核糖体 RNA 的生物功能、自我剪接与自我复制

核糖体RNA在肽链合成的起始、延伸和终止等整个过程中都有重要的功能。RNA N-糖苷酶是一类核糖体失活蛋白;它只水解rRNA特定位置上的一个腺苷酸的糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白是一种核糖体失活蛋白。目前已知最小的ribozyme是人工合成的13寡聚核糖核苷酸。利用四膜虫ribozyme转磷酸酯的逆反应合成了一个42寡聚核糖核苷酸。这说明RNA可以催化RNA的合成。     

猪流感病毒血凝素基因的克隆和序列测定

本文报道了以两种化学合成的寡脱氧核苷酸引物合成了猪流感病毒NJ／11,76(X53a)株血凝素基因的全长拷贝。并将它克隆到大肠杆菌R RI细胞,进行了核苷酸全序列测定。同时将血凝素的氨基酸序列与同一亚型的另两个人甲型流感毒株的氨基酸序列进行了比较。     

糖核苷酸的生物合成和应用

糖基化是生物体中最重要的反应之一,通过糖基化作用可以形成具有多种生物功能的糖缀合物。糖核苷酸作为Leloir型糖基转移酶催化的转糖基反应的糖基供体,在聚糖和糖缀合物的生物合成中必不可少。然而,糖核苷酸的成本较高、可用性有限等因素阻碍了生物催化级联反应在工业中大规模的应用。因此,人们越来越关注糖核苷酸的合成策略,以实现其在多种领域的广泛应用。目前,糖核苷酸及其衍生物的化学合成方法已经建立起来,但合成反应的产量通常很低,而酶法（化学-酶法）和细胞工厂法在合成糖核苷酸过程中具有显著优势。本文主要围绕哺乳动物中常见的9种糖核苷酸,概述了其类型和结构、酶法（化学-酶法）和细胞工厂法两种制备方法。伴随糖核苷酸的高效合成,其多种功能逐渐被发现和应用。本文进一步概述了糖核苷酸在聚糖及糖缀合物合成、糖基转移酶生化性质表征以及生物正交标记策略等方面的应用,对生物化学、糖生物学的研究以及相关医药产品的研发具有十分重要的意义。     

鞘内注射M受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸抑制吗啡戒断大鼠蓝斑c-Fos表达

应用免疫组化方法观察鞘内注射毒蕈碱型乙酰胆碱(muscarinic acetylcholine receptor,M) 受体和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)反义寡脱氧核苷酸对吗啡戒断大鼠蓝斑(locus coeruleus,LC)区内Fos表达的影响。结果显示,鞘内注射M_2受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸明显减少大鼠吗啡戒断症状评分值(n=6,P<0.05)。正常大鼠LC区神经元Fos基础表达较低,吗啡依赖大鼠LC区神经元Fos表达增加,吗啡依赖大鼠纳酪酮(4mg/Kg,ip)催促戒断后,Fos表达进一步增加;鞘内注射M_2受体和GDNF反义寡脱氧核苷酸处理后均减少吗啡戒断大鼠LC区神经元Fos表达(n=5,P<0.05)。而鞘内注射M_1受体反义寡脱氧核苷酸处理组LC 区神经元Fos表达较吗啡戒断组没有显著差异(n=5,P>O.05)。结果提示:脊髓M_2受体调节吗啡戒断时LC区的神经元激活,而这种神经上行性激活涉及神经元与胶质细胞之间的适应性调节。     

5＇-核苷酸的合成方法比较

5’-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途。比较了目前5’-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法。     

5′-核苷酸的合成方法比较

5′-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途。比较了目前5′-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法。     

M受体对吗啡戒断大鼠脊髓和脑干NMDA受体基因表达及中脑导水管周围灰质中谷氨酸释放的调节

应用鞘内注射反义寡脱氧核苷酸技术和RT—PCR反应,观察毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,M)对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干NMDA受体NR1A和NR2A mRNA表达和中脑导水管周围灰质区(periaqueductal grey,PAG)中谷氨酸释放的影响。结果显示,吗啡依赖大鼠脊髓NR1A和NR2A mRNA表达明显升高,而脑干中NR1A和NR2A mRNA表达没有显著变化;注射纳洛酮后1h,吗啡戒断大鼠脊髓和脑干中NR1A和NR2A表达显著高于依赖组,经NMDA受体拮抗剂MK801(0．125mg／kg,i．p．)、M受体拮抗剂东莨菪碱(0．5mg／kg,i．p．)、M1受体拮抗剂呱伦西平(10mg/kg,i．p．)和NOS抑制剂L-NAME(10mg／kg,i．p．)处理后,脊髓和脑干中NR1A和NR2A基因表达都较戒断组明显减少。在纳洛酮激发前24h鞘内注射NR1A和M2受体的反义寡脱氧核苷酸(4μg／只),戒断症状评分值及脊髓和脑干的NR1A mRNA的表达均较对照组明显减少。吗啡依赖大鼠在纳洛酮注射前24h鞘内注射M2受体反义寡脱氧核苷酸(4μg/只),可以明显减少PAG内透析液中谷氨酸含量。上述结果提示：NMDA受体的基因表达和谷氨酸释放参与吗啡戒断过程,而这种表达受到M受体的调节。     

5'-核苷酸的合成方法比较

5'-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途.比较了目前5'-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法.     

DNA引发酶及其在肿瘤增殖和治疗中的作用

DNA聚合酶不能从游离的核苷酸开始合成DNA链,由DNA引发酶合成约7～10个核苷酸的RNA引物．DNA聚合酶利用引物提供自由的3′-OH末端合成新的DNA链。DNA引发酶在DNA复制的起始中起重要作用,而DNA复制是肿瘤细胞增殖的关键,抑制DNA引发酶活性,使引物的合成或延长受阻．DNA复制受抑制,肿瘤细胞不能增殖,从而达到抗肿瘤的目的。因此DNA引发酶是抗肿瘤药物研究的一个理想靶点。     

英科学家合成人干扰素的基因获得成功

最近,英国帝国化学工业公司(ICI)和莱斯特大学联合组成的一个九人研究小组成功地把514个核苷酸连接在一起,合成一个迄今为止的最新的基因——人干扰素基因。干扰素是人体自然产生的物质。它可用于预防病毒感染,还可能用于治疗癌症。他们在连接成完整基因之前是分别合成15个或15个以上的核苷酸小片断,然后再组装成双链短片段,最后再连接成完整的基因。据称,这个完整基因已引入细菌载体上进行扩增。它究竟能否指使细菌合成干扰素还有待下一步的研究结果。     

NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术的发展和应用

NF κB是一种重要的核转录因子 ,可被多种刺激因素激活 ,并转位至细胞核 ,与相应的靶基因结合 ,启动基因转录。NF κB的靶基因包括编码细胞因子、粘附分子、诱导型一氧化氮合酶等的基因 ,因此与多种炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发生有关。人工合成的双链NF κB圈套寡脱氧核苷酸含有NF κB结合位点 ,可与游离的NF κB结合 ,从而圈套了NF κB ,阻止其活化。NF κB圈套寡脱氧核苷酸已成功用于多种疾病的发病机制及治疗学研究 ,具有广泛的应用前景     

大鼠肝含5~1端氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因的克隆

为研究氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPS Ⅰ)基因表达的调控,我们根据CPS Ⅰ编码1—10氨基酸的mR NA顺序,合成一个30碱基的寡聚核苷酸。以它作为探针从大鼠肝基因库中筛选出一个阳性克隆,λ10。对其中4.5kb插入片断的内切酶谱及部分核苷酸序列测定证明它确含5′上游CPS Ⅰ基因DNA序列。     

反义c-fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

采用离体孵育大鼠黄体细胞的方法,观察了反义c-fos寡脱氧核苷酸(反义c-fos ODN)对hCG诱导的黄体细胞孕酮(P)和雌二醇(E     

寡聚核苷酸用于治疗的前景探讨

寡聚核苷酸用于治疗的前景探讨陆长德（中国科学院上海生物化学研究所２０００３１）具有专一顺序的寡聚核苷酸可用于阻断有害基因的表达,是一种全新的治疗方法。由于它具有很高的特异性,它的降解产物对人体无毒,因此很有吸引力。近年来,寡聚核苷酸用于治疗的研究已进人动物和临床试验阶段,表现出很大的潜力。一、寡聚核苷酸阻断墓因表达的作用机制根据基因表达的中心法则,从贮存在ＤＮＡ中的信息产生有功能的蛋白质,其其中间体是信使RNA。     

名词解释

遗传密码决定生物遗传性的主要物质是DNA,它由四种含不同核酸碱基的核普酸组成,的结构决所合成的蛋白质的结构。每任意联在一起的三个核普酸单位决定蛋白质中一种氨基酸DNA的这种对应氨基酸序列的核苷酸长链,贮存着决定蛋白质一级结构的信息,人们把它叫做传密码。     

应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因

人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义, 因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难, 常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法, 即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60～68 bp)拼接组装起来, 获得了完整的总长为1 226 bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应), 而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少, 技术简单, 出错极少, 是合成长基因序列很好的选择。     

栝楼核糖核酸酶的性质研究

关于栝楼核糖核酸酶的性质已经研究.它对核糖核酸和多聚尿嘧喧核苷酸所显示的酶活性,有很大的相似性:(1)栝楼核糖核酸酶的最适度应pH在5左右;(2)稳定的pH范围在5-12之间;(3)最佳反应温度为55℃左右;(4) 热稳定性:在15分钟内,60℃以下酶活性基本稳定,在65℃左右时大约有50%的活性丧失;(5)金属离子中,除CU~(2+)和Ag~+有明显的抑制作用外、一般作用不明显.另外,酸对其它合成的多聚核苷酸的水解作用,显示有碱基特异性;对双链RNA(CPV RNA)也显有活性.实验中未发现该酶有磷酸单酯酶的活性及降解DNA的活性.因此,该酶可能是一种具有碱基特异性的核糖核酸酶.     

化学合成的人免疫干扰素基因在E.coli中表达

山人的免疫干扰素(hIFN—r)基因,启始和终止信号加上适当的限制酶位点组成的一个454bp的双链DNA片段被总地合成了。该合成包括用快速的固相法制备的62个寡脱氧核苷酸,以及用酶连接这些寡核苷酸。这个合成的基因在lacuv5启动子控制之下,在E.coli中表达。表达产物具有抗病毒活性,该活性系对酸不稳定并完全地被抗hIFN—r抗血清中和,但不能被抗hIFN—α或者hIFN—β抗血清中和。用凝胶过泸法和SDT—聚丙烯酰胺凝胶电泳分别地测出E.coli产生的hIFN—γ的分子量约为32,000和17,000。     

CpG ODN 对破骨细胞分化调控作用的研究进展

CpG ODN(CpG oligodeoxynucleotides)是一类可模拟细菌DNA免疫活性效应的寡脱氧核苷酸,其生物学功能受自身结构特征影响。特定序列的CpG ODN可通过与破骨细胞前体、前破骨细胞、成骨细胞表面的TLR9结合,调节RANKL、M-CSF、TNF-a、IL-12、TREM-2等细胞因子的表达水平,促进或抑制破骨细胞的形成与分化。本文就CpG ODN对破骨细胞(osteoclast,OC)分化调控作用的研究进展加以综述。     

聚丙烯酰胺凝胶技在DNA序列分析中的应用

序列胶 在Maxam-Gilbert化学限制降解及Sanqer的阻断合成序列测定技技中,凝胶电泳按分子大小把寡聚核苷酸片段分开。由两种方法所得到的标记DNA片段都是一端相同而在另一端长短不一。任一片段与其相邻的较小片段相比,总是在其可变端多一个核苷酸。