虾头提取物对凡纳滨对虾生长和免疫因子的影响

以添加不同量虾头提取物(0、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)的饲料投喂初体质量为6.35±0.38 g的凡纳滨对虾49 d,研究其对对虾的生长及免疫因子的影响。各组凡纳滨对虾的生长及体成分组成没有显著差异。与对照组相比,1.5%~3.0%添加量组对虾血清中的ACP活力明显提高;2.0%~3.0%添加量组对虾血清中的AKP活力明显提高;各添加量组对虾血清中的PO活力都有明显提高。实验结果表明,添加适当剂量的虾头提取物可以增强凡纳滨对虾的免疫能力。     

蝇蛆蛋白粉对凡纳滨对虾生长的影响

设计了4种实验饲料(ABCD)并进行了8周饲养试验来评定添加蝇蛆粉对凡纳滨对虾生长性能的影响.以实用饲料D作为对照组,ABC是在D的基础上,分别以5%,10%和15%的蝇蛆粉替代鱼粉.养殖试验结束后,分别计算体长、全长和背甲宽等生长性能.实验结果显示,AB组凡纳滨对虾的生长性能与对照组差异不显著(P>0.05).C组与对照组差异极显著(P<0.01).结果表明,饲料中添加适量的蝇蛆蛋白粉对凡纳滨对虾有一定的促生长作用,可用适量的蝇蛆蛋白粉替代对虾配合饲料中的部分鱼粉.     

凡纳滨对虾卵母细胞卵黄发生的超微结构

利用电镜研究凡纳滨对虾卵母细胞卵黄发生的全过程。结果表明 :凡纳滨对虾卵黄的发生是双源性的。卵黄发生早、中期是内源性卵黄大量合成的阶段 ,卵黄发生中、后期则以外源性卵黄的合成为主。内源性卵黄主要由内质网、线粒体、核糖体、溶酶体、高尔基器等多种胞器活跃参与形成。其中数量众多的囊泡状粗面内质网是形成内源性卵黄粒的最主要的细胞器 ;部分线粒体参与卵黄粒的合成并自身最终演变为卵黄粒 ;丰富的游离核糖体合成了大量致密的蛋白质颗粒并在卵质中直接聚集融合成无膜的卵黄粒 ;溶酶体通过吞噬、消化内含物来形成卵黄粒和脂滴 ,且方式多样 ;高尔基器不直接参与形成卵黄粒。外源性卵黄主要通过卵质膜的微吞饮活动从卵周隙或卵泡细胞中摄取外源物质来形成     

凡纳滨对虾红体病病原

2001年7月辽宁省盘锦市大洼对虾养殖厂凡纳滨对虾大面积暴发红体病。主要表现为全身发红,活动减弱,食欲减退,壳变硬,死亡率高等。本研究从患红体病的凡纳滨对虾肌肉组织中分离到三株优势菌,经回归感染证实其中一株为引发本次凡纳滨对虾红体病的病原菌,编号为0107。对该菌进行了生理生化鉴定和16SrRNA基因序列同源性分析,将其判定为副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)。药敏实验结果显示,该菌对头孢哌酮、头孢曲松等多种抗生素敏感,对氨苄西林、青霉素等抗生素不敏感。     

凡纳滨对虾β-actin基因的克隆与表达

目的:克隆凡纳滨对虾肌动蛋白基因并在原核表达系统中表达.方法:根据GenBank上凡纳滨对虾β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从凡纳滨对虾肌肉组织中克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,克隆序列连接到pBAD/gⅢA质粒,转化人大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,进行温度诱导表达重组蛋白.结果:克隆序列长度为1300bp,测序结果与Gene-Bank序列同源性达99.91%;获得重组体诱导表达产物经SDS-PAGE分析,在约48kD处有表达的蛋白带,表达产物经Western Blotting鉴定为阳性.结论:获得β-actin基因在大肠杆菌中稳定表达产物.     

凡纳滨对虾优势腐败菌鉴定及其群体感应现象

为了鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌并研究其是否存在以N-酰基高丝氨酸内酯类化合物(AHLs)介导的群体感应系统,采用16S rRNA序列鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌,并采用紫色杆菌CV026对优势腐败菌的AHLs活性进行检测.结果发现凡纳滨对虾优势腐败菌菌株1(Aci-1)和菌株2 (Aci-2)均为不动杆菌属,均存在以AHLs为信号分子的群体感应系统.添加外源信号分子AHLs能促进Aci-1菌株生物膜的形成,且呈浓度依赖性.在一定的贮藏范围内,凡纳滨对虾腐败菌信号分子AHLs浓度与细菌总数、挥发性盐基氮含量存在正相关性,其相关系数r分别为0.846 6和0.986 7,分别在P＜0.05与P＜0.01水平上显著,结论是凡纳滨对虾优势腐败菌不动杆菌菌株存在以AHLs介导的群体感应系统,且与凡纳滨对虾的腐败密切相关.     

维生素C对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响

以不同水平维生素C 2 磷酸酯 (添加量分别为 0、75、15 0、30 0和 6 0 0mg/kg)的饲料喂养凡纳滨对虾 10周 ,研究维生素C 2 磷酸酯对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响。结果显示 :在养殖前 4周 ,饲料中添加维生素C 2 磷酸酯显著促进凡纳滨对虾的生长 ,然而对对虾的成活以及饲料利用不产生影响 (P >0 0 5 ) ;而到实验后期添加维生素C 2 磷酸酯不能促进凡纳滨对虾的生长 ,却显著提高凡纳滨对虾的成活率 (P <0 0 5 )。维生素C 2 磷酸酯对对虾体水分、脂肪、蛋白质和维生素C在肝胰脏中的积累量的影响显著 (P <0 0 5 ) ,对对虾体灰分影响不显著 (P >0 0 5 )。维生素C 2 磷酸酯对对虾血清中超氧化物歧化酶活力无显著影响 ,饲料中未添加维生素C或过量添加 (超过 30 0mg/kg饲料 )均导致血清中酚氧化酶活力、血细胞总数和溶菌酶活力的显著下降。以生长、成活和酚氧化酶活力为指标 ,饲料中维生素C 2 磷酸酯的适宜添加量为 15 0mg/kg。     

凡纳滨对虾血蓝蛋白酶解多肽的凝集与抑菌活性

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象, 通过分子筛层析、Tricine-SDS-PAGE、Western-blotting、凝集实验、抑菌实验和Edman N端测序等方法探索血蓝蛋白酶解多肽的凝集和抑菌活性。结果发现, 血蓝蛋白经胰蛋白酶酶解后可产生分子量约为6—70 kD的7条多肽, 该酶解混合物对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)具有显著的凝集活性, 与未酶解的血蓝蛋白相比, 其凝集活性可提高4—16倍。在此基础之上, 进一步分离纯化该7条多肽, 发现多肽-3对副溶血弧菌表现出较强的抑菌活性, 且具有较好的浓度依赖性。在浓度为75 μg/mL时, 其抑菌率为(93.76±1.60)%, 与阴性对照组相比, 存在极显著性差异 (P<0.01)。进一步研究显示该多肽位于血蓝蛋白N端α-螺旋区域。由此推测, 凡纳滨对虾血蓝蛋白在体外经胰蛋白酶酶解后可产生具有凝集、抑菌等免疫活性的多肽, 这对研究血蓝蛋白的降解机制及其在先天免疫中的作用具有重要意义。     

凡纳滨对虾7个不同家系遗传差异的微卫星标记分析

应用7对微卫星引物对凡纳滨对虾3个世代共7个家系进行了遗传多样性分析,共检测到20个等位基因,每个位点的等位基因数为2-3个,平均为2.86个,观测杂合度(H0)、期望杂合度(H0)、多态信息含量(PIC)分别为0.47-0.90、0.50-0.66、0.37-0.58,平均为0.61、0.60、0.51,说明凡纳滨对虾具有较高的遗传杂合水平.F2代的多样性水平略高于F1代,而F3代则明显低于F1代和F2代.两两家系间的遗传分化指数FST介于0.01-0.34之间,其中C-F1和L-F1家系之间FST最小(0.01),C-F1和O-F3家系之间FST最大(0.34),表明世代间的家系遗传分化程度大于同一世代的家系.各家系间的Nei's遗传距离和FST分析结果相一致,表明凡纳滨对虾世代间具有明显的遗传分化.本试验将为开展凡纳滨对虾家系选育工作提供理论依据和技术指导,并对甲壳动物的遗传选育具有参考价值.     

Isolation and characterization of microsatellite markers from Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei)

We report the development of 11 polymorphic microsatellite loci in pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) using an unenriched genomic library. The number of the alleles ranged from two to 18 and observed hererozygosity ranged from 0.0286 to 0.9429, indicating that these markers will be useful for population studies and mapping in pacific white shrimp. Seven loci were detected deviated from Hardy–Weinberg, caused by deficiency of heterozygote, suggesting population genetic structure across the sampled population. No evidence for linkage disequilibrium was found.     

日本囊对虾Kunitz型蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析

SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽, 含有一个Kunitz型结构域, 属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用, 为了了解SKPI在对虾天然免疫系统中的作用, 首先对其进行了重组表达。从日本囊对虾肝胰腺中扩增skpi的cDNA片段, 插入改造后的pPIC9K酵母表达载体, 获得的重组质粒转化至毕赤酵母GS115进行表达。由于改造的pPIC9K载体加入了6-His标签, 因此利用Ni?Sepharose?High?Performance对SKPI进行了高效纯化。初步的活性研究表明, 重组表达的SKPI能特异性地抑制胰蛋白酶的水解活性。     

日本囊对虾Kunitz型蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析

SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽, 含有一个Kunitz型结构域, 属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用, 为了了解SKPI在对虾天然免疫系统中的作用, 首先对其进行了重组表达。从日本囊对虾肝胰腺中扩增skpi的cDNA片段, 插入改造后的pPIC9K酵母表达载体, 获得的重组质粒转化至毕赤酵母GS115进行表达。由于改造的pPIC9K载体加入了6-His标签, 因此利用Ni?Sepharose?High?Performance对SKPI进行了高效纯化。初步的活性研究表明, 重组表达的SKPI能特异性地抑制胰蛋白酶的水解活性。     

凡纳滨对虾繁殖中不同亲本对子代遗传贡献率的差异

利用5个含有稀有等位基因的高度多态性微卫星位点比较了凡纳滨对虾繁殖中不同亲本对子代遗传贡献率的差异。通过稀有等位基因的5个微卫星位点能够对亲代和子代的谱系进行明确的鉴别。10个亲代个体中有8个个体对子代群体的基因库有贡献,不同个体之间的贡献率存在差别,最高为54.28%,最低为8.57%。在亲代和子代群体遗传结构的分析中,子代等位基因的数目与亲代相比降低了11.11%。子代的平均期望杂合度(He)、平均观测杂合度(Ho)和平均多态性信息含量(PIC)等指标均低于亲代。实验结果表明:亲本对子代基因库的贡献率的差异也是造成子代群体遗传变异水平降低的原因之一;微卫星标记可作为一种有效的工具用于对虾系谱的确认、人工繁育群体遗传多样性水平的监测等方面     

Improvement in the growth performance of white shrimp, Litopenaeus vannamei, by a protease-producing probiotic, Bacillus subtilis E20, from natto

Aims:  To isolate and identify a benefic bacterium, Bacillus subtilis E20, from natto (fermented soybeans), and incorporate it into shrimp feed to promote shrimp growth performance.
Methods and Results:  A protease-producing bacterium, E20, isolated from natto was identified as B. subtilis by an API 50 CHB kit and the 16S rDNA sequence. B. subtilis E20 was able to grow at a broad range of temperatures (10–50°C), pH values (5–10), and NaCl levels (0–9%). The best culture conditions for B. subtilis E20 to produce the protease were 40°C, a pH of 6–8 and 0% NaCl. No shrimp died after being injected with B. subtilis E20 [up to 10⁹ colony-forming units (CFU) per shrimp]. Bacillus subtilis E20 was incorporated in diets at the levels of 0 (control), 10⁶, 10⁷, and 10⁸ CFU kg⁻¹ for shrimp grow-out culture, and results showed that after feeding on B. subtilis E20-containing diets (10⁸ CFU kg⁻¹ of diet), shrimp had excellent growth performance and production compared to the control because protease activities in the digestive tract were improved by B. subtilis E20.
Conclusions:  Bacillus subtilis E20 isolated from natto is a great protease producer and is able to improve shrimp growth performance through increasing the digestibility of food.
Significance and Impact of the Study:  Results suggest that B. subtilis E20 is a potential candidate for use as a probiotic to improve shrimp growth performance, and consequently reduce feed costs.     

凡纳滨对虾微卫星位点在两个选育家系中遗传的初步研究

利用两个选育凡纳滨对虾全同胞家系研究了10个微卫星位点的遗传特征。通过ABI310或3100测序仪检测, 在所观察到的20个基因型比例（genotypic ratios）(10个微卫星位点 X 2个家系)中,有17个基因型比例符合孟德尔遗传。微卫星位点TUMXLv8.220在两个家系中均存在无效等位基因,从而3个不符合孟德尔遗传基因型中2个可由无效等位基因来解释。TUMXLv 3.1在06家系偏离了1：1：1：1的孟德尔预期比。3个微卫星位点（TUMXLv5.66,TUMXLv7.74,TUMXLv8.224）在两个家系中均表现单态。3个微卫星位点（TUMXLv5.45,TUMXLv7.56,TUMXLv8.256）在两个家系均既表现多态又遵循孟德尔共显性遗传, 是亲子鉴定和种群遗传分析的较好选择。结果显示在应用微卫星标记进行遗传分析之前利用全同胞家系进行遗传模式研究是非常必要的。     

凡纳对虾SWD抗菌肽基因的克隆与性质研究

目的:为了进一步探索抗菌肽分子的作用机制,我们以凡纳对虾具有单个WAP结构域的抗菌肽基因作为研究对象,进行分子生物学方面的分析。方法:通过cDNA全长序列的扩增,以及氨基酸序列的比较分析、系统进化树的分析以及分子结构的初步预测,我们对凡纳对虾SWD分子的结构进行了详细分析。结果:Lv-SWD的cDNA序列全长为434bp,编码92个氨基酸;Lv-SWD存在由24个氨基酸残基形成的信号肽序列,以及由8个保守存在的半胱氨酸残基形成的WAP结构域和一段富含脯氨酸的结构基序。结论:通过这些分子结构的研究,以及与其他SWD分子的比较,作者推测Lv-SWD分子是一种具有抑菌活性的抗菌肽分子,它在凡纳对虾的先天免疫系统中应该发挥着重要的免疫功能。     

Effect of dissolved carbon dioxide on oxygen consumption in the Pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei (Boone 1931)

A failure in the aeration system of Litopenaeus vannamei rearing with biofloc technology can decrease the oxygen concentrations rapidly and also increase the carbon dioxide (CO₂) concentrations at the same rate. We report here an evaluation of the effect of CO₂ on the oxygen consumption of L. vannamei. We used a continuous-flow respirometer with water recirculation equipped with a digital fiber-optic oximeter. Eight juveniles of L. vannamei (12.1 ± 1. 4 g) were used in each treatment with one per respiratory chamber (0.6 L). The shrimp were exposed to six concentrations of CO₂ (5, 30, 60, 95, 150, and 300 mgCO₂/L) with an acute exposure time of six hours. Upon treatment with 5–30 mgCO₂/L, we observed a consumption of oxygen of 0.233 ± 0.129 and 0.33 ± 0.072 mgO₂/g/h, respectively. Upon treatment with 60 mgCO₂/L, an increase was observed in the oxygen consumption (0.521 ± 0.098 mgO₂/g/h). Upon treatment with 95, 150, and 300 mgCO₂/L however, the shrimp decreased their oxygen consumption and lost their equilibrium. The CO₂ should therefore be maintained at a maximum of 5 mgCO₂/L during shrimp rearing.     

Acute effects of extreme pH and its influences on the survival and biochemical biomarkers of juvenile White Shrimp,Litopenaeus vannamei

The White Shrimp (Litopenaeus vannamei) is reared in several types of systems. Changes in pH in some can produce sub-lethal effects that result in poor growth and survival. The aim of the present study was to determine the acidic and basic pH 50% lethal limits after 96 h exposure (pH_50–96 h) and to evaluate the sub-lethal effects of pH on oxidative stress parameters in juvenile L. vannamei. The experimental design comprised nine treatments with three replications of each. The nine treatments consisted of pH 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 7.0, 5.0, 4.5, 4.0 and 3.5. The treatment at 7.0 was used as the control. The sub-lethal pH tests were: basic pH 9.5, neutral pH 7.0 (control) and acidic pH 4.5. For each experimental pH and sampling point, the hemolymph of six shrimp was collected to determine catalase and glutathione S-transferase’s activities and total antioxidant capacity. The values of lethal pH₅₀ at 24, 48, 72 and 96 h for juvenile L. vannamei had basic pH values equal to 9.82, 9.62, 9.59 and 9.58 and acidic pH values of 3.86, 3.92, 3.94 and 4.04, respectively. The shrimp exposed to basic and acidic pH levels showed antioxidant responses with changes in antioxidant activity.     

A response-surface analysis of the relative importance of the temperature,salinity and body weight on the respiratory metabolism of the white shrimp Litopenaeus vannamei (Boone, 1931)

We used a response-surface analysis to determine the importance of different factors affecting the resting routine metabolic rate (QO₂) of the white shrimp Litopenaeus vannamei. The oxygen consumption rates were estimated using a multi-factorial design with 28 combinations of different salinities (15, 20, 25, 30, 35, 40 and 45 psu) and temperature (20, 25, 30 and 35 °C) values. The response-surface analysis produced a quadratic function showing that temperature more profoundly affects the oxygen consumption rate. Response-surface curves were generated to predict the optimal conditions resulting in oxygen consumption to better understand the successful growth of this species.