青霉素酰化酶产生菌的筛选和大肠杆菌AS 1.76产酶条件的研究

为筛选较优的产青霉素酰化酶的菌种,我们从9个属的232株纽菌中选出了19株产青霉素酰化酶的大肠杆菌,其中,AS 1．76和E 110为最好。还对大肠杆菌AS 1.76的产酶条件进行了研究。结果表明,最适的培养基成分是(％)：蛋白胨l,苯乙酸0．2,玉米浆0．3,氯化钠0．5;在250毫升的三角瓶中装30毫升培养基时,通气量正合适：培养基的初始pH以7.0为佳;培养时间15小时。在未加玉米浆的培养基中,少量的Fe2+(5馓克／毫升)对酶形成有刺激作用,过量的Fe2+(大于10教克／毫升)是不利的;在培养基中添加0．3％的玉米浆能降低Fe2+对酶形成毒害作用。     

脂肪酶产生菌Geofrichum sp. AS 2.1135产酶条件及酶一般性质的研究

在92株能同化油的地霉属菌株中,Geotrichum sp. AS2．1135菌株产脂肪酶活力为50—60u／ml,对其产酶条件的研究表明,不饱和长链脂肪酸和油类有利于酶的形成。在4％豆饼粉作为有机氮源的培养基中,加入0．2％尿素,酶活力显著增加,酶活达150u／ml。用聚乙二醇橄榄油乳化系统测定酶的作用最适pH为8．0,最适温度为4O一42℃。在pH4一9时5℃下存放24小时,或在pH 5和8时45℃保持15分钟,酶活力不变。     

卡拉胶固定粘质赛氏菌产碱性蛋白酶的研究

将粘质赛氏菌(Seratia marcescens)包埋于卡拉胶中,发现2．5％的卡拉胶适于固定该菌产碱性蛋白酶。固定化细胞在其较适宜产酶培养基中发酵,酶活力一般可达400u/ml,在卡拉胶中添加3％玉米粉和1%豆饼粉或2％砂子制备固定化细胞,其产酶能力分别提高了25%和23．9％;固定化细胞颗粒越小,其产酶能力越高。采用摇瓶半连续发酵。其产酶半衰期为14次(24小时为一个周期);而用环流器进行半连续发酵,其产酶半衰期为52次(12小时为一个周期),产酶效率分别比游离细胞摇瓶发酵的产酶效率高11．8％和45．07％,而环流器半连续发酵的产酶效率比摇瓶半连续发酵高29．7％。     

氧化酶和尿素酶试验对HP感染的鉴别诊断

目的 探讨氧化酶和尿素酶对幽门螺杆菌（HP）感染的检出率和鉴别诊断。方法 采用氧化酶和尿素酶和涂片对1738例胃病患者进行HP检测。结果 1738例中氧化酶试验、尿素酶试验试验阳性检出率分别为47．41％、89．99％,阳性预测值为89．76％,阴性预测值为95．3％;尿毒酶试验的敏感性为99．72％,特异性为96．02％,阳性预浊值为95．36％,阴性预测值为9．76％,两者相比较各个参数间均无明显差（P＞0．05）。结论 氧化酶试验和尿毒酶试验一样对检测HP快速有效,两者联合应用可提供对HP感染诊断和鉴别诊断的准确性。     

内切型菊粉酶生产菌株的筛选及诱变选育

采用透明圈法筛选得到了产菊粉酶的多株菌株,并得到了1株产内切型菊粉酶较高的隐球酵母属（Cryptococcus)菌株L1,以L1作为出发菌株经Co^60诱变后,得到1株产内切型菊粉酶最好菌株C10,其诱变后低聚果糖得率比诱变前提高了52．6％,酶活力提高了51．9％。     

一步法发酵菊芋产乙醇菌种的筛选及产酶条件、酶学性质的研究

从腐烂的菊芋及实验室保存的菌种中,选育到一株发酵菊芋产乙醇的菌株克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus Y1。利用正交实验法对克鲁维酵母产菊粉酶的培养基组成及培养条件进行优化,确定培养基组成（g/L）为：菊粉40,酵母粉4,蛋白胨4,尿素1;初始pH5．0,温度30℃,150r／min条件下培养达到最佳产酶效果（57U／mL）。该菌株所产菊粉酶的性质测定结果表明：以菊粉为底物,该菊粉酶最适反应温度为55℃,在60℃以下稳定性很好,高于60℃时酶迅速失活;最适pH为5．0,pH4．6—5．2范围内酶稳定性很好;该酶属于外切型菊粉酶,体积分数为8％的乙醇对酶活力基本没有影响。     

GL一7一ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位

本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp．130)染色体上克隆得到的6．8kb的GL－7－ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、HindⅢ、claⅠI切点,分别具有一个HpaⅠ、两个xhoⅠ、三个BamHⅠI以及四个Pst I切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL一7一AcA酰化酶基因已被定位在3．Okb的B 2－B3－Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYCl84、pDR540、pUCl9等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMRl0和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMRl0的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMRll),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。     

肠杆菌诱导型AmpC酶对第三代和第四代头孢菌素的影响

目的探讨诱导型AmpC酶对三代、四代头孢菌素的影响及其治疗策略。方法采用药敏纸片扩散法,用FOX药敏纸片作为诱导剂,以CAZ、CTX和FEP作为指示剂,检测肠杆菌的诱导AmpC酶的产生。结果待测的196株菌株中有101株为产诱导型AmpC酶阳性（51．5％）,其中阴沟肠杆菌58株（67．4％）,产气肠杆菌18株（52．9％）,沙雷菌属共8株（40％）,费劳地枸椽酸杆菌6株（42．8％）,聚团肠杆菌6株（33．3％）,奇异变形杆菌5株（20．8％）,其余95株产诱导型AmpC酶为阴性。产诱导型AmpC酶阳性菌株中无一株对FEP纸片的抑菌圈直径有影响,诱导型AmpC酶试验均为阴性。结论对于鉴定确认为诱导型AmpC酶阳性菌株的感染,即使实验报告三代头孢菌素为敏感,也应慎用或避免使用第三代头孢菌素的治疗,以第四代头孢菌素如头孢吡肟为首选药。     

Aspergillus sp.脂肪酶发酵条件优化及酶学性质的研究

作者为了得到一种热稳定性较好的脂肪酶新酶种,通过研究分离白极端环境的Aspergillus sp．的最佳产酶条件及其所产脂肪酶的酶学性质,得出了该菌产酶的最佳发酵条件为：以1％黄豆饼粉为氮源、0．2％玉米淀粉为碳源,1．5％橄榄油为诱导物,起始pH6．0左右。装量10mL（250mL三角瓶。摇瓶转速180r／min）、发酵时间为96h。在最佳发酵条件下可得最大发酵酶活36U/mL。Aspergillus sp．所产的脂肪酶的酶学性质是：最适pH为9．0,在pH5．0—10．0于20℃下放置24h后,残余酶活仍保持在起始酶活的90％以上;该酶的最适温度为50℃,50℃保温60min后仍保留70％以上的酶活。Aspergillus sp．所产脂肪酶的热稳定性较好。     

产低温脂肪酶非极端细菌的筛选、产酶发酵及粗酶性质研究

目的：筛选产低温脂肪酶非极端细菌菌株,扩大脂肪酶的应用范围。方法：利用维多利亚蓝B平板显色法和摇瓶发酵法,从土壤中筛选产脂肪酶菌株,通过菌落形态和菌体特征观察初步对菌种进行鉴定,并对该菌株的产酶发酵培养基进行了优化。结果：得到一株产低温脂肪酶非极端细菌菌株sybc—li一1,该菌株适宜产酶培养基（％）为淀粉1、牛肉浸膏1、NaNO3 0．08、CaCl2 0．04、MgSO4 0．04、橄榄油2和OP1;初始DH8、30℃、200r／min培养72h,脂肪酶活力可高达到30．2U／mL;所产脂肪酶粗酶最适作用温度20℃,最适pH9．5,0℃时仍能保持70％的酶活性,属于低温酶;该酶与目前报道的低温脂肪酶相比,有较好的热稳定性,粗酶在pH8．5、70℃条件下保温60mla,酶活力损失30％。结论：该菌株为自然环境中筛选的非极端细菌,所产脂肪酶为低温脂肪酶,在开发应用上有良好的前景。     

碱性β-甘露聚糖酶的产生条件及一般特性

由我国内蒙乌杜淖碱湖中分离到一株能产β-甘露聚糖酶的嗜碱芽孢杆菌(AlkaliphilicBacillus sp,),产酶的最适培养基为(％)：槐豆胶2．0,谷氨酸钠1．5,K2HPO.O.1,MgSO47H2O 0.02,NaCl 8.0及Na2CO31.0。产酶的最适温度和pH分别为32℃和10.0,酶的最适反应纬度和PH分别别为70℃和9．5-1 0．0,该酶在pH9．0-10.0范国内稳定。酶对魔芋粉和槐豆胶的水解产物主要为寡糖。     

产酸克雷伯氏菌耐氧产氢及其可溶性氢酶耐氧特性研究

目的：考察产酸克雷伯氏菌（KZebsielaloxytocaHPl）耐氧产氢特性及其可溶性氢酶的氧耐受特性。方法：研究K．oxytocctHPl在不同气相氧浓度条件下利用葡萄糖（1％,m/v）、丙酮酸钠（0．5％,m／v）及甲酸（0．1％,v／v）等底物产氢活性的以及K．oxyto-07,HPl可溶性氢酶在空气及氧饱和溶液中催化产氢活性。结果：K．oxytocaHP1在葡萄糖（1％,m/v）底物中具有较高耐氧产氢活性,6h内在气相氧浓度为5％、10％和21％条件下的氢产量分别为厌氧条件下的20．9％、13．7％、8．3％;K．oxytoca HP1可溶性氢酶在空气中孵育12h后,其活性残余85．4％,在氧饱和溶液中活性损失一半约3h。结论：试验结果提示K．oxytoca HP1具有耐氧产氢特性,其可溶性氢酶具有较高氧耐受性,在氢能源的开发中具有潜在的应用前景。     

L-山梨糖发酵产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的研究II．发酵条件的研究

对产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的优良菌株N1197 A,进行了一系列摇并条件试验。掭加玉米浆及尿素是提高产酸的有效手段,尿素浓度以0.5—0.8％为好,确定了培养基组成(％)为：K2HP4．0.07、KH2PO4 0．03,甘油 0.2,MgSO4．·7H2O 0.01, 轻体CaCO3 0.5,玉米浆0.5,尿素(0.5,自来水配制,自然pH。在碳酸钙添加试验中,当培养基中有尿素时,不加碳酸钙与加碳酸钙产酸量相同。 分批补加尿素或(NH4)2HPO4．使发酵液pH保持在6—6.5,产酸量随着补加次数加多而增加。在发酵过程中,补加尿素调节发酵液pH是本发酵的特点。     

革兰阴性杆菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药分析

目的检测引起医院感染的革兰阴性杆菌携带产ESBLs和去阻遏AmpC酶状况,探讨各菌对临床常用抗生素的主要耐药机制及耐药性,为临床制定合理使用抗生素策略提供依据。方法采用全自动微生物分析仪（VITEK-32）做细菌鉴定和药敏试验,用纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,用三维法检测高水平表达染色体编码的AmpC酶。结果158株革兰阴性杆菌ESBLs检出率为26．6％,主要菌为大肠埃希菌（45．2％）、肺炎克雷伯菌（42．9％）、阴沟肠杆菌（11．9％）。AmpC酶检出率为10．1％,主要为鲍曼不动杆菌（43．8％）、阴沟肠杆菌（25％）;上述产酶细菌均对青霉素和一、二、三代头孢菌素、磺胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类耐药,对亚胺培南敏感。结论革兰阴性杆菌耐药机制主要是产超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶,这些产酶菌株均出现多重耐药。     

大肠杆菌及其L型β－葡萄糖醛酸酶活性测定

本文采用改良的Ｆｉｓｈｍａｎ法对胆石症、胆系感染者的胆汁标本中分离出的２０株大肠杆菌及其Ｌ型进行β－葡萄糖酸酶活性测定。结果显示２０株大肠杆菌及其Ｌ型均可产生β－葡萄糖醛酸酶,但大肠杆菌Ｌ型产此酶的能力仅为其细菌型的５８．６９％。胆汁中的细菌主要以Ｌ型的形式存在,所以,大肠杆菌Ｌ型与胆红素钙结石的形成有关。     

高产超氧化物歧化酶菌株发酵条件的研究

从1348株芽孢杆菌(Bacillus cereus)中分离和选育出高产超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)菌株C328,并进行了产酶条件的研究。结果表明,该菌株最佳产酶的最适温度为30～35℃,培养基最适起始pH为8．0～8．5。金属离子Cd^2 、Mn^2 、Zn^2 ,表面活性剂吐温80、司班80、琥珀酸钠和无机盐CaCl2、CaCO3对产酶有抑制作用。适宜浓度的K2HPO4、EDTA、金属离子Fe^3 和表面活性剂NaAC对产酶有明显的促进作用。发酵培养用250mL三角瓶以30mL装液量酶活力最高。适宜种龄为8～12h,适宜接种量为0．9％～3％,最佳接种量为1％～2％。     

嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophile)液体发酵产生纤维素酶及酶学性质的研究

探讨了嗜热真菌Chaetomium thermophile产生纤维素酶的液体发酵条件及滤纸酶(FPA)的特性。采用液体发酵培养法,通过对碳源、氮源、培养时间、培养基的起始pH值及产酶过程中pH值和蛋白质含量变化的研究发现：在2％纤维素、1％可溶性淀粉为碳源;2．0％KNO3 0．2％酵母粉为氮源;起始pH值为6．5,50℃下培养9d后,各种酶活最高。发酵过程中,pH值和蛋白质的含量均在前3d下降,后升高。FPA的反应最适温度和pH值分别为60℃和5．5～6．0;且具有较高的热稳定性和DH稳定性。     

简讯

青霉素酰化酶水解青霉素-G生产6-氨基青霉素烷酸(6-APA)我们从9个属234株细菌中筛选出19株产青霉素酰化酶的大肠杆菌,其中AS1.76和E110两株菌的酶活较强。通过培养条件试验,选出了两种适宜的培养基。一种是玉米浆-蔗糖培养基,另一种是鱼胨培养基,     

酸性木聚糖酶产生菌的筛选及产酶条件

从１５０株真菌中筛选到８株产木聚糖酶活力在１００Ｕ／ｍＬ以上的菌株,其中活力最高的为黑曲霉（编号１４９）（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）。该菌株产酶较适培养基为：麸皮半纤维素４％,ＮａＮＯ３１％,麸皮１％,用不加（ＮＨ４）２ＳＯ４和尿素的Ｍａｎｄｅｌｓ氏营养盐液配制。２８℃～３０℃振荡培养６０ｈ,酶活力最高可达３７５．２Ｕ／ｍＬ。该酶最适作用ｐＨ为４６,在ｐＨ３～１１之间基本稳定。该菌株发酵液中含有木聚糖酶（相对活力１００）外还有淀粉酶（１８）,甘露聚糖酶（０９８）,β木糖苷酶（０９４）和纤维素酶（０１７）。     

一株中性蛋白酶产生茵的筛选及产酶条件优化

从酒曲中筛选出一株高产蛋白酶的菌株,命名为OPY6,初步鉴定为假单胞菌Pseudomonassp．,经Plackett．BurmanDesign设计和Box．Behnken响应面设计对其产酶培养基做了优化,最优产酶条件为：葡萄糖2．83％,淀粉0．87％,酵母膏0．55％,氯化钙0．001％,氯化钠0．5％,黄豆粉1％,初始pH=7．0,在最佳培养基添加量下蛋白酶活提高到134．718U／mL;又对该酶在水产蛋白降解过程中的酶解效果进行了评价。