鱼类乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究

本文对用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离鱼类乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶的技术进行了研究。结果表明：该方法优于淀粉凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳分析鱼类ＬＤＨ同工酶,具有较高的分辩率。     

晚疫病菌基因组SSR扩增产物两种检测方法的比较与改进

以32份马铃薯或番茄晚疫病菌基因组DNA为模板,分析了琼脂糖凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对10对SSR引物多态性检测的影响,同时比较了聚丙烯酰胺凝胶电泳两种银染法(常规银染法和快速银染法)的差异。结果显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳分离效果好,具有更高的多态性检出率,其中快速银染法与常规银染法的检出结果相同,但常规银染步骤繁琐,整个过程要用1-2h,而快速银染只需约15min,且染色背景较浅,条带清晰。聚类分析显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法可将供试晚疫病菌株分布于更多的聚类组,显示出更高的遗传变异度。可见,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法结合SSR分子标记技术,可有效地用于马铃薯或番茄晚疫病菌群体遗传多样性分析。     

电泳梳的改进

用这种改进的电泳梳做垂直板凝胶电泳更方便、更精确。     

用于双向凝胶电泳分析的奶牛乳清蛋白样品制备方法的比较

为建立适用于双向凝胶电泳分析的奶牛乳清蛋白的制备方法,分别比较了直接裂解法、三氯乙酸-丙酮法,Trizol法和2-D clean up kit法对奶牛乳清蛋白提取效率和双向凝胶电泳图谱的影响.用2-D Quant Kit试剂盒测定蛋白浓度,分别用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向凝胶电泳进行奶牛乳清蛋白的分离.蛋白定量结果表明,2-D clean up kit法产率最高,直接裂解法、三氯乙酸-丙酮法次之,trizol法产率最低;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,2- D clean up kit法提取的蛋白质量最高;双向电泳图谱分析表明,2-D clean up kit法得到的蛋白图谱与另外3种方法相比,检测到的蛋白点最多,图谱背景清晰,分辨率最高.结果提示,2-D clean-up法相对最适合于双向凝胶电泳分析奶牛乳清蛋白样品的制备,尤其对一些低丰度高分子量蛋白的分离效果较为明显.     

变性梯度凝胶电泳装置及其在DNA突变检测中的初步应用

设计了一套适用于变性梯度凝胶电泳(DGGE)的装置。该装置为带缓冲液循环系统、可精确控制温度的夹芯式双垂直电泳槽,其整个凝胶板内的控温精度和均匀度均在±0.5℃范围内。对其在DNA突变检测中的应用作了初步的探讨。通过PCR-DGGE连用成功地分离了野生型p53基因和含点突变的P53基因(第141密码子由TGC突变为TAC)。     

DGGE/TGGE技术及其在微生物分子生态学中的应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)是近些年微生物分子生态学研究中的热点技术之一。由于DGGE／TGGE技术具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点,被广泛地应用于微生物群落多样性和动态性分析。文章对DGGE／TGGE技术原理与关键环节、局限性和应用前景进行了综述。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

多花水仙若干品种类型的亲缘关系与进化研究——I．POD同工酶分析

以7个水仙品种为材料,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析在同一生长时期的过氧化物酶同工酶。结果表明,酶谱中不同品种的酶带分布有区别。但Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅲ-3相似,Ⅱ-1和Ⅱ-2相似,平潭水仙和漳州水仙相似。     

一种改进的甲醛—琼脂糖凝胶电泳

构建ｃＤＮＡ文库,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ－ＰＣＲ等分子生物学研究,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛－琼脂糖凝胶电泳。然而,传统的甲醛－琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂［１］,本文提出一种改进的甲醛－琼脂糖凝胶电泳,不仅简化了操作,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｃＤＮＡ甲醛－琼脂糖凝胶电泳为例,对这一方法进行介绍。１ 材料与方法１．１ 总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离：取向日葵花蕾１ｇ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ［２］。利用磁珠法分离ｍＲ－…     

大鼠背根神经节细胞膜蛋白的提取及双向凝胶电泳分离

为了开展大鼠背根神经节(DRG)细胞质膜蛋白质组学研究,取成年大鼠的背根神经节,用胰蛋白酶和胶原酶等消化处理后经密度梯度离心分离DRG细胞质膜;用裂解液裂解提取膜蛋白并通过双向凝胶电泳将膜蛋白分离.扫描凝胶图谱后进行图像分析,结果表明DRG细胞膜蛋白得到了有效的提取和分离.双向凝胶电泳图谱的建立为进一步进行DRG细胞质膜蛋白质组学的研究提供了重要的基础.     

蛋白质与核酸凝胶电泳分子量测定方法的探讨

文中介绍了一种在凝胶电泳中,当凝胶两端损坏、指示剂染料模糊不清或标记物丢失而无法确定电泳的起点与前缘时,进行正确的分量测定的补救方法,并从分子量测定的算法上进行了推导证明,用实际事例作了验证．     

DGGE技术在动物胃肠道微生物研究中的应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)是通过聚丙烯酰胺凝胶中变性剂浓度梯度的不同,将序列不同的DNA分开。目前,该技术已广泛应用于瘤胃微生物、肠道微生物等多样性研究。综述了变性梯度凝胶电泳技术的基本原理、优缺点及其在动物营养中的应用。     

烤烟品种RAPD产物Synergel与琼脂糖凝胶电泳比较

比较了12个烤烟品种RAPD产物Synergel与琼脂糖凝胶电泳,结果表明：Synergel电泳有较强的多态性,易于区别不同品种之间的差异,克服了琼脂糖凝胶电泳多态性差的缺点,可减轻繁重的引物筛选工作。     

蛋白质组技术进展

蛋白质组研究是近年兴起的生命科学的前沿领域,是生命科学进入后基因组时代的标志之一。蛋白质组研究中的主要技术是双向凝胶电泳技术和质谱技术。本文简要综述了双向凝胶电泳和质谱技术的现状及存在的问题。     

一种简易RNA甲醛—琼脂糖凝胶变性电泳

构建ｃＤＮＡ文库 ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析以及ＲＴ ＰＣＲ等分子生物学研究 ,都需要纯度高、完整性好的ＲＮＡ。鉴定ＲＮＡ的完整性通常需要进行甲醛 琼脂糖凝胶电泳。然而 ,传统的甲醛 琼脂糖凝胶电泳操作步骤繁杂[1 ] ,本文提出一种改进的甲醛 琼脂糖凝胶电泳 ,不仅简化了操作 ,而且效果很好。我们以向日葵总ＲＮＡ和ｍＲＮＡ甲醛 琼脂糖凝胶电泳为例 ,对这一方法进行介绍。1　材料与方法1.1　总ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离取向日葵花蕾 1ｇ ,按照改进的异硫氰酸胍法提取向日葵总ＲＮＡ[2 ] 。利用磁珠法分离ｍＲＮＡ[3] 。…     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

双向凝胶电泳的实验操作及进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是研究蛋白质组的核心技术,本文重点介绍了双向凝胶电泳的原理、实验操作过程中的具体步骤以及近年来在实验过程中发展的一些新方法和进展。     

大鼠海马的表达蛋白质组学实验研究

目的：用蛋白质组学方法初步分析大鼠海马蛋白质的表达。方法：提取大鼠海马蛋白质样品后,用双向凝胶电泳对其分离,经考马斯亮蓝染色后,产生大鼠海马蛋白质双向凝胶电泳图谱。从凝胶上切割分离的蛋白质,经胰蛋白酶胶内酶解,通过基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对酶解后的肽段进行分析。根据肽段质谱数据,经数据库（NCBI）检索,对蛋白质进行鉴定。结果：鉴定了37种具有明确功能的蛋白质,它们分别属于代谢酶、细胞骨架蛋白、热休克蛋白、抗氧化蛋白、信号传导蛋白、蛋白酶体相关蛋白、神经元特异蛋白及神经胶质蛋白。另外,鉴定了3种未知功能蛋白。结论：为建立大鼠海马蛋白质组数据库提供必要的资料,为在大鼠模型上研究神经疾病发病机理奠定基础。     

不同纯化方法处理DNA合成引物对PCR扩增效率的影响

对ＤＮＡ合成的幽门螺杆菌尿素酶引物ＨＰ１、ＨＰ２、ＨＰ３、ＨＰ４进行了几种不同的纯化试验,分别采用无水乙醇沉淀法、ＮＴ柱及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对其相应的纯化收率,ＰＣＲ扩增效率作了比较及分析。琼脂糖凝胶电泳结果证实,以无水乙醇沉淀纯化方法的ＰＣＲ扩增效果较为理想。该方法操作简便、稳定高效、省时省力、成本低。为此建议用该法处理ＤＮＡ合成引物。     

一种用于色素蛋白分离的新凝胶系统

用混合去垢剂增溶低离子强度条件下的温和电泳方法,对菠菜叶绿体类囊体膜和不同PSⅡ制剂进行了色素蛋白复合体组成的分析．并结合SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和吸收光谱对部分色素蛋白复合体进行了鉴定．此法简便、迅速、游离色素少．