CREG促进小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体发生及溶酶体组织蛋白酶表达*

目的:研究E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体发生及溶酶体组织蛋白酶表达的影响。方法:应用loss-of-function和gain-of-function模型,Lysotracker Red染色和透射电镜观察CREG对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体发生的影响,并通过细胞免疫荧光染色和Western blot方法,观察CREG对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体组织蛋白酶表达的影响。结果:Lysotracker Red染色和透射电镜证实CREG可促进小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体发生;细胞免疫荧光染色和Western blot方法证实CREG可促进小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体组织蛋白酶cathepsin B及cathepsin S表达。结论:CREG可促进小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体发生及组织蛋白酶cathepsin B及cathepsin S表达。     

小鼠腹腔巨噬细胞的分离与培养

目的:建立一种小鼠腹腔巨噬细胞分离的简便方法,为低强度激光照射对巨噬细胞功能的影响研究提供实验细胞.方法:以无血清的RPMI-1640培养液灌洗小鼠腹腔,分离获取小鼠腹腔巨噬细胞,在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中培养.采用倒置显微镜观察细胞形态,台盼蓝染色计算存活率,瑞氏染色计算纯度.结果:获得高纯度的巨噬细胞,具备巨噬细胞的形态特征.结论:本法是一种简便实用的分离小鼠腹腔巨噬细胞的方法.     

小鼠腹腔巨噬细胞被S-O_2—1激活后的抑瘤作用 Ⅰ.小鼠腹腔巨噬细胞的体外细胞毒作用及扫描电镜观察

在六十年代Mathe就用卡介苗来治疗小儿白血病,并获得了良好的效果。以后人们开始重视如何利用微生物佐剂刺激机体的防御机制,增强机体对肿瘤的排斥能力,来达到提高肿瘤治疗效果的目的。     

绿原酸对小鼠腹腔巨噬细胞免疫调节作用的研究

研究绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)对静息状态及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)激活状态下小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。采用不同浓度的绿原酸作用于静息的和经LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测巨噬细胞吞噬能力,Griess法检测NO的产生,酶联免疫法(ELISA)检测巨噬细胞细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α、IL-10的分泌水平。试验结果表明在正常状态及LPS激活状态下,绿原酸均能提高下小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力、增强吞噬能力、增加NO、促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的分泌量,降低抑炎性细胞因子IL-10的分泌量,且作用效果呈剂量依赖性。     

小鼠腹腔激活巨噬细胞体外免疫调变机理的初步研究(简报)

激活巨噬细胞既是机体抵抗肿瘤和微生物感染的一类效应细胞,又是重要的免疫调节细胞。但是,激活巨噬细胞同时具有抗肿瘤作用和免疫抑制效应已被大量实验所证实。这种免疫抑制作用是肿瘤免疫治疗中亟待解决的一个问题。我们实验室近来的工作表明,用高剂量的脂多糖(LPS,10μg/ml)体外处理巯基乙醇酸钠诱发的小鼠腹腔巨噬细胞和培养的人体     

小鼠腹腔巨噬细胞被S-O_2-I菌苗激活后的抑瘤作用——Ⅱ.小鼠腹腔巨噬细胞被动转移的抑瘤效应及其肿瘤的病理观察

众所周知肿瘤的发展受宿主免疫功能的影响,当机体免疫功能下降时,肿瘤发展快,死亡率也高。卡介苗和厌氧棒状杆菌苗等一类的细菌佐剂能提高机体的免疫功能,增强机体对肿瘤细胞的排斥能力,它们的抗肿瘤活性和临床应用已有大量报道(Cross et al.,1976;Yamamura et al.,1979;Woodruff et al.,1975;Isral et al.,1976)。近年来,发现S-O_2-1菌苗在临床试用中,具有一定的抗肿瘤活性,并且副作用小,因     

体外培养的小鼠抗原负载树突状细胞的形态学特征

目的:研究体外培养的小鼠抗原负载树突状细胞(dentritic cells,DCs)的形态学特征,为肿瘤的生物学治疗提供形态学基础.方法:分离和培养DC,制备B16黑色素瘤细胞抗原,进行共培养,即为抗原负栽的DC.建立B16黑色素瘸小鼠模型,于瘤周围皮下注射抗原负载的DC.应用光镜、免疫组化方法和透射电镜观察抗原负载DC的形态学特征.结果:培养的抗原负载DC与DC比较,体积较大,表面突起较粗大且弯曲.免疫组化染色显示抗原负载树突状细胞主要分布于肿瘤周围皮肤的乳头层、网织层和肿瘤周围,于局域淋巴结的被膜下窦和副皮质区有散在分布.电镜下抗原负载DC细胞体积较大,核有切迹,细胞表面的突起,与肿瘤细胞和淋巴细胞接触密切.结论:抗原负载DC表现出比一般树突状细胞功能更加活跃的形态特征,冻融法全细胞来源的肿瘤抗原负载DC可以获得理想的DC疫苗.     

小鼠腹腔活化巨噬细胞的酸性磷酸酶测定

在两组Mφ数量相等的条件下,用金氏改良法测定小鼠腹腔Mφ的Acp含量,结果注射葡聚糖后小鼠腹腔Mφ的Acp含量明显高于对照组。同时,从Gomori氏硝酸铅染色的标本上,亦看到用葡聚糖活化后的小鼠腹腔Mφ胞体明显增大,细胞铺展明显,细胞质中的Acp阳性颗粒多而粗大,个别Mφ细胞质中的Acp颗粒呈强阳性反应。结果表明葡聚糖(Dextran T500)是一种较理想的Mφ活化物,具有明显增强Acp活性的作用。     

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的扫描电镜观察

本实验利用扫描电镜观察小鼠腹腔巨噬细胞在体外吞噬鸡红血球过程大致可分为巨噬细胞接触、扑获、包绕鸡红血球和鸡红血球在巨噬细胞中内移等4个阶段。经厌氧小棒状杆菌处理的巨噬细胞呈现激活状态,比未经厌氧小棒状杆菌处理的巨噬细胞表现更大的膜活性,胞体铺展增大,突起多呈叶状或皱褶状,吞噬鸡红血球能力明显增强。经厌氧小棒状杆菌处理的巨噬细胞与U27癌细胞存在着接触,此时U27癌细胞易发生变性、坏死。     

汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞模型的建立

目的:建立汉滩病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞模型。方法:PBS灌洗6~8周龄C57BL/6小鼠腹腔,分离获取小鼠腹腔巨噬细胞后,以100 TCID50汉滩病毒76-118株感染小鼠腹腔巨噬细胞,通过间接免疫荧光、ELISA和Realtime PCR检测病毒感染情况。结果:病毒感染3 d后,间接免疫荧光和ELISA检测到病毒核衣壳蛋白的表达,Realtime PCR检测到病毒核酸的表达。结论:建立了汉滩病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞的模型,为进一步阐明汉滩病毒的发病机制奠定了基础。     

二氧化硅对体外培养巨噬细胞的毒性研究

我们以Wasley法提取,纯化小鼠腹腔巨噬细胞,在体外培养情况下,恢复其正常的吞噬功能之后,加入SiO粉尘继续培养两天,样品以Gomori酸性磷酸酶(ACP)反应,透射电镜观察巨噬细胞吞噬SiO粉尘后超微结构的变化,以电子衍射和电子探针分析SiO晶体和Pb、S标记的ACP酶在超微结构中的分布和作用.结果证明,SiO破坏溶酶体膜,水解酶释放到巨噬细胞的胞质中而导致整个细胞的瓦解是SiO_2对培养巨噬细胞的作用方式之一.另一途径是,SiO_2使溶酶体发生变化,形状异常,导致细胞不正常的自体吞噬,从而使巨噬细胞逐渐被破坏,最终完全丧失功能而瓦解.     

小鼠腹腔巨噬细胞接受过继免疫后测定细胞免疫功能的研究

正常小鼠腹腔巨噬细胞具有粘附于玻璃或塑料表面的特性。当特异性抗原存在时接受过继免疫后的巨噬细胞能释放出粘附抑制因于,使巨噬细胞失去或降低粘附能力,用来评价细胞免疫功能。我们将四晔盐（Mry跳色法引入细胞粘附抑制实验中,是根据活细胞线粒体中的硫用酸脱氨酶能将MTh还原为蓝紫色结晶物,在～定细胞数范围内此还原产物与细胞数成正比。用酶联免疫检测仪在490urn波长处测定A值,计算出粘附抑制指数。实验方法：取体重比～zogLa（：鼠腹腔巨噬细胞离心洗涤2次后进行过继免疫,然后加入特异抗原,svt孵育z．sh,弃去液体,加MIT…     

猫爪草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用

此次研究旨在探讨猫爪草多糖对体外培养的正常状态下的原代小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用,以及小鼠腹腔巨噬细胞在体外培养条件下的活力变化情况。以原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,设对照组(加入100μL DMEM培养基)和实验组(分别加入25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL,400μg/mL的猫爪草多糖),分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、CCK-8法、乳酸脱氢酶释放法和中性红吞噬实验检测不同浓度的猫爪草多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用;同时设置24 h、36 h、48 h、60 h和72 h的不同培养时间,观察在体外培养条件下,小鼠腹腔巨噬细胞活力的变化情况。结果表明:与对照组相比,不同浓度的猫爪草多糖均能增强小鼠腹腔巨噬细胞的活力,且猫爪草多糖浓度在100~400μg/mL的细胞活力极显著增强(p<0.01)。此外,各处理组的巨噬细胞在体外培养24~72 h不更换培养液的条件下,48 h处活性最佳。体外培养条件下,一定浓度的猫爪草多糖可以激活小鼠腹腔巨噬细胞,通过猫爪草多糖激活巨噬细胞,可能是猫爪草发挥提升机体免疫力的作用机制之一。此外,体外培养的巨噬细胞虽能存活长达一个月,但仍有一个最佳活力时间。     

牛膝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用

为研究牛膝多糖(ABPS)对巨噬细胞的活化作用,以不同浓度的ABPS体外刺激小鼠腹腔来源巨噬细胞,采用ELISA技术检测TNF-α、IL-12的分泌,采用Real-Time PCR检测TLR 2/4 mRNA的表达。结果显示,浓度为100、200μg/mL的ABPS对巨噬细胞TNF-α分泌均有显著的促进作用;浓度为200μg/mL的ABPS对巨噬细胞IL-12分泌有明显的促进作用。浓度为100、200μg/mL的ABPS能明显上调巨噬细胞TLR 4 mRNA的表达。这表明,ABPS能激活巨噬细胞。     

小鼠巨噬细胞系体外感染BCG的应答

摘要：【目的】探讨小鼠巨噬细胞系RAW264.7体外感染BCG的应答。【方法】体外感染RAW264.7细胞23 h后,分析细胞形态和细胞表面共刺激分子的表达。然后去除培养上清中的BCG,继续培养不同时间,通过CFSE、annexin V/PI和Rh123标记,分析宿主细胞的应答。【结果】BCG感染23h后,细胞生长状态良好,细胞内能明显观察到吞噬泡中的BCG。细胞表面共刺激分子CD40、CD54、CD80、CD86、CD11b的表达明显升高,CD11c、I-Ad以及H-2Kd的表达变化不明显。CFSE标记BCG后,随着培养时间的延长,荧光强度逐渐减弱,但是4天后仍然明显地高于对照组。除去培养上清中的BCG后继续培养,含有BCG的细胞逐渐减少,继续培养60 h后基本检测不到。另外,BCG感染不能诱导细胞凋亡,线粒体膜电位先升高后降低,5天后,基本上与对照组一致。【结论】通过以上分析,为BCG免疫机理的研究提供了重要数据。     

小鼠巨噬细胞系体外感染卡介苗的应答

【目的】探讨小鼠巨噬细胞系RAW264.7体外感染卡介苗的应答。【方法】体外感染RAW264.7细胞23h后,分析细胞形态和细胞表面共刺激分子的表达。然后去除培养上清中的卡介苗,继续培养不同时间,通过CFSE、annexin V/PI和Rh123标记,分析宿主细胞的应答。【结果】卡介苗感染23h后,细胞生长状态良好,细胞内能明显观察到吞噬泡中的BCG。细胞表面共刺激分子CD40、CD54、CD80、CD86、CD11b的表达明显升高,CD11c、I-Ad以及H-2Kd的表达变化不明显。CFSE标记卡介苗后,随着培养时间的延长,荧光强度逐渐减弱,但是4天后仍然明显地高于对照组。除去培养上清中的卡介苗后继续培养,含有卡介苗的细胞逐渐减少,继续培养60h后基本检测不到。另外,卡介苗感染不能诱导细胞凋亡,线粒体膜电位先升高后降低,5d后,基本上与对照组一致。【结论】通过以上分析,为卡介苗免疫机理的研究提供了重要数据。     

小鼠胚胎体外培养条件的研究

为了探讨小鼠胚胎在体外发育过程中的最佳方案,我们将从超排昆明小鼠取出的５４３枚受精卵经过不同的培养液（Ｍ１６、Ｍ１６＋ＯＥＣ、Ｇｌｕ－ＦｒｅｅＭ１６和Ｇｌｕ－ＦｒｅｅＭ１６＋ＯＥＣ）及不同的培养微环境处理后,观察胚胎体外发育的过程。结果表明,葡萄糖在胚胎发育早期（２细胞期）有比较明显的发育阻断作用,同种输卵管上皮（ＯＥＣ）共同培养能够有效地抑制这种阻断作用;葡萄糖对胚胎８－１６细胞期及以后阶段的发育具有十分重要的作用,而此时ＯＥＣ的作用则不明显;除了葡萄糖外,在早期可能还有其它一些象磷酸盐、重金属离子的物质也能起胚胎发育阻断作用。同时还发现培养微环境的稳定也是胚胎发育的重要保证条件,石蜡油的封盖能够保持某种特定微环境而支持胚胎的体外发育。     

蛇胸腺巨噬细胞的形态学研究

近年的研究表明，哺乳动物胸腺巨噬细胞具有一定的异质性。巨噬细胞不仅具有吞噬凋亡的Ｔ淋巴细胞的功能，而且还具有分泌细胞因子和呈递抗原的作用，是构成胸腺微环境的一种重要的免疫调节细胞。但是，对非哺乳动物胸腺巨噬细胞异质性和生理功能方面的探讨还未见报道。本...     

体外培养小鼠下颌下腺细胞生长特性的实验研究

目的：研究小鼠下颌下腺细胞的培养方法,探讨下颌下腺细胞培养条件及细胞生长特性,为研究干细胞转分化涎腺腺泡细胞以及涎腺再生研究奠定理论基础和技术支持。方法：取2周龄的小鼠,组织块法和消化法分别进行培养,用活细胞观察法和HE染色法记录细胞形态学特征;免疫荧光染色法鉴定;通过生长曲线和细胞倍增时间来比较两种方法对细胞增殖能力的影响。结果：组织块法和消化法均可以成功的培养下颌下腺细胞,（1）组织块法培养的细胞呈卵圆形或多边形,10天左右成铺路石样;消化法培养细胞亦为上皮样细胞,呈多边形,胞质丰富;（2）HE染色下颌下腺细胞呈多边形,胞核明显;（3）Cytokeratin13和AQP5表达阳性,Wimentin表达阴性;（4）组织块法培养细胞增殖相对较平缓,消化法培养细胞增长较迅速;（5）消化法培养倍增时间（1．3471±0．6071）天比组织块法倍增时间（2．1887±1．1503）明显缩短（P〈0．05）;结论：体外可以成功的培养下颌下腺细胞,但是同时证明下颌下腺细胞长期传代较困难,这为研究干细胞转分化涎腺细胞和涎腺再生体内实验提供了理论和实验基础。