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液氮研磨是一种从具有坚韧细胞壁的植物细胞中提取RNA的常规方法.然而,对于那种不易得到的少量的植物材料如花粉,这种方法的操作显得尤为困难.针对这一问题.本论文描述了一种不涉及液氮研磨的一种简单的RNA提取方法:改变萌发花粉管的渗透压使其破裂而释放RNA.这一方法减少了RNA抽提材料的用量并且提高了RNA的抽提效率,用于RNA抽提的花粉的量可以少至一个花药.后续的RNA分析需要的花粉可以少至1O毫克,这一用量相当于从50个烟草花药中得到的量.这一RNA提取方法的可靠性和可操作性为研究花粉管生长过程中对细胞外信号响应的基因时空表达提供了有益的参考. 相似文献
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花粉中的收缩蛋白与细胞质流动 总被引:1,自引:0,他引:1
从植物的花粉中提取得到了肌球蛋白和肌动蛋白,用4-30%SDS梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定丝瓜花粉肌球蛋白重链的分子量为165kD.花粉肌球蛋白的ATP酶活性与兔肌肌球蛋白ATP酶活性具有一致的特征,即在0.5mol/l KCl的条件下,其K+-EDTA ATP酶活性最高,Ca^2+-ATP酶活性次之,Mg^2+-ATP酶活性最低,用SDS制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,制备得到了电泳纯的玉米花粉肌动蛋白,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了肌动蛋白的分子量,结果表明,花粉肌动蛋白与兔肌肌动蛋白具有相同的分子量(43kD)。药物处理表明,细胞松弛素B,氯丙嗪和氯四环素对花粉管细胞质流动均有抑制作用。而秋水仙碱对细胞质流动没有抑制作用,对肌球蛋白和肌动蛋白在花粉管细胞质流动中所起的作用进行了讨论。 相似文献
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从植物的花粉中提取得到了肌球蛋白和肌动蛋白,用4-30%SDS梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定丝瓜花粉肌球蛋白重链的分子量为165kD.花粉肌球蛋白的ATP酶活性与兔肌肌球蛋白ATP酶活性具有一致的特征,即在0.5mol/l KCl的条件下,其K+-EDTA ATP酶活性最高,Ca^2 -ATP酶活性次之,Mg^2 -ATP酶活性最低,用SDS制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,制备得到了电泳纯的玉米花粉肌动蛋白,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了肌动蛋白的分子量,结果表明,花粉肌动蛋白与兔肌肌动蛋白具有相同的分子量(43kD)。药物处理表明,细胞松弛素B,氯丙嗪和氯四环素对花粉管细胞质流动均有抑制作用。而秋水仙碱对细胞质流动没有抑制作用,对肌球蛋白和肌动蛋白在花粉管细胞质流动中所起的作用进行了讨论。 相似文献
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以‘土柚’(Citrus grandis ‘Tuyou’)作对照,采用荧光显微技术对‘琯溪蜜柚’(Citrus grandis‘Guanxi-miyou’)、‘度尾蜜柚’(Citrus grandis ‘Duweimiyou’)两个品种花粉在本品种和异品种雌蕊不同部位抽提液中花粉萌发和花粉管伸长状态进行了观察。结果表明:‘琯溪蜜柚’和‘度尾蜜柚’子房抽提液对自身花粉管伸长阻抑最明显,并产生严重的弯曲;柱头抽提液对自身花粉管伸长稍有影响,出现中度弯曲;花柱抽提液中自身花粉管伸长正常,仅有轻微弯曲。然而,对于异品种的花粉以及自交亲和的‘土柚’,其子房、花柱和柱头抽提液对花粉管伸长没有这种阻抑效应。 相似文献
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目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。 相似文献
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藤茶叶片富含多酚、多糖以及黄酮类化合物,严重干扰了其总RNA的提取。实验在裂解前先用70%丙酮对藤茶叶片冷冻研磨材料进行多次抽提,然后采用试剂盒提取法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取总RNA。结果表明,经丙酮预处理后,上述3种方法均能从藤茶叶片中成功提取到高质量的RNA,其完整性好,纯度高,D260 nm/D280 nm值介于1.8~2.0之间,产率为22.74~33.66μg/g。以提取的总RNA逆转录的c DNA为模板进行RT-PCR,克隆到一条长度为817 bp的pal片段。经Blast比对分析,该基因片段与葡萄、茶树等物种的pal之间具有较高的同源性。 相似文献