-2抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤及其血管生成

目的:探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用。方法:重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,RT-PCR和Western blot检测COX-2mRNA和蛋白表达,RT-PCR检测VEGFmRNA表达。将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,4周后处死裸鼠,免疫组织化学法检测肿瘤组织中COX-2蛋白表达和肿瘤微血管密度(MVD)。结果:与未转染细胞相比,干扰组COX-2mRNA和蛋白表达抑制率分别为65.3%和52.8%(P<0.05),干扰组VEGFmRNA表达抑制率为56.5%(P<0.05)。干扰组瘤体大小明显小于阴性组和空白组(P<0.01)。干扰组COX-2得分和MVD均明显低于阴性组和空白组(P<0.01)。结论:pshRNA-COX-2通过抑制COX-2表达明显抑制人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成。     

2型糖尿病大鼠模型制备的影响因素及其特点

目的探讨高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)制备2型糖尿病大鼠模型的造模方法和影响因素。方法4周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠45只随机分为三组:(1)正常组(normal control,NC),9只,普通饲料喂养。(2)高脂组(high fat,HF),9只,高脂饲料喂养。(3)糖尿病模型组,根据高脂喂养时间差异和STZ剂量不同设计了3种模型制备方法:A组,9只,高脂喂养满4周,注射STZ 30 mg/kg;B组,9只,高脂喂养满8周,注射STZ 20 mg/kg;C组,9只,高脂喂养满8周,注射STZ 30 mg/kg。所有大鼠于48h、2周和4周后行灌胃葡萄糖耐量试验(OGTT)评价成模率和血糖波动情况。实验结束时测定血清胰岛素、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC),RT-PCR测定胰腺内胰岛素mRNA表达水平,免疫组化染色观察胰岛细胞形态学特点,用彩色图像分析系统进行定量比较。结果糖尿病C组血糖显著升高,成模后2周血糖下降,4周后又上升到基线水平,成模率100%。糖尿病A组、B组在4周后血糖逐渐降低到接近正常水平,成模率分别为55.6%、11.1%。C组与HF组相比,胰岛素敏感性显著下降(P<0.01)。β细胞内胰岛素水平下降39.3%(P<0.01),胰岛内β细胞所占比例下降了79.2%(P<0.01),胰腺内胰岛素mRNA表达水平减少19.2%(P<0.01),α细胞升高了1倍(P<0.01)。结论高脂喂养8周后腹腔注射低剂量STZ(30 mg/kg)制备的2型糖尿病大鼠模型,成模率高,模型稳定。     

姜黄素对内毒素诱导肠黏膜微血管内皮细胞COX-2表达的影响及机制研究

目的探讨姜黄素对LPS诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达COX-2的影响及机制。方法选用大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,随机分组,用p38MAPK抑制剂、PPARγ拮抗剂、姜黄素进行干预。荧光定量RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达量,WB法检测其相关蛋白。结果LPS组较正常对照组COX-2增高3.5倍,差异有统计学意义(P0.01)。姜黄素组、p38MAPK选择性抑制剂组、PPARγ拮杭剂组较LPS组,COX-2明显降低。阻断p38MAPK后,COX-2蛋白表达下降。姜黄素可以增加PPARγ、COX-2、p-p38的表达。结论姜黄素可降低COX-2表达水平,p38MAPK、PPARγ通路参与姜黄素调控COX-2的表达。     

幽门螺杆菌感染与胃癌侵袭转移及COX-2和MMP-9表达的关系

目的:探讨COX-2和MMP-9在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染和胃部转移侵袭的关系.方法:采用快速尿素酶试验及Warthin-Starry银染色法检测45例胃癌标本中幽门螺杆菌感染情况,采用免疫组织化学法检测COX-2和MMP-9在胃癌组织中的表达,对其与幽门螺杆菌感染和胃癌患者临床病理特征的相关性进行分析.结果:①幽门螺杆菌感染组胃癌中浆膜侵袭和淋巴结转移卒均高于无幽门螺杆菌感染组(P<0.05).②胃癌浆膜侵袭组和淋巴结转移组中COX-2、MMP-9蛋白表达阳性率均分别显著高于无胃癌浆膜侵袭组、淋巴结转移组(P<0.05).③幽门螺杆菌感染与COX-2和MMP-9表达具有相关性.结论:幽门 螺杆菌感染能够增加胃癌的侵袭转移能力,其机制可能与COX-2和MMP-9表达增加有关.     

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制。方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92mg/(kg·d)]、姜黄素大[400mg/(kg·d)]、中[200mg/(kg·d)]、小[100mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只。每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃。灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化。结果行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型。Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P0.01)。模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P0.01)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P0.05)。模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P0.01)。结论姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力。     

不同频率的振动训练对大鼠早期膝骨关节炎关节软骨的修复作用及其JNK/NF-κB、SOX9机制*

目的: 探讨不同频率的振动训练对大鼠早期膝骨关节炎关节软骨的修复作用及其JNK/NF-κB、SOX9的机制。方法: 成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):模型对照组(MC组),高频振动1组(GP₁组,频率60 Hz),高频振动2组(GP₂组,频率40 Hz)、中频振动组(ZP组,频率20 Hz)和低频振动组(DP组,频率10 Hz),正常对照组(NC组)。除正常组外,各组大鼠经第1、4、7日双后腿膝关节腔注射2%木瓜蛋白酶溶液和L-半胱氨酸混合液6周后建立早期膝骨关节炎模型后,对振动组大鼠双膝进行4周,每天 40 min,振幅2~5 mm,每周振动5 d的训练。4周后,检测双膝关节股骨外侧髁关节软骨HE染色、番红O染色和Mankin评分形态学观察,股骨内侧髁关节软骨RT-qPCR检测JNK、NF-κB p65、SOX9 mRNA,Western blot 检测JNK、NF-κB p65、SOX9蛋白表达。结果: 与NC比较,其余各组Mankin评分均显著增高(P＜0.01),与MC相比,各振动组Mankin评分均显著降低(P＜0.05),其JNK、NF-κB p65mRNA和蛋白质表达显著降低(P＜0.01),SOX9mRNA和蛋白质表达显著升高(P＜0.01);与高频组相比,低频组的Mankin评分,JNK、NF-κB p65mRNA和蛋白质表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),而SOX9mRNA和蛋白质表达则显著升高(P＜0.05,P＜0.01)。结论: 不同频率的振动训练对早期膝骨关节炎关节软骨可表现出不同程度的修复效应,低频振动训练软骨修复优于高频振动。可能通过下调关节软骨JNK/NF-κB表达,提高SOX9活性来调控胶原合成。     

姜黄素对晚期宫颈癌患者Bcl-xL、Bcl-2、EphA2及EphrinA1表达的影响

目的:探究姜黄素对宫颈癌晚期放疗患者Bcl-x L、Bcl-2、Eph A2与Ephrin A1表达的影响。方法:收集160例晚期宫颈癌放疗患者的宫颈癌石蜡标本,分为姜黄素组与对照组,均给予放射治疗,姜黄素组放疗期间加服姜黄素片剂,采用免疫组化等实验方法,观察两组病例标本Bcl-x L、Bcl-2、Eph A2与Ephrin A1的表达情况,比较两组病理标本化疗前后的凋亡细胞指数(AI)与微血管密度(MVD)。结果:姜黄素组的Bcl-x L、Bcl-2、Eph A2与Ephrin A1的表达阳性率分别为8.3%、43.33%、46.67%、15.0%,均显著低于对照组(P0.05);放疗后姜黄素组的AI显著高于对照组(P0.05),MVD显著低于对照组(P0.05)。结论:姜黄素可抑制Bcl-x L、Bcl-2的表达以促进肿瘤细胞凋亡,同时降低Eph A2与Ephrin A1的表达以减少肿瘤微血管形成,有显著的抗肿瘤与放疗增敏作用。     

非小细胞肺癌组织KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达与临床病理特征和预后的关系

摘要 目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织驱动蛋白超家族成员2A（KIF2A）、驱动蛋白超家族成员2C（KIF2C）、驱动蛋白超家族成员20A（KIF20A）信使核糖核酸（mRNA）表达与临床病理特征和预后的关系。方法：选择2016年9月至2019年9月天津医科大学总医院手术切除的NSCLC患者106例,取其癌组织及其对应的癌旁组织,应用荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测组织中KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达,分析其与临床病理特征的关系。应用 Pearson相关性分析NSCLC组织中KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达间的关系。随访3年,应用Kaplan-Meier生存曲线分析KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达与患者预后关系。结果：NSCLC癌组织中KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。低分化、淋巴结转移、临床分期Ⅲ A 期NSCLC癌组织中KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA表达水平显著高于中高分化、无淋巴结转移及临床分期I、II期NSCLC癌组织（P<0.05）。Pearson相关分析显示,NSCLC癌组织中KIF2A mRNA表达与KIF2CmRNA、KIF20A mRNA表达呈正相关,KIF2C mRNA表达与KIF20A mRNA表达呈正相关（P<0.05）。Kaplan-Meier法分析显示KIF2A mRNA低表达组、KIF2C mRNA低表达组、KIF20A mRNA低表达组3年生存率分别为（84.78%,86.27%,81.48%）显著高于KIF2A mRNA高表达组、KIF2C mRNA高表达组、KIF20A mRNA高表达组（59.62%,55.32%,59.09%）（P<0.05）。结论：KIF2A、KIF2C、KIF20A mRNA在NSCLC组织中存在高表达,且与低分化、淋巴结转移、临床分期及预后有关。     

TGF-β2在低氧条件下诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化 的研究

目的：探讨转化生长因子β2(TGF-β2)在低氧条件下诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的作用。方法：无菌条件下 分离Wistar 大鼠股骨骨髓,采用全贴壁培养法纯化BMSCs。传6 代后,将细胞随机分为3 组,A组加入25 ng/mL TGF-β2在1%氧 浓度条件下培养;B 组加入25 ng/mL TGF-β2在21%氧浓度条件下培养;C 组仅加入含10%胎牛血清的DMEM-α培养液在1%氧 浓度条件下培养。3 周后,通过甲苯胺蓝染色检测细胞糖胺多糖,聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)的表达水平。 结果：骨髓细胞经换液后贴壁聚集生长,形态均一,连续传代后形态无明显改变。分组培养第1 周,A、C 组生长速度低于B 组;第 2 周各组均出现不规则形态细胞,A、C 组细胞形态小于B 组;第3 周各组均可见透明样基质,以A组最明显。3 周后行甲苯胺蓝 染色,A 组细胞内外均可见丰富的蓝染颗粒,B、C 组染色较A 组略浅。A 组Ⅱ型胶原的表达相对量(1.246± 0.287) 高于B 组 (0.973± 0.365)、C组(0.802± 0.196),差异有统计学意义(P＜0.05);B、C 组比较无明显差异(P＞0.05)。A 组Aggrecan 的表达相对量 (0.833± 0.375)高于B组(0.724± 0.173)、C 组(0.602± 0.091),差异有统计学意义(P＜0.05);B、C 组比较无明显差异(P＞0.05)。结 论：TGF-β2联合低氧环境可明显促进骨髓基质干细胞分化为软骨细胞。     

腹部肠管火器伤后脑组织COX-2的表达与细胞凋亡的研究

目的:探讨猪腹部肠管火器伤后脑组织环氧化酶-2(COX-2)的表达与细胞凋亡之间的关系.方法:健康长白仔猪42头随机分为对照组以及伤后1h、2h、4h、8h、12h和24h组,实验组建立腹部火器伤肠管穿透模型后,用免疫组化图像分析法测定各组脑组织COX-2的表达,采用TUNEL法观察脑细胞凋亡情况.结果:腹部肠管火器伤后COX-2在脑组织中的表达随着时间延长而表达增强、细胞凋亡率也随之增加,24小时组COX-2表达最强、细胞凋亡率最高,各实验组COX-2的表达和凋亡率明显高于对照组(P<0.01),各实验组COX-2表达与凋亡率明显高于上一时间组,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),Pearson直线相关分析表明,COX-2的表达与细胞凋亡率均呈正相关,相关系数为0.857(P<0.01).结论:腹部肠管火器伤后脑组织中COX-2表达与脑细胞凋亡趋势一致,且二者密切相关,提示腹部肠管火器伤后COX-2可能通过调控各种凋亡因子来促进脑细胞凋亡,从而在继发性脑损害过程中起重要作用.     

未绝经宫颈癌患者肿瘤组织中环氧合酶2的表达及其临床意义

目的探讨环氧合酶2(COX-2)在宫颈癌组织中的表达与月经周期的关系及其临床意义。方法选取47例未绝经宫颈癌手术病人,病史结合子宫内膜HE染色观察判断患者所处月经周期时段,采用免疫组织化学SP法检测宫颈癌组织中COX-2及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,计算机图像分析COX-2免疫染色密度值及PCNA标记指数(LI)。结果宫颈癌组织中COX-2表达阳性者增生期表达强于分泌期(P<0.05),但阳性率无显著性差异(P>0.05),COX-2阳性癌组织中PCNALI高于阴性者,差异有显著性(P<0.01)。有淋巴结转移者COX-2的表达高于无转移者(P<0.05),宫颈癌组织中COX-2的表达与FIGO临床分期、组织分化程度无显著相关性(P>0.05)。结论未绝经宫颈癌患者肿瘤组织中COX-2的表达在增生期较分泌期明显增加,并参与调节肿瘤的生长、转移。     

PTEN及COX-2在乳腺癌的表达、意义及相关性

目的:研究PTEN及COX-2在乳腺癌的表达、与临床病理特征的关系及二者表达的相关性.方法:采用免疫组化技术(S-P法)检测48例乳腺癌和12例乳腺纤维腺瘤中PTEN、COX-2的表达情况.结果:PTEN在乳腺癌中的高表达率52.08%(25/48)明显低于乳腺纤维腺瘤91.67%(11/12)(p<0.05);PTEN的表达水平与腋淋巴结转移呈负相关,与ER水平呈正相关.与乳腺纤维腺瘤组织16.67%(2/12)相比,COX-2在乳腺癌组织中的表达明显增强68.75%(33/48)(P<0.05),COX-2与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及ER、PR水平有关.结论:PTEN和COX-2的异常表达与乳腺癌发生、发展密切相关;PTEN和COX-2在乳腺癌中的表达呈负相关,两者共同参与了乳腺癌发生和发展.     

雾化吸入雷公藤内酯醇对哮喘大鼠气道平滑肌增生及NF-κB、Bcl-2表达的影响

目的：探讨雷公藤内酯醇对哮喘气道重构及核因子-kappaB（NF-κB）、Bcl-2表达的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为5组（n=8）：正常对照组（A组）;哮喘4周组（B组）;哮喘6周组（C组）;治疗4周组（D组）;治疗6周组（E组）。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;免疫组织化学染色、Western印迹法检测PCNA、NF-κB、Bcl-2蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Bcl-2mRNA表达。结果：①B组、C组NF-κB的蛋白表达量显著高于A组（P均〈0.01）,E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01、P〈0.01、P〈0.05）;②B组、C组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著高于A组（P〈0.01）;E组蛋白表达量较B组、C组、D周组均显著降低（依次为P〈0.05、P〈0.01、P〈0.01）,mRNA表达水平与上述各组比较亦均显著降低（P〈0.01）,E组蛋白及mRNA表达水平与A组相比仍较高（依次为P〈0.05、P〈0.01）;③B组、C组PCNA的蛋白表达量明显高于A组（P〈0.01）;④B组及C组支气管壁厚度、支气管壁平滑肌厚度、支气管壁平滑肌细胞核数量均较A组明显增加（P〈0.01）,而E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01）;⑤B组、C组的气道反应性均高于A组（P均〈0.01）,E组较B组、C组、D组均显著降低（P〈0.01、P〈0.01、P〈0.05）。结论：哮喘气道平滑肌增生与气道平滑肌细胞（ASMCs）凋亡不足相关。NF-κB可能通过抑制ASMCs凋亡,参与哮喘气道高反应性及气道重构过程。雷公藤内酯醇可能通过下调NF-κB而抑制Bcl-2的表达,从而促进ASMCs凋亡、抑制气道平滑肌增生。     

软骨寡聚基质蛋白过表达对BMP-2诱导骨髓间充质干细胞分化的影响

目的：研究软骨寡聚基质蛋白（cartilage oligomeric matrix protein,COMP）过表达对BMP-2诱导骨髓间充质干细胞成骨及成软骨分化的影响。方法：BMP-2诱导骨髓间充质干细胞分化,通过脂质体转染含人COMP基因的质粒使骨髓间充质干细胞过表达COMP,采用实时定量PCR和Western blotting分析COMP基因过表达、成骨相关基因Ⅰ型胶原、RUNX2、骨钙蛋白以及成软骨相关基因Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖、X型胶原的表达变化;通过茜素红染色观察成骨终末阶段矿化结节的生成情况,阿利新蓝染色观察细胞基质蛋白多糖的合成情况。结果：质粒转染后骨髓间充质干细胞COMP基因蛋白和mRNA表达水平显著提高（P<0.05）。COMP基因过表达后,成骨标记基因RUNX2、Ⅰ型胶原（Col1a1）mRNA水平均显著低于对照组（P<0.05）,RUNX2、骨钙蛋白（Osteocalcin）蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.05）,而成软骨标记基因SOX9、蛋白聚糖（Aggrecan）mRNA水平均显著高于对照组（P<0.05）,SOX9、Ⅱ型胶原（Col2a1）蛋白表达均明显多于对照组（P<0.05）。细胞成骨茜素红染色弱于对照组,而阿利新蓝染色强于对照组。过表达组细胞X型胶原（Col10a1）基因表达显著低于对照组（P<0.05）,结论：骨髓间充质干细胞COMP基因过表达可抑制BMP-2诱导其成骨分化,促进骨髓间充质干细胞成软骨分化,并抑制软骨细胞的成熟肥大,为软骨组织工程研究提供新的方向。     

牦牛B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1的原核表达及体外活性

为研究牦牛(Bos grunniens) B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1(B cell lymphoma 2 related protein A1,BCL2A1)的原核表达及体外活性。采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法。结果显示,成功构建pET-32a-BCL2A1重组质粒,表达获得约33kDa的BCL2A1。终浓度为0.02μg/mL、0.2μg/mL、2.0μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P < 0.05),并在一定程度上抑制细胞的迁移。2.0μg/mL BCL2A1导致HepG2细胞核固缩,胞质中高密度物质聚集,溶酶体吞噬形成致密的凋亡小体等。此外,细胞凋亡相关基因CASP9的mRNA水平在2.0 μg/mL组中显著上调(P < 0.05),CASP8的mRNA水平在0.2 μg/mL和2.0 μg/mL组中显著上调(P < 0.05),而CASP3和Cyt c的mRNA水平在3个浓度处理组均显著上调(P < 0.05)。这提示BCL2A1可能通过凋亡途径影响HepG2细胞活性,为进一步探索牦牛BCL2A1基因功能积累资料。     

生后早期听觉剥夺、经验改变大鼠听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达

应用蛋白质印迹检测技术,研究早期听觉剥夺、经验对大鼠听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达的影响.结果表明,听觉剥夺使生后14天龄组和28天龄组动物听皮层NR2B蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01),听觉剥夺7天后再给予纯音暴露则又使NR2B表达水平明显提高(P<0.05),呈现双向调节趋势.听觉剥夺和纯音暴露对生后42天龄组大鼠听皮层NR2B表达不再产生明显调节作用(P>0.05).结果提示,在大鼠生后发育关键期,听觉剥夺、经验可改变听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达水平.研究结果为研究感觉功能发育可塑性的机制提供了重要实验资料.     

β2微球蛋白在骨髓基质干细胞的表达

通过流式细胞技术和激光共聚焦显微镜探索骨髓基质干细胞（bone mesenchymal stemcells,BMSCs）β2微球蛋白（beta 2 microglobulin,β2M）的表达情况。取第3代相同状态的SD大鼠骨髓基质干细胞,分为A、B两组,A组为未分化的BMSCs,B组为软骨诱导分化1周的BMSCs,两组均采用流式细胞技术和激光共聚焦显微镜分别从数量和细胞轮廓上检测β2M的表达。流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果均表明,未分化BMscs的β2M表达明显低于软骨诱导分化的BMSCs。结果表明,未分化的BMSCs免疫原性较低,处于软骨分化的BMSCs免疫原性明显增强。     

COX-2在CIN及宫颈癌组织中表达的意义

目的:探讨前列腺素酶COX-2在宫颈癌及癌前组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法、半定量RT-PCR法及Western-blot法检测COX-2在35例宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)、40例宫颈癌和5例正常宫颈组织中的表达情况.结果:①经免疫组化检测,COX-2蛋白在正常宫颈组织中不表达,在CIN宫颈组织阳性表达率分别为31.4%,在宫颈癌组织中阳性表达率分别为85.0%.三者之间差异具有显著性(P<0.05).②经RT-PCR检测,正常宫颈组织中无COX-2 mRNA表达,CIN宫颈组织中COX-2mRNA相对含量为0.291±0.214,宫颈癌组织中相对含量为0.357±0.173,三者之间差异具有显著性(P<0.05).③经Western-blot检测.COX-2蛋白在宫颈癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中相对含量分别为40.27±13.67,56.98±21.13和84.21±22.74,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05).结论:COX-2蛋白不表达于正常宫颈组织中.COX-2可能参与了宫颈癌早期的发生发展.宫颈组织中COX-2的表达可作为宫颈癌早期诊断及估计宫颈癌患者预后的一个指标.