接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究

合成了淀粉接枝丙烯腈及烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶,最适偶联条件研究表明：缓冲液的浓度,ＰＨ值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响,有最适固定化条件下,固定化酶的活力为１５００Ｕ／ｇ干胶,蛋白载量为２５ｍｇ／ｇ干胶,比活为６０Ｕ／ｍｇ蛋白,比天然酶的比活提高６倍,最适反应温度比天然酶提高１０℃。无底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２４ｈ     

具有磁响应性的聚乙二醇载体固定化糖化酶的研究

以两亲性的聚乙二醇胶体粒子,通过吸附－交联法固定化糖化酶。研究了戊二醛浓度,缓冲液ｐＨ值及加酶量对酶固定化的影响,固定化酶活力可达１７０９５Ｕｐｅｒｇｒａｍ干胶,活力回收为６３％。磁性固定化酶最适温度比天然酶提高５℃,最适ｐＨ比天然酶提高０５个ｐＨ单位。并且对酸、碱、热的稳定性大大增强,贮存及操作稳定性也大大提高。该磁性载体合成简单,固定化方法简便,具有磁性,易于分离,因而为工业上的应用提供了一种新的可能。     

聚乙烯醇复合凝胶固定化糖化酶研究*

以聚乙烯醇复合凝胶作为载体固定化糖化酶,最终酶活达到1.558u/g干胶．酶活回收率是30．2％。该固定化酶在pH4.6,45℃下,以10%的可溶性淀粉为底物进行分批试验,操作半衰期为350h,具备高底物浓度下操作及贮存稳定性。     

离子型多孔聚苯乙烯固定化糖化酶

 用离子型多孔聚苯乙烯固定化了糖化酶。研究了制孔剂比例对载体孔径的影响。用麦芽糖做底物,三乙醇胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶的最适pH向左移动约2个pH单位;磺酸基苯胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶最适pH向右移动2个单位。固定化酶最适pH的移动值随缓冲液浓度的增加而减少。用可溶性淀粉为底物时固定化糖化酶的pH—活力曲线变宽。用dextrin作底物,天然糖化酶的Km为3.47×10~(-3)mol/L,固定化糖化酶的素质K_m为4.17×10~(-3)mol/L,表现K_m(app)为1.11×10~(-2)mol/L。延长重氮化反应时间,得到2000ug~(-1)干胶的高活力固定化糖化酶。     

果胶酶的固定化研究

本文研究了以重氮化的对—氨基苯磺酰乙基纤维素为载体制各固定化果胶酶的最适条件,并比较了固定化果胶酶与游离酶的性质。结果表明,最适的固定化果胶酶的条件是：在ｐＨ７．００．１５Ｍ的磷酸盐缓冲液中,按每克载体加入２１６３活力单位的酶的比例进行偶联反应１２小时。在以上最适条件下,固定化果胶酶的表观活力为１９８０Ｕ／ｇ,活力回收率为８７％。与游离酶相比,固定化果过酶作用的最适ｐＨ由４．６移至４．２,最适温度变宽,酶的热稳定性增强,操作稳定性良好,半衰期为３２．５天。     

壳聚糖固定化酶一步纯化抑肽酶研究

采用化学改性与修饰微珠壳聚糖为载体,共价法偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,单位活力５１９０ＫＩＵ／ｇ（湿）,蛋白偶联率６０．５％,酶活性回收率５５％;将其直接亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶。方法过程简单,样品比活力５７００ＫＩＵ／ｍｇ,质量稳定,成本较低;该吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,非特异性吸附较小,可以反复使用,价格低廉,适合工业化生产。     

固定化葡萄糖异构酶最适pH值的调节

用多孔强碱性三乙醇胺基聚苯乙烯树脂作为载体,用CNBr与载体上多羟基作用共价偶联葡萄糖异构酶(GI)。最适偶联条件表明:CNBr量增多,蛋白载量增加,但比活下降。固定化葡萄糖异构酶(IGI)最适反应温度比天然酶提高15℃。并系统地研究了影响IGI活力-pH的曲线的各种因素:用具有不同平均孔径的载体(R=137A,185A,230A,365A)固定化GI,在低离子强度条件下(0.0064mol/L),测定其最适pH值分别7.76,7.56,7.50,8.20。选择平均孔径为230A且具有不同数量三乙醇胺基的载体(0.94,1.05,1.13,1.37mmol/g干胶)分别固定化GI,其最适pH值分别为7.70,7.50,7.46,7.36。     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究Ⅱ碱性蛋白酶的提纯和性质研究

地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｂ．Ｌ ＪＦ－１ｄ三级发酵的发酵液经离心去菌体,（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析,透析后进行Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析得粗酶制剂。比活力从１８７８Ｕ／ｍｇ提高到６７９５Ｕ／ｍｇ,酶活力回收率为３５．３％。该酶水解酷蛋白的最适反应温度为５５℃,最适ｐＨ为１０．５,具有较高的热稳定性,对ＳＤＳ有较强的耐受性。     

壳聚糖固定化德氏根霉脂肪酶的研究

研究了壳聚糖吸附和戊二醛交联对脂肪酶固定化条件,在室温条件下将0．4g酶粉溶于pH6．0缓冲液中,加入10g壳聚糖,摇匀,再加入浓度为0．6％戊二醛交联6h,得到固定化酶,酶活力回收率约为54．2％。固定化酶的半失活温度比游离酶的高,半失活温度由游离酶的47℃提高到100℃,最适反应温度由40℃上升至80℃,最适pH由6下降到5．5,固定化酶K’m值由游离酶的Km 50mg／mL增加到56mg／mL。该固定化脂肪酶用于酯的合成;在80℃条件下经过10批次连续水解植物油反应,固定化酶的活力仍保持在82．6％以上。     

硅藻土固定中性脂肪酶的制备及其性质

以硅藻土为载体,采用吸附法,对脂肪酶进行固定化,研究了固定化条件对固定化脂肪酶的催化活性的影响,得到最佳的固定化条件：给酶量为33374U/g,固定化温度为35℃,pH值为7.5,时间为4h,此时固定化酶的活力约为5833U/g载体。固定化酶的热稳定性较游离酶有了很大的提高,其在80℃以下能保持80%以上的酶活,而游离酶60℃残余酶活仅为5%。最适反应温度和最适pH值也分别由游离酶的40℃上升至50℃和由7上升到7.5。对固定化中的中性脂肪酶在生物柴油合成中的应用也进行了初步研究。     

磁性聚乙二醇载体固定化α淀粉酶的研究

α淀粉酶广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品和医药工业［1］．由于固定化酶的优点,国内外研究人员对固定化糖化酶［2,3］和固定化α淀粉酶[4]的制备及在淀粉酶法生产葡萄糖方面的应用作了大量的研究,显示了工业应用前景．然而,迄今为止,用磁性载体固定化α淀粉酶尚未见报道．我们用磁性聚乙二醇胶体粒子作载体,制备出具有磁响应性强、稳定性强、活力高的固定化α淀粉酶．由于具有磁响应性,可借助外部磁场方便简单地回收酶,为该酶工业化生产葡萄糖提供了一种新的途径．而且,由于磁性的优点,也为该酶在食品、医药、纺织…     

赤霉素A_4、A_7的发酵研究

初选藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)农大17菌株为赤霉素A_4、A_7(GA_4、GA_7)的生产菌,该菌株GA_(4+7)的积累量,除与营养条件有关外,温度和pH是极为重要的因子,随着发酵温度从28℃上升至32℃,GA_(4+7)的产量由21μg/ml增至81μg/ml,GA_3由702μg/ml降至328μg/ml。pH回调至中性,GA_(4+7)的产量由75μg/ml增至180μg/ml,GA_3由322μg/ml降至211μg/ml。此外,设法延长发酵周期也是增加GA_(4+7)的一个因素。综合上述条件,即发酵过程中,发酵液的pH由48h前的4回调并维持在6.7左右,温度由28℃上调并控制在32℃,摇瓶培养12天,GA_(4+7)的产量达890μg/ml,20—600L发酵罐发酵240h,GA_(4+7)产量达680μg/ml左右。GA_(4+7)浓度的测定亦作了简化处理,发酵液不经提取,可直接用硅胶板G薄层层析(TLC)后进行荧光比色,产品测定宜采用高效液相色谱法(HPLC)。按照上述条件培养的农大17菌株,产生GA_3、GA_7和GA_4的比例为23.131:16.105:31.258,GA_4高于有关报道。     

金属螯合载体固定重组腈水解酶

以琼脂粉为基质制备金属螯合载体,并用于固定重组腈水解酶。研究发现:制备金属螯合载体最合适的金属离子为Zn2+。当Zn2+离子浓度0.3 mol/L、给酶量15.6 mg/g、固定化pH 8.0、固定化温度40℃时,制得的固定化酶活性最高。固定化酶最适反应温度为50℃、最适反应pH为7.0。当扁桃腈浓度为10 mmol/L、反应1 h时,固定化酶最大产率为0.041 mmol/(g·h);在反应12 h时,产物e.e.值可达到99%以上。固定化酶重复使用8次以后,酶活力仍保持在45%。     

游离及固定化果糖基转移酶部分酶学性质的比较研究

 从诱变、筛选的米曲霉GX0 0 10菌株所产生的果糖基转移酶 ,经过纯化和固定化操作分别制备游离酶和固定化酶 ,对两者的酶学性质进行了比较研究 .结果表明 ,两者在蔗糖转化为蔗果低聚糖的酶促反应中 ,最适pH为 5 5,在pH5 0～ 7 5之间酶活性相对稳定 .游离酶和固定化酶的适宜温度范围分别是 4 5～ 52℃和 4 0～ 55℃ .在 55℃保温 60min ,酶活性保存率分别是 61 6%和 87 5% .固定化酶的热稳定性提高 .0 1mmol LHg2 +和 1mmol LAg+能完全抑制游离酶的活性 ,但只能部分抑制固定化酶的活性 ,1mmol L的Ti2 +能完全抑制两者的活性 .以蔗糖为底物时 ,游离酶的米氏常数Km=2 15mmol L ,而固定化酶Km =386mmol L .游离酶只能使用一次 ,固定化酶反复使用 54次后 ,剩余活力为 55 2 % .用 55% (W V)蔗糖溶液与固定化酶在pH5 0 ,4 6℃下作用 12h ,可获得61 5% (总低聚糖 总糖 )产物 ,其中蔗果五糖含量达到 7 2 % .     

Itaconic acid production by immobilizedAspergillus terreus from xylose and glucose

Summary Aspergillus terreus NRRC 1960 spores were entrapped in calcium alginate gel beads or alternotely the fungal mycelium was immobilized either on Celite R-626 or in agar gel cubes, and the biocatalyst was employed both in repeated batch and in continuous column reactors to produce itaconic acid from D-xylose or D-glucose. The highest itaconic acid yield obtained in a submerged culture batch fermentation was 54.5% based on total initial glucose (55 g/l) with a volumetric productivity of 0.32 g/l h, and 44.8% from xylose (67 g/l) with a productivity of 0.20 g/l h. In a repeated batch fermentation mycelium immobilized in agar gel had a productivity of 0.112 g/l h, and mycelium grown from spores immobilized in calcium alginate gel 0.06 g/l h, both from xylose (60 g/l). With the best immobilized biocatalyst system used employing Celite R-626 as a carrier, volumetric productivities of 1.2 g/l h from glucose and 0.56 g/l h from xylose (both at 60 g/l) were obtained in continuous column operation for more than 2 weeks.     

Immobilization of glucoamylase onto polyaniline-grafted magnetic hydrogel via adsorption and adsorption/cross-linking

Glucoamylase (GA) was immobilized onto polyaniline (PANI)-grafted magnetic poly(2-hydroxyethylmethacrylate-co-glycidylmethacrylate) hydrogel (m-p(HEMA-GMA)-PANI) with two different methods (i.e., adsorption and adsorption/cross-linking). The immobilized enzyme preparations were used for the hydrolysis of “starch” dextrin. The amount of enzyme loading on the ferrogel was affected by the medium pH and the initial concentration of enzyme. The maximum loading capacity of the enzyme on the ferrogel was found to be 36.7 mg/g from 2.0 mg/mL enzyme solution at pH 4.0. The adsorbed GA demonstrated higher activity (59%) compared to adsorbed/cross-linked GA (43%). Finally, the immobilized GA preparations exhibited greater stability against heat at 55 °C and pH 4.5 compared to free enzyme (50 °C and pH 5.5), suggesting that the ferrogel was suitable support for immobilization of glucoamylase.     

Immobilization of glucose oxidase on Fe<Subscript>3</Subscript>O<Subscript>4</Subscript>/SiO<Subscript>2</Subscript> magnetic nanoparticles

Glucose oxidase (GOD) was covalently immobilized onto Fe₃O₄/SiO₂ magnetic nanoparticles (FSMNs) using glutaraldehyde (GA). Optimal immobilization was at pH 6 with 3-aminopropyltriethoxysilane at 2% (v/v), GA at 3% (v/v) and 0.143 g GOD per g carrier. The activity of immobilized GOD was 4,570 U/g at pH 7 and 50°C. The immobilized GOD retained 80% of its initial activity after 6 h at 45°C while free enzyme retained only 20% activity. The immobilized GOD maintained 60% of its initial activity after 6 cycles of repeated use and retained 75% of its initial activity after 1 month at 4°C whereas free enzymes retained 62% of its activity.     

毕赤酵母展示表达南极假丝酵母脂肪酶B

将南极假丝脂肪酶B(CALB)基因N端和C端,分别与酿酒酵母絮凝蛋白(Flo1p)絮凝结构域序列的N端(FS)和C端(FL)融合,构建成脂肪酶毕赤酵母表面展示载体KFS和KFL,并转化毕赤酵母GS115后获得重组子KFS-CALB和KFL-CALB。免疫荧光检测证实脂肪酶已展示于毕赤酵母细胞表面。甲醇诱导120 h后展示酶活性分别达到286 U/g干细胞和182 U/g干细胞。酶的热稳定性较游离酶有较大提高,50℃孵育4 h后KFS-CALB菌株的残留酶活力仍保持初始酶活力70%以上;KFL-CALB在50℃孵育2 h后的酶活力也达到初始酶活力50%,远远高于游离态的CALB,其在50℃孵育0.5 h后仅残留18%的初始酶活力。