钙离子对PSII颗粒放氧活性的影响

外加5 mmol/L Ca~(2 )可以使菠菜PSⅡ颗粒的放氧活性增高。PSⅡ颗粒经EGTA透析、低pH值、光照、2 mol/L NaCl等处理后,放氧活性下降,同时,这些颗粒的钙含量也相应降低。但当外加 5 mmol/L Ca~(2 )时,可使这些颗粒全部或部分地恢复放氧活性。PSⅡ颗粒中存在的钙对放氧起着重要作用;钙在PSⅡ颗粒中的结合位点不止一个,其结合状态有紧密和松散之别。     

耐热荧光素酶的表达及热稳定焦磷酸测序体系的建立

焦磷酸测序是一种基于生物发光反应的实时DNA序列测定技术,其反应体系中的荧光素酶决定测序反应的灵敏度。传统焦测序反应使用的是野生型北美荧光素酶Photinus pyralis luciferase(PpL),该酶热稳定性较差,因此由该酶配制的焦磷酸测序反应体系对热不稳定,影响焦磷酸测序的灵敏度。为了建立热稳定的焦磷酸测序反应体系,全合成了耐热突变日本萤火虫荧光素酶的编码序列,并将其插入到表达载体pET28a(+)中构建重组质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌中,筛选得到的阳性重组菌成功表达了N端带有6×His(组氨酸)标签的耐热突变日本萤火虫荧光素酶。利用镍亲和层析法,纯化得到了分子量约为60 kDa且比活为4.29×1010RLU/mg的重组蛋白。对重组耐热日本萤火虫荧光素酶的热稳定性研究结果表明,该酶在50℃时仍具有活性,在40℃下孵育25 min后活性保留了90%以上。与基于野生型北美荧光素酶的焦磷酸测序体系相比,由耐热日本萤火虫荧光素酶配制的测序反应体系对热稳定性有了极大的提高,该测序反应液在37℃放置1 h后仍能够得到正确的测序结果。研究结果为建立稳定可靠的现场及时快速焦磷酸测序反应体系奠定了基础。     

生物发光法微生物快速检测试剂的性质及其影响因素研究*

研究了ATP生物发光微生物快速检测试剂的反应动力学、反应最适温度、pH以及各种影响因素。在ATP生物发光反应中,测试系统中D-荧光素用量为40～50μg／mL时对反应已经足够;发光脉冲计数CPM值随反应时间的延长不断降低,开始的1min内,其CPM值下降最快,然后下降速度不断减缓;反应的最适温度为24℃-25℃;而体系的最佳pH为7．2—7．4。配制好的发光试剂溶液置于4℃保存45h,可以保持86％的活力,在25℃时保温1h,活力下降较少,随时间的增加,活力逐渐下降,到6．5h时,仅剩53．5％的活力,而     

生物大分子在血浆发光中的作用

血浆超滤后,其大分子浓缩部分的自发发光强度以及碱诱导发光强度都增高,而透过膜部分的自发发光强度以及碱诱导发光强度则降低。用１０％ＺｎＳＯ４沉淀除去部分蛋白质后的血浆制液,其发光强度下降。说明大分子,尤其是蛋白质在血浆超微弱发光中起着重要作用,结合蛋白质本身可能就是发光反应的底物。     

乙型肝炎病毒HBx蛋白抑制TTRAP启动子活性的体外研究

旨在探讨体外培养条件下HBx蛋白对TTRAP(TRAF and TNF receptor-associated protein)基因转录水平表达的影响。用RT-PCR及Real-time PCR检测TTRAP在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达;构建TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒;分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞,比较虫荧光素酶活性。RT-PCR和Real-time PCR结果显示,TTRAP在HepG2.2.15细胞中的表达量分别是其在HepG2细胞中表达量的44.9%和27.8%(P0.05)。TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性,与对照组相比下降了43.8%。转染HBx表达质粒组的相对荧光素酶活性与其对照组相比下降了35%,而转染HBc、HBs及HBp表达质粒组对相对荧光素酶活性没有影响。因此证实HBx蛋白能抑制TTRAP启动子活性。     

应用昆虫保幼激素类似物“734-Ⅱ”乳油增加桑蚕产丝量的试验

(1)昆虫保幼激素类似物“734-Ⅱ”[亦称“J002”,化学名称为1-(对乙基苯氧基)6,7-环氧-3,7-二甲基辛烯-2]对家蚕(`Bombyx mori`` L.)具有很高的保幼激素活性。以百万分之四(4ppm)浓度于五龄中期喷布于蚕体,可使五龄经过时间延长1—1.5天,茧层量增加10—13%。 (2)“734-Ⅱ”乳油易于兑水稀释到一定浓度,乳化性能良好,自然贮放4—6个月,50℃贮放7昼夜,—5℃贮放1昼夜稳定性良好。乳油兑水稀释液在25℃下放于暗处贮存3昼夜其生理活性未降低。 (3)应用“734-Ⅱ”增产蚕丝大面积试验证明:“734-Ⅱ”乳油使用方便,手续简单,效果明显。 (4)提出了在生产中应用保幼激素增产蚕丝的注意事项。     

生物ATP含量测定系列产品卅年经营信誉第一

名称说明价格生物化学发光检测仪35100元/套荧光素酶-荧光素用荧光素酶系缓冲液配成3mg/mL,即为测定所用的荧光素酶液698元/克1g荧光素酶-荧光素可以测定416个样本保存条件:-30℃,干燥荧光素酶系缓冲液(粉剂)保存条件:4℃198元/10支标准ATP(粉剂)保存条件:-30℃,干燥12.8元/支凡是有飞机航班直达的城市,均为用户办理航空托运,另收取代办费用:虹桥机场178元,浦东机场208元,并开具发票。联系人:顾俭本;联系地址:中国科学院上海植物生理研究所,上海市枫林路300号(邮政编码:200032);联系电话:021-64161131,13818791309。生物ATP含量测定系列…     

稳定表达大鼠GCLC启动子及荧光素酶报告基因细胞株的建立

目的:建立稳定表达大鼠谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)启动子及荧光素酶报告基因的大鼠肺泡上皮细胞株。方法:克隆大鼠GCLC上游5.9kb的启动子序列并构建重组报道载体PGL4.19-GCLC-LUC,转染到大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞L2,经G418筛选以获得单细胞抗性克隆并在传代过程中能稳定表达荧光素酶活性;检测细胞荧光素酶表达与细胞数量相关性;PCR检测稳定细胞株基因组已整合的插入片段;刺激因子刺激6h,检测稳定细胞株的反应性。结果:成功构建PGL4.19-GCLC-LUC;构建的稳定细胞株能稳定地表达荧光素酶,且与细胞数量正相关;PCR检测稳定细胞株目的片段稳定整合基因组;TNF-α刺激后,能使荧光素酶活性上升,差异有统计学意义(P0.05);Rapamycin,GSH-EE刺激后,荧光素酶活性显著下降(P0.05)。结论:成功构建稳定表达大鼠GCLC启动子及荧光素酶报告基因的细胞株,将为高通量药物筛选以及进一步研究GCLC基因的转录调控提供重要的细胞研究手段。     

在大肠杆菌中合成的萤火虫荧光素酶的分离和性质

用生物工程技术将萤火虫荧光素酶基因转移到大肠杆菌,在大肠杆菌中合成荧光素酶。这种工程菌已可通过发酵大量培养,并从菌体分离得到接近纯化的荧光素酶。这种酶的分子量是103kD;巯基试剂5,5’-巯基-2(2-硝基苯甲酸)“DTNB”能抑制酶的活性;对于底物荧光素的K_m为1.2μmol/L;酶反应最适pH为7.77;酶催化的生物发光峰在560nm。     

红桔果实采后贮藏期间的某些生理变化(简报)

红桔果实的呼吸速率采后入库当天（第3d）最大,以后逐渐下降稳定,贮后90d又上升,120d再次出现高峰;果肉的呼吸速率则一直下降;果皮下降较稳定。果肉中可溶性精含量同时下降。可滴定酸前期变化不大,初枯后迅速下降。全枯后自由水增加,束缚水减少。POD活性和果实呼吸速率呈正相关,SOD活性一直下降,而MDA含量则相反。     

生物发光法微生物快速检测试剂的性质及其影响因素研究

研究了ATP生物发光微生物快速检测试剂的反应动力学、反应最适温度、pH以及各种影响因素。在ATP生物发光反应中,测试系统中D-荧光素用量为40～50μg／mL时对反应已经足够;发光脉冲计数CPM值随反应时间的延长不断降低,开始的1min内,其CPM值下降最快,然后下降速度不断减缓;反应的最适温度为24℃～25℃;而体系的最佳pH为7．2-7．4。配制好的发光试剂溶液置于4℃保存45h,可以保持86％的活力。在25℃时保温1h,活力下降较少,随时间的增加,活力逐渐下降,到6．5h时,仅剩53．5％的活力,而在33℃时,随着保温时间的延长,酶活力下降较快,保温1．5h,活力剩下59．1％,因此保存温度对发光试剂活力的影响非常大。各种化学物质如酸、碱、盐及表面活性剂都会抑制ATP发光反应,当NaCl浓度达到1．5g／L时,即可以抑制52．5％的发光,TritonX-100及酸、碱对系统均有一定的影响,CTAB、SDS及TCA则严重抑制发光反应。     

红桔果实采后贮藏期间的某些生理变化

红桔果实的呼吸速率采后入库当天最大,以后逐渐下降稳定,贮后９０ｄ又上升,１２０ｄ再次出现高峰。果肉的呼吸速率则一直下降,果皮下降较稳定。果肉中可溶性糖含量同时下降,可滴定酸前期变化不大,初枯后迅速下降,全枯后自由水增加,束缚水减少。ＰＯＤ活性和果实呼吸速率呈正相关,ＳＯＤ活性下下直降,而ＭＤＡ含量则相反。     

Cr6+胁迫对莱茵衣藻光合作用的影响

以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)为研究材料,采用氧电极和快速叶绿素a荧光诱导动力学方法研究了不同浓度和时间Cr6+处理对其光合作用的影响.结果表明:当Cr6+浓度大于40 μmol/L时,莱茵衣藻细胞数逐渐下降,而藻细胞变大;表观光合速率成为负值,呼吸作用随Cr6+处理浓度的增加先上升后下降至对照水平;莱茵衣藻有活性放氧复合体比例随Cr6+处理浓度的增加逐渐降低,80 μmol/L Cr6+处理3 d时已下降至13.72%;光合驱动力(DFABS)随Cr6+浓度增加逐步下降,并以DFφPo在DFABS的下降中的贡献最大.研究发现,重金属Cr6+胁迫显著影响莱茵衣藻的光合作用,而对呼吸作用则影响较小;Cr6+主要通过损伤供体侧的放氧复合体以及阻断QA至QB的电子传递而抑制光系统Ⅱ的功能;莱茵衣藻光系统Ⅱ对Cr6+处理比较敏感且存在着多个作用位点,并首先影响反应中心光能捕获效率,其次影响反应中心的活性,最后影响QA-之后的电子传递.     

采后预温处理对草莓果实贮藏保鲜效果的影响

研究了采后预温处理对草莓果实贮藏保鲜的影响,结果表明,冷藏(5℃)条件下,贮前50℃预热处理30m in的果实腐烂率最低;室温贮藏(19℃~21℃)条件下,50℃预热处理30m in、5℃预冷处理30m in的果实腐烂率最低;贮藏前期,果实中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量不断上升,预热处理能明显提高果实的SOD活性;贮藏后期,果实SOD活性不断下降、MDA含量持续上升,预处理能显著抑制果实SOD活性的下降和MDA含量的增加。     

鲜切芦蒿贮藏过程中叶绿素、纤维素及相关酶的变化

芦蒿去除不可食部分、冰水清洗、切分后于 0℃下贮藏。贮藏期间定期测定芦蒿的叶绿素、纤维素含量及其相关酶的活性。结果表明 :鲜切芦蒿贮藏过程中 ,叶绿素含量贮藏后期略有下降 ( <15 % ) ;叶绿素酶活性呈稳定增加趋势。鲜切芦蒿贮藏期间纤维素含量逐步增加 ,贮藏至第 15天比入贮时增加了 37.7% ;纤维素酶则持续下降 ,贮藏结束时活性仅为入贮时的 1/ 14。     

48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应

为了研究48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应以及寻找可能消除边缘效应的方法措施。本研究用常规方法培养人胚肾细胞HEK293,运用脂质体转染试剂Lipofectamin 2000将荧光素酶报告基因质粒p GL4.13Z和内参质粒p RL-TK共转染入48孔板中的HEK 293细胞。转染后24 h用荧光素酶报告基因实验检测试剂测量细胞的荧光素酶活性,比较角落孔、边缘孔以及中间孔测定值的差异,以及内参照海肾荧光素酶活性校准后的差值,并通过细胞计数来观察此种差异是否与细胞数目和转染效率相关。在此基础上,寻找可能减小边缘效应的方法,如细胞种植入48孔板后将其室温静置、48孔板重叠、放弃使用边缘孔。运用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验存在边缘效应,边缘孔与中间孔的荧光素酶活性测定值有显著的差异且有统计学意义(p0.05),而边缘效应的产生与细胞数目和转染效率无明显关联。细胞种植入48孔板后将其室温静置1.5 h、或重叠一个48孔板以及空置边缘孔都不能减弱边缘效应;然而将48孔板四周边缘孔填充液体(磷酸盐缓冲液(1*PBS),水),可以削弱边缘效应。用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验会产生边缘效应,并可能造成对实验结果的误判;48孔板四周边缘孔填充相应的液体可以削弱边缘效应。     

马蹄切片呼吸代谢特性研究

新鲜马蹄切片总呼吸和抗氰呼吸均比较低,但在25℃下贮放期间迅速上升;切片交替途径容量、运行活性也不断上升,但运行系数却在下降。细胞色素途径运行活性随总呼吸的增加而显著加强,但所占比值不断下降。利用呼吸代谢抑制剂Na3PO4、丙二酸和解偶联剂DNP改变电子流量的结果表明,降低呼吸电子流时,抗氰呼吸与细胞色素途径呼吸均下降,且抗氰呼吸占总呼吸的比例下降;增加呼吸电子流时,这两条传递途径均加强,且抗氰呼吸占总呼吸的比例增加。研究结果还表明,尽管三羧酸循环是机械伤诱导的主要呼吸途径,但同时伤诱导的残余呼吸和磷酸戊糖途径运行量均有明显的增加,推测可能与马蹄褐变和异味的产生有一定的联系。     

采收期对青皮核桃果实生理特性与耐贮性的影响

以‘中林5号’(早熟)、‘辽宁4号’(中熟)、‘西扶1号’(中晚熟)青皮核桃果实为试材,于8月上、中、下旬3个采收期采果,在0~1℃冷藏过程中测定贮期生理指标和保鲜效应。结果显示:(1)各采收期和各品种果实呼吸强度(RI)均呈双峰型变化;8月中旬采收的果实呼吸峰出现较早,其纤维素酶(Cx)活性较另2个采收期多1个高峰;多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性增强最早,其贮后核仁酸价上升幅度最大,果实腐烂最快。(2)8月下旬同期采收的3个品种果实的贮期各生理指标变化趋于一致;贮藏54d时,果实腐烂率依次为‘辽宁4号’>‘中林5号’>‘西扶1号’。(3)‘辽宁4号’核仁可溶性蛋白质含量越高,贮后下降率最大。研究表明,青皮核桃果实采后生理代谢活性与耐贮性主要与采收时期有关,受品种影响较小,且8月中旬采收的果实采后生理代谢旺盛,耐贮藏性均最差;‘辽宁4号’果实在各采收期的耐贮性均小于其他品种果实。     

小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶报告质粒的构建及表达调控

[目的]构建小鼠pre-miRNA-122基因启动子荧光素酶报告质粒,研究血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)对miRNA-122表达的影响。[方法]利用生物信息学分析pre-miRNA-122启动子片段并扩增,插入pGL3-basic载体中获得报告质粒pmir-122-luc。将pmir-122-luc转染小鼠Huh-7和HepG2细胞,24h后检测荧光素酶活性;同样将其转染小鼠肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs),PDGF处理12h后检测活性。[结果]pre-miRNA-122上游5.5~4.5 kb为启动子区域。构建的质粒经酶切、测序鉴定正确。pmir-122-luc荧光素酶活性较pGL3-basic显著增加,且在Huh-7细胞高表达(24±5.02倍)而在HepG2细胞低表达(1.8±0.34倍)。pmir-122-luc能在HSCs中表达,且PDGF处理后活性降低(P0.05)。[结论]小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶活性报告质粒构建成功;PDGF抑制miRNA-122在HSCs中表达,为探索miRNA-122的表达调控机制提供了新的窗口。     

棕色固氮菌中固氮酶的氧钝化及其保护

超声破碎得到的棕色固氮菌提取液中,铁蛋白严重缺乏。外加部分纯化的铁蛋白可以使提取液的固氮活性成倍增加。外加的铁蛋白与提取液中某些成份结合,可以经高速离心分离,其抗氧能力随之大为提高。提取液中固氮活性的抗氧能力有赖于Mg~(++)的存在,在有氧条件下提取液通过Sephadex G-25柱后立即失活,但如果在平衡和洗脱缓冲液中补以0.01M MgCl_2,固氮活性几乎可完整保存。菌体破碎时,外加适量Mg~(++),不但可以提高提取液的固氮活性,而且抗氧能力还能进一步提高。