利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌的增效作用

目的测定利福喷丁(Rifapentine)对氟康唑(Fluconazole)体外抗耐药白念珠菌的增效作用。方法参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的M27-A2方案测定利福喷丁与氟康唑对白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);利用棋盘式微量液基稀释法测定利福喷丁联合氟康唑体外抗白念珠菌的效果。结果利福喷丁单药时对实验所用12株白念珠菌均无抗菌活性(MIC801 024μg/mL)。在氟康唑敏感白念珠菌株中,利福喷丁联合氟康唑后未表现出协同效应(FICI0.5);在氟康唑耐药白念珠菌中,利福喷丁联合氟康唑后均表现出显著的协同作用(FICI0.1)。结论利福喷丁单用无抗白念珠菌活性,但利福喷丁能显著增强氟康唑抗耐氟康唑白念珠菌活性。     

利福喷丁联合氟康唑对耐药白念珠菌细胞周期的影响

目的探索利福喷丁(rifapentine)联合氟康唑(fluconazole)对耐氟康唑白念珠菌细胞周期的影响。方法将白念珠菌菌悬液与利福喷丁和(或)氟康唑共同培养12h,碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测空白对照组、利福喷丁组、氟康唑组及利福喷丁与氟康唑联合用药组DNA含量,分析利福喷丁及其联合氟康唑对细胞周期的影响。结果与空白对照组、利福喷丁组及氟康唑组相比,联合用药组G0/G1期DNA含量均减少(P0.01),G2/M期DNA含量均显著增加(P0.01)。说明利福喷丁与氟康唑合用时组细胞周期阻滞在G2/M期。结论利福喷丁与氟康唑联合用药时能阻断耐药白念珠菌细胞周期进程,抑制细胞的正常分裂增殖。     

他克莫司与常用抗真菌药体外协同抗白念珠菌作用的初探

正近年来,为应对真菌耐药率的增加,我们尝试筛选出一些对常用抗真菌药物具有协同作用且易获取的药物。先前的研究已经观察到28种非经典抗真菌药,如他克莫司、舍曲林和利福喷丁与适当浓度的氟康唑联用对白念珠菌的体外抑制作用,其中他克莫司(FK506)和环孢菌素A(CyA)对氟康唑表现出最显著的体外协同抗白念珠菌作用[1]。我们采用棋盘式微量液基稀释法对他克莫司与部分常用抗真菌剂的体外协同作用进行了比较,进而筛选出药物组合的最佳方案。     

芒果苷协同氟康唑抗耐药白念珠菌作用研究

目的研究芒果苷与氟康唑合用对唑类耐药白念珠菌协同抗真菌的作用和机制。方法采用棋盘式微量稀释法测试芒果苷协同氟康唑对22株耐药白念珠菌的最小抑菌浓度MIC80;时间-杀菌曲线探究两药联用对4株耐药白念珠菌生长的抑制作用;药物生长抑制实验实验探究不同浓度芒果苷和不同浓度氟康唑协同抗耐药白念珠菌药效;通过实时定量RT-PCR检测两药联用时耐药基因CDR1、CDR2、MDR1表达水平。结果芒果苷联合氟康唑可产生协同抗唑类白念珠菌作用,协同指数(FICI)0.5;两药合用对白念珠菌生长可产生抑制作用;两药合用降低耐药基因CDR1表达水平。结论芒果苷与氟康唑合用可产生协同抗唑类耐药白念珠菌作用。     

反转录转座子TCA4与白念珠菌耐药性的研究

目的研究高温刺激下白念珠菌中反转录转座子的表达情况与耐药性产生的关系,探寻白念珠菌耐药的分子机制。方法微量液基稀释法测定氟康唑对高温诱导的白念珠菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）;斑点法（spotassay）考察诱导菌株对药物的耐受能力;实时定量PCR（RT-PCR）方法检测诱导菌株中反转录转座子TCA4中开放阅读框的表达水平。结果长期高温刺激能降低白念珠菌对氟康唑（16μg／mE）的耐受能力;高温诱导菌株中反转录转座子TCA4中Orf19．2668和Orf19．2669的表达水平相比于亲本菌ATCC10231发生高表达。结论高温刺激能使反转录转座子TCA4发生转座激活,反转录转座子TCA4的转座激活与白念珠菌耐药性形成相关,与此同时可能还有其他机制参与白念珠菌耐药性的形成。     

黄芩素与氟康唑协同抗白念珠菌生物被膜作用研究

目的：研究黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌生物被膜形成的影响。方法采用激光共聚焦显微镜观察黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌生物被膜生长形态的影响;采用 XTT 法考察黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌生物被膜形成能力的影响;应用水-烃两相测定实验考察黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌生物被膜细胞表面疏水性（ Cell surface hydrophobicity, CSH）的影响;应用实时定量 RT-PCR（Real Time RT-PCR）实验考察黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌 CSH1、EFG1、HWP1、ALS1基因表达的影响。结果黄芩素与氟康唑合用能够协同抑制白念珠菌生物被膜的形成,经黄芩素与氟康唑处理的白念珠菌不能形成正常的生物被膜,其生长动力学及细胞表面疏水性下降,细胞疏水性相关基 CSH1、菌丝形成调控基因EFG1、黏附相关基因 HWP1基因的表达水平降低。结论黄芩素与氟康唑合用可协同抑制白念珠菌生物被膜的形成。     

覆盆子提取物联合唑类药物抗真菌活性研究

目的 探讨中药覆盆子提取物联合唑类药物的体外抗真菌作用.方法 采用CLSI公布的M27-A方案微量液基稀释法和棋盘式微量稀释法,测定覆盆子提取物单用及联合唑类药物对不同念珠菌的MIC值和FICI指数.结果 覆盆子不同溶液提取物与氟康唑均表现出协同关系,以覆盆子醇提物为例,单用对念珠菌的MIC80测定值范围主要集中在0.16～1.25 mg/mL,与氟康唑合用后表现出协同关系(FICI≤0.5),且MIC80测定值范围降至0.01 ～0.04 mg/mL;合用后的氟康唑抗真菌活性也明显增强.另外,覆盆子醇提物与不同唑类药物合用后均有协同关系,其MIC80测定值由单用时大于10 mg/mL降至0.04 mg/mL.结论 覆盆子醇提物和唑类药物单用时对耐药念珠菌的抑菌作用较弱,但二者合用后表现出明显的协同关系,对耐药念珠菌的抑菌作用明显增强.     

棘白菌素对氟康唑耐药的念珠菌体外药物敏感性的研究

目的评价3种棘白菌素类药物（卡泊芬净、米卡芬净、阿尼多芬净）体外对氟康唑耐药念珠菌的药物敏感性。方法采用微量液体稀释法和琼脂稀释法测定最小抑制浓度（MIC）。结果微量液体稀释法：59株耐药白念珠菌3种药物MIC50均为0.06μg/mL,米卡芬净、阿尼多芬净的MIC范围均为0.015～0.125μg/mL,卡泊芬净为0.015～0.25μg/mL;8株耐药光滑念珠菌MIC值均为0.063μg/mL。琼脂稀释法：59株耐药白念珠菌和8株耐药光滑念珠菌3种药物MIC值均为0.063μg/mL。结论3种棘白菌素类药物可能具有治疗氟康唑耐药的念珠菌感染的临床价值。     

Ridaforolimus体外单独或联合氟康唑抗念珠菌作用的研究

由念珠菌感染引起的侵袭性念珠菌病治疗困难、死亡率高,是临床一大难题。氟康唑是目前治疗该病的一线用药,但近年来耐药菌株逐渐增多,治疗困难。因此,开发新的有效抗真菌药物或发现可提高现有抗真菌药物活性的化合物十分必要。通过体外抗真菌药物敏感性试验,我们发现TOR通路抑制剂ridaforolimus具有抗念珠菌作用。随后我们通过纸片法及微量液基稀释法评价该化合物单独或与氟康唑联合对念珠菌的抗菌效果。结果表明ridaforolimus对念珠菌有杀伤作用,在与氟康唑联合时增强了氟康唑的抗念珠菌能力,逆转了白念珠菌对氟康唑的耐药,并将氟康唑由抑菌剂转化为杀菌剂。本研究为ridaforolimus作为新型抗真菌药及氟康唑增敏剂提供了一定理论基础。     

外阴阴道念珠菌病的病原检测及体外药敏试验

目的了解STD门诊患者外阴阴道念珠菌病的菌种分布及对常用抗真菌药物的敏感状况,为临床治疗提供参考。方法取STD门诊疑似念珠菌感染患者的阴道分泌物标本,用沙氏琼脂培养基分离纯化菌株,然后用ATB ID 32C酵母菌鉴定系统和ATB Fungus3药敏系统进行菌种鉴定与药物敏感试验。结果950份标本中检出306株念珠菌,占32.21%,其中白色念珠菌226株,阳性率为73.86%;光滑念珠菌37株,阳性率为12.09%;热带念珠菌24株,阳性率为7.84%;近平滑念珠菌13株,占4.25%。药敏结果显示：念珠菌对5-氟胞嘧啶（5-FC）;两性霉素B（AMB）,伏立康唑（VRC）耐药率〈6%;近平滑念珠菌对5种抗真菌药物均敏感;白色念珠菌对氟康唑（FCZ）、伊曲康唑（ICZ）耐药率依次：9.29%、11.06%,光滑念珠菌药耐药率依次为37.84%,67.57%,热带念珠菌药耐药率依次为8.33%、12.5%。结论STD门诊患者阴道念珠菌检出率明显高于普通妇科门诊患者,检出菌种仍以白色念珠菌为主,但光滑念珠菌和热带念珠菌生殖道感染有明显上升趋势;念珠菌对两性霉素B、5-氟胞嘧啶敏感性较高,对唑类药物有耐药菌株。因此,念珠菌鉴定和药敏监测是非常必要的,临床医生应根据药敏结果合理使用抗真菌药物。     

焦性没食子酸联合唑类药物对念珠菌的抑菌作用

目的了解光滑念珠菌临床菌株的药敏情况以及中药单体焦性没食子酸联合唑类药物对念珠菌的抑菌作用。方法收集临床分离的光滑念珠菌116株、白念珠菌49株、热带念珠菌42株、克柔念珠菌4株和近平滑念珠菌13株,采用ATB FUNGUS3药敏试条检测光滑念珠菌的药敏情况;同时采用棋盘肉汤稀释法检测焦性没食子酸联合唑类药物对念珠菌的抑菌情况。结果116株光滑念珠菌中,14.66%(17株)的菌株对氟康唑耐药,22.41%(26株)对伊曲康唑表现为非野生型和81.03%(94株)对伏立康唑表现为非野生型。焦性没食子酸对5种念珠菌的抑菌情况,46.55%光滑念珠菌的MIC值为64μg/mL;34.69%白念珠菌的MIC值为64μg/mL;59.52%热带念珠菌的MIC值为64μg/mL;25%克柔念珠菌的MIC值为128μg/mL;46.15%近平滑念珠菌的MIC值为128μg/mL。唑类药物与焦性没食子酸联合用药时,100%、99.14%、99.14%的光滑念珠菌分别对氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑表现为协同作用或相加作用,差异无统计学意义(P>0.05);而白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌均表现为无关作用和拮抗作用。与单独用药相比,联合用药时81.03%、68.1%、77.59%的光滑念珠菌分别对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的MIC值降低2~3个浓度梯度,且耐药组与非耐药组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论光滑念珠菌对唑类药物具有耐药性,伏立康唑非野生型菌株所占比例最高。焦性没食子酸单独用药时,5组念珠菌中对光滑念珠菌的抑菌效果最好,且敏感组比耐药组的抑菌效果更加显著。焦性没食子酸联合唑类药物显著降低了光滑念珠菌唑类药物的MIC值,且耐药组比非耐药组的效果更加显著,为中西医结合治疗临床光滑念珠菌感染提供实验依据。     

男性尿道炎和包皮龟头炎致病真菌的分布与药敏分析

目的了解男性念珠菌性尿道炎和包皮龟头炎的菌群分布及体外抗真菌药敏试验情况。方法菌株分离均来自复旦大学附属华山医院皮肤性病门诊临床症状轻重不一、真菌直接镜检阳性的61例患者。用科玛嘉念珠菌显色培养基及API 20C AUX鉴定系统进行菌种鉴定;采用CLSIM27-A2肉汤微量稀释法对61株临床分离念珠菌作了氟康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬6种抗真菌药物敏感性测定。结果对培养阳性的61例菌株,通过科玛嘉念珠菌显色培养基及API 20C AUX鉴定系统作菌种鉴定,白念珠菌52例（85.2%）,近平滑念珠菌3例,光滑念珠菌2例,热带念珠菌2例,季也蒙念珠菌1例,克柔念珠菌1例。对52株白念珠菌的药敏试验显示氟康唑98.1%敏感,1.9%剂量依赖性敏感;氟胞嘧啶96.2%敏感,3.8%耐药;伊曲康唑44.2%敏感,40.5%剂量依赖性敏感,15.3%耐药;伏立康唑84.6%敏感,15.4%耐药;两性霉素B全部敏感;特比萘芬的MIC范围为1-64μg/ml,MIC50和MIC90皆为64μg/ml。结论在男性念珠菌性尿道炎和包皮龟头炎中,白念珠菌仍是第一位致病菌,体外药敏试验显示氟康唑、伏立康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B对男性念珠菌性尿道炎均有较好的敏感性。     

Calcineurin is essential for survival during membrane stress in Candida albicans

The immunosuppressants cyclosporin A (CsA) and FK506 inhibit the protein phosphatase calcineurin and block T-cell activation and transplant rejection. Calcineurin is conserved in microorganisms and plays a general role in stress survival. CsA and FK506 are toxic to several fungi, but the common human fungal pathogen Candida albicans is resistant. However, combination of either CsA or FK506 with the antifungal drug fluconazole that perturbs synthesis of the membrane lipid ergosterol results in potent, synergistic fungicidal activity. Here we show that the C.albicans FK506 binding protein FKBP12 homolog is required for FK506 synergistic action with fluconazole. A mutation in the calcineurin B regulatory subunit that confers dominant FK506 resistance (CNB1-1/CNB1) abolished FK506-fluconazole synergism. Candida albicans mutants lacking calcineurin B (cnb1/cnb1) were found to be viable and markedly hypersensitive to fluconazole or membrane perturbation with SDS. FK506 was synergistic with fluconazole against azole-resistant C.albicans mutants, against other Candida species, or when combined with different azoles. We propose that calcineurin is part of a membrane stress survival pathway that could be targeted for therapy.     

白念珠菌SSK1突变株对氟康唑敏感性的初步研究

目的探讨氟康唑作用于白念珠菌双组分信号传导途径SSK1突变株SSK21后药物敏感性的变化。方法采用微量液体稀释法和固醇测定法测定野生株(CAF2-1)和突变株(SSK21)的最小抑菌浓度(MIC);并应用RT-PCR观察氟康唑作用前后,SSK1的表达变化。结果氟康唑对CAF2-1的MIC为16μg/mL,对SSK21为0.032μg/mL。加入氟康唑后,CAF2-1的SSK1表达明显增加,60min时达到最多。结论 SSK21对氟康唑高度敏感,SSK1基因及其相关的重要基因与药物敏感性的关系值得进一步研究,从而为新的抗真菌药物和治疗途径的研发提供参考。     

地塞米松影响念珠菌对抗真菌药物敏感性的实验研究

目的 探讨地塞米松在体外试验中是否影响念珠菌对抗真菌药物的敏感性,以了解糖皮质激素与抗真菌药物直接作用于念珠菌时是否存在相互作用。方法 用微量液体培养基稀释法分别测定26株白念珠菌与地塞米松（0．2mg／ml）共同孵育前、孵育24～48h及7d时氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B的最低抑菌浓度（MIC）值,并作对照。结果 白念珠菌与地塞米松孵育24～48h后、孵育后第7d氟康唑和伊曲康唑的MIC值升高,分别与孵育前的MIC值存在统计学差异,但孵育24～48h后的MIC与孵育后第7d的MIC无统计学差异;白念珠菌与地塞米松共同孵育24～48h后两性霉素B的MIC值也较孵育前升高,但第7d的MIC值与孵育前无差异。结论 地塞米松可增加三种抗真菌药物对于白念珠菌的MIC,但三种抗真菌药物间存在差异,表明地塞米松对于氟康唑和伊曲康唑体外抗白念珠菌的活性有拮抗作用,但没有时间依赖性,地塞米松对于两性霉素B的影响较氟康唑和伊曲康唑小,且影响时间较短。     

苦寒类中药抗白念珠菌的研究进展

深部真菌(主要为白念珠菌)感染现象在临床中越来越常见,真菌耐药已经成为目前治疗的主要难题.传统中医理论认为“苦寒燥湿”类中药能有效治疗各种感染,对寻找抗耐药白念珠菌新药及协同药物具有一定的指导意义.该文主要总结阐述苦寒类中药抗真菌研究进展.     

黄粉虫抗菌肽Tenecin蛋白的纯化及其抑菌活性研究

目的 纯化黄粉虫抗菌肽Tenecin蛋白,并检测其抑菌活性.方法用1 mmol/L IPTG大量诱导表达Tenecin蛋白,纯化后检测其抑菌活性,包括金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 29213,大肠埃希菌（Escherichia coli）ATCC 25922,白色念珠菌（Candida albicans）ATCC 10231和痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae）CMCC 51252等4种标准菌.结果 SDS-PAGE电泳检测表明已获得纯化的Tenecin蛋白;体外抑菌试验结果表明,浓度为120、60、30、15 μg/ml的Tenecin与4种标准菌共培养18 h后,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,而对白色念珠菌的抑制作用最弱.对同一菌种而言,浓度为60和30 μg/ml两组间无统计学意义（P＞0.05）,而其他各浓度的组间均有显著性差异（P＜0.01）;对同一浓度的Tenecin而言,其对白色念珠菌和痢疾志贺氏菌的抑菌效果组间无统计学意义（P＞0.05）,其余各组之间均有显著性差异（P＜0.01）.结论 获得的Tenecin蛋白可明显抑制病原菌,为进一步研究其抑菌机理和后期研发奠定了基础.     

In vitro resistance to fluconazole and itraconazole in clinical isolates of Candida spp and Cryptococcus neoformans

An in vitro susceptibility testing of 181 strains of six species of Candida and 21 strains of Cryptococcus neoformans was carried out in order to investigate the resistance to new antifungal drugs. We have studied clinical isolates from 200 different patients of Hospital del Mar (Barcelona) and Hospital La Inmaculada (Almería). An agar diffusion method (NeoSensitabs, Rosco, Taastrup, Denmark), was employed with fluconazole, itraconazole, and reference drugs amphotericin B, flucytosine, tioconazole and ketoconazole. A high level of susceptibility was found for amphotericin B in C. neoformans strains while 19% of them were resistant to flucytosine. All the strains of C. neoformans and Candida guilliermondii were susceptible to the new azoles derivatives and also Candida parapsilosis and Candida albicans had a great susceptibility to this antifungals. A greater level of resistance was found for Candida krusei, Candida tropicalis and Candida glabrata to fluconazole, itraconazole and ketoconazole, but resistance to fluconazole and itraconazole is not always linked because ten resistant strains for fluconazole were susceptible to itraconazole, and two other resistant to itraconazole were susceptible to fluconazole.