二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的观察二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响,研究其对血脑屏障紧密连接是否具有保护作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及二氮嗪预处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色和Western blot检测各组大鼠ZO-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果 1.假手术组ZO-1、Claudin-5在血管上的染色连续、丰富,缺血再灌注组ZO-1、Claudin-5的染色稀少、断续,二氮嗪预处理组染色较缺血再灌注组有所改善;2.Western blot定量测定与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠脑组织中ZO-1和Claudin-5蛋白表达均明显下降(P0.01),与缺血再灌注组相比,二氮嗪预处理组ZO-1和Claudin-5的蛋白表达明显增多(P0.05)。结论二氮嗪对血脑屏障紧密连接具有保护作用,其机制可能与增加紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5的表达有关。     

1840 MHz射频辐射对大鼠血脑屏障通透性的影响

目的:探讨环境射频辐射暴露对雄性SD大鼠血脑屏障通透性的影响。方法:36只成年雄性SD大鼠随机分为暴露组和假暴露组,对暴露组大鼠进行频率为1840 MHz、比吸收率(SAR值)为2 W/kg、每日1 h、连续7 d的全身辐照。硝酸镧示踪透射电镜法和白蛋白免疫组化法观察暴露后大鼠脑皮质血脑屏障超微结构和通透性,免疫印迹法检测血脑屏障紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平。结果:透射电镜结果显示,假暴露组镧颗粒仅出现在大鼠脑微血管管腔内;而在暴露组,除微血管管腔外,在局部脑皮质微血管内皮基底膜处和周围脑实质间亦可见镧颗粒沉积。免疫组化染色显示,假暴露组大鼠脑皮质微血管周围未见白蛋白渗出,而暴露组大鼠脑皮质微血管周围有明显白蛋白沉积。上述结果提示,射频辐射暴露可能增加血脑屏障通透性。免疫印迹结果显示,与假暴露组相比,暴露组大鼠脑皮质ZO-1蛋白表达水平明显降低(P0.001),差异具有统计学意义。结论:1840 MHz射频辐射可诱导血脑屏障发生一定程度地开放,紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平的改变可能参与该过程。     

大豆异黄酮基于RhoA/ROCK2信号通路改善MCAO大鼠神经功能损伤

目的:探讨大豆异黄酮对脑缺血再灌注大鼠RhoA/ROCK2信号通路介导的氧化应激反应和神经元凋亡的影响。方法:60只SD大鼠随机分为3组,对照组、模型组、大豆异黄酮组。连续给药7天后,给药剂量200 mg/kg。应用中动脉栓塞再灌注模型致大鼠缺血损伤。24 h后评价大鼠神经功能,TTC染色检测脑梗死体积,试剂盒检测脑中氧化因子含量,免疫组化检测神经元损伤,Western Blotting检测RhoA/ROCK2相关蛋白含量。结果:与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分降低(P0.05),脑梗死体积增加(P0.05),氧化因子含量增加(P0.05),神经元凋亡显著(P0.05),RhoA/ROCK2蛋白表达增加(P0.05)。与模型组相比,大豆异黄酮升高了大鼠神经功能评分(P0.05),减少的脑梗死体积(P0.05),降低脑中氧化因子含量(P0.05),抑制了神经元凋亡(P0.05),抑制了RhoA/ROCK2蛋白表达(P0.05)。结论:大豆异黄酮可以缓解脑缺血再灌注损伤介导的氧化应激及细胞凋亡,进而减轻神经功能障碍,其机制可能与抑制RhoA/ROCK2信号通路相关。     

甘西鼠尾草对大鼠高原肺动脉高压的干预作用及机制*

目的:探讨甘西鼠尾草(SPM)对大鼠高原肺动脉高压(HAPH)的干预作用及可能的机制。方法:将雄性SD大鼠随机分成对照组、缺氧组、SPM(0.5 g/kg、1 g/kg、2 g/kg)剂量组,每组14只,对照组饲养于西宁(海拔约2260 m),其余组均饲养于玛多县人民医院(海拔约4260 m)。SPM剂量组灌胃不同浓度的SPM(1 ml/100 g),浓度分别为0.5 g/kg、1 g/kg、2 g/kg,对照组和缺氧组灌胃等体积蒸馏水,每日一次,连续4周后,测定大鼠平均肺动脉压(mPAP)并取相同部位肺组织置液氮保存备用。采用RT-PCR法测定每组大鼠肺组织中的细胞增殖核抗原(PCNA)、细胞周期素依赖激酶(CDK4)、细胞周期蛋白D(CyclinD1)、RhoA(Ras同源基因家族成员A)、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平。结果:与对照组比较,缺氧组大鼠mPAP、肺组织中PCNA、CDK4、CyclinD1、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平均明显升高(P＜0.01)。与缺氧组比较,SPM剂量组大鼠的mPAP、肺组织中PCNA、CDK4、CyclinD1、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论:SPM对大鼠HAPH具有一定的预防作用,其机制可能与抑制肺动脉平滑肌细胞过度增殖和RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路过度激活有关。     

急性酒精处理对大鼠脑内AQP4表达的影响

目的:探讨急性酒精处理对大鼠脑内水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)表达变化的影响。方法:32只雄性SD成年大鼠随机分为低剂量酒精组(LA)、中剂量酒精组(MA)、高剂量酒精组(HA)和生理盐水对照组(NS)。其中前三组通过腹腔注射不同剂量的酒精制作大鼠急性酒精中毒模型,生理盐水对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。免疫组化方法检测了脑内前额皮质、胼胝体和室管膜AQP4的表达变化。结果:AQP4表达于各组大鼠的前额皮质、胼胝体和室管膜,LA组平均相对灰度值(ARG)分别为1．455±0．142,1．583±0．114,1．422±0．111,HA组ARG值分别为1．432±0．131,1．567±0．143,1．412±0．119,均高于NS组ARG值1．414±0．119,1．523±0．123,1．402±0．128(P＜0．05),MA组AQP4阳性表达显著增强,ARG值1．602±0．124,1．595±0．149,1．433±0．008,明显高于NS组ARG值1．414±0．119,1．523±0．123,1．402±0．128(p＜0．01)。结论:急性酒精中毒能使大鼠脑内AQP4表达显著增加,其表达的变化可能与急性酒精中毒时脑水肿有关。     

牛磺酸对脑创伤大鼠的脑保护作用

目的:探讨牛磺酸(Tau)预处理对弥漫性脑创伤(TBI)大鼠脑皮层超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、脑含水量(BWC)和脑皮层水孔通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法:复制大鼠TBI模型,分为假手术组(S组)、TBI组(T组)、低剂量Tau组(L组)和高剂量Tau组(H组),用比色法测定脑皮层匀浆液中SOD活力和MDA含量;干/湿法测定BWC;免疫组织化学检测脑皮层AQP4的表达。结果:T组大鼠脑皮层SOD活力显著低于S组,T组MDA含量、BWC和脑皮层AQP4的表达显著高于S组;H、L组脑皮层SOD活力显著高于T组,H、L组MDA含量、BWC和脑皮层AQP4的表达显著低于T组;H、L组之间差异无显著性。结论:Tau可能通过清除TBI后产生的的氧自由基、下调TBI大鼠脑皮层AQP4的表达减轻脑水肿,发挥其脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注时水通道蛋白4表达与血脑屏障通透性变化

目的:研究大鼠脑缺血/再灌注时脑组织中水通道蛋4(AQP4)表达与脑水肿、血脑屏障通透性间关系。方法:采用大鼠大脑中动脉线栓缺血模型,免疫组化法、蛋白印迹法测定AQP4表达,干湿重法测定脑水含量以评价脑水肿,伊文氏蓝(EB)法测定血脑屏障通透性。结果:脑缺血后再灌注4～6h,AQP4表达上调,至12h上调显著,48～72h达高峰。脑水含量、EB含量均与此趋势相一致,且AQP4表达与脑水含量、EB含量呈显著正相关(P0.05)。结论:AQP4表达参与了缺血性脑水肿的产生,且与BBB通透性改变呈正相关。     

牛磺酸对脑创伤大鼠脑超微结构及P2X7受体表达的影响

目的:探讨牛磺酸对脑创伤大鼠脑超微结构及P2X7受体蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成4组(n=10):假手术组、脑创伤组、脑创伤+低剂量牛磺酸组和脑创伤+高剂量牛磺酸组。采用Marmarou’s方法建立脑创伤模型,免疫组织化学法观察顶叶皮层、海马P2X7受体蛋白表达,透射电镜观察顶叶皮层超微结构。结果:与假手术组相比,脑创伤组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著增多(P<0.01);与脑创伤组相比,脑创伤+低、高剂量牛磺酸组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著减少(P<0.01或P<0.05),与脑创伤+低剂量牛磺酸组相比,脑创伤+高剂量牛磺酸组顶叶皮层、海马P2X7阳性表达细胞显著减少(P<0.05或P<0.01)。脑创伤+高剂量牛磺酸组顶叶皮层病理改变明显减轻。结论:牛磺酸可对脑创伤大鼠发挥脑保护作用,其机制可能与下调P2X7受体蛋白表达有关。     

糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构的损伤及其机制

目的：研究糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构关键蛋白紧密连接蛋白（ZO-1）、基底膜蛋白（CoIV）、周细胞蛋白（a-SMA）的表达情况及其损伤机制。方法：采用高脂灌胃14 d后,再尾静脉注射链脲佐菌素（STZ,38mg/kg）,随机分为2组（n=15）：糖尿病组和糖尿病并发抑郁症组;正常大鼠随机分为2组（n=15）：空白对照组和抑郁症组。糖尿病组与空白对照组正常饲养,糖尿病并发抑郁症组和抑郁症组慢性不可预知性应激28 d。检测各组大鼠血糖值的变化,Open-field及Morris实验评价大鼠行为学变化,透射电子显微镜观察大鼠海马血脑屏障形态学改变,免疫组化法检测大鼠海马血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoIV、a-SMA表达情况。结果：与空白对照组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠血糖异常升高,自主活动次数减少,逃避潜伏期延长,空间探索时间减少（P < 0.05,P < 0. 01）;海马血脑屏障内皮模糊,毛细血管管腔狭窄,周边胶质细胞终足水肿,ZO-1、α-SMA表达显著减少（P < 0. 05）,CoIV的表达显著增加（P < 0.05）;与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数显著减少（P < 0. 01）,逃避潜伏期延长（P < 0.05）,海马血脑屏障毛细血管管腔更为狭窄、胶质细胞终足水肿更为明显,a-SMA表达显著下降（P< 0.05）。结论：糖尿病并发抑郁症血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoIV、α-SMA表达紊乱可能是其结构损伤发生机制之一。     

格列齐特对糖尿病大鼠心肌的保护作用及其机制*

目的: 观察格列齐特对糖尿病大鼠心肌保护作用及其可能的机制。方法: 将60只健康SD大鼠随机分为正常组(NC,n=10),造模组(n=50)给予高糖高脂饲料4周后,腹腔注射STZ(45 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,随机抽取以FBG≥16.7 mmol/L作为糖尿病模型建立成功。将造模成功的38只糖尿病大鼠随机分为模型组(MC,n=9)、格列齐特组(Glic,80 mg/kg,n=10)、格列本脲组(Glib,2.5 mg/kg,n=10)、法舒地尔组(Fas,10 mg/kg,n=9);NC组和MC组灌胃等容积蒸馏水,Glic组和Glib组灌胃给药,Fas组采用腹腔注射。各组大鼠每天给药一次,每周记录体质量及空腹血糖(FBG),持续8周。实验结束时取血并测定心脏质量,计算心脏质量指数(HWI);测定各组糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量以及血清丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;通过HE和Masson染色,观察心肌病理变化和组织胶原纤维水平;TUNEL染色观察并计算心肌细胞凋亡率;Western blot法检测心肌组织中RhoA、ROCK1、eNOS、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果: 与NC组比较,MC组FBG、HWI、HbA1c、TC、TG、LDL-C、MDA水平,心肌组织胶原沉积和心肌细胞凋亡率以及心肌组织中RhoA、ROCK1、Bax蛋白明显升高,SOD活性及HDL-C、eNOS、Bcl-2和体重显著降低(P＜0.01);与MC组相比,Glic组FBG、HWI、HbA1c、TC、TG、LDL-C和MDA等指标明显下降,心肌组织胶原沉积及心肌细胞凋亡减轻,心肌组织RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达下调(P＜0.01或P＜0.05),大鼠体重和血清中SOD活性,HDL-C升高,eNOS、Bcl-2蛋白水平升高(P＜0.01或P＜0.05)。与Glic组相比,Glib组与Fas组体重、血脂、FBG、HWI、MDA以及心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平升高,SOD和Bcl-2降低,Glib组心肌组织RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达上调(P＜0.01或P＜0.05)。结论: 格列齐特可改善糖尿病大鼠心肌损伤并减轻心肌细胞凋亡水平,其机制可能与降低血糖,改善氧化应激状态,调控RhoA/ROCK1/eNOS信号通路有关。     

肺虚痰阻证模型大鼠肺组织水通道蛋白1 和5 分子表达与补肺化痰方对 其影响*

目的:1)从肺泡上皮水主动转运功能的角度探讨肺虚痰阻证的发生机理。2)通过观察肺虚痰阻证模型的AQP的活性及其相关基因、蛋白的表达和补肺化痰中药复方治疗前、后的对比,观察这一过程中上述指标的变化情况。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组。模型组和治疗组造模40天,治疗组在造模26天后,药物灌胃治疗2周。采用组织化学染色法,对大鼠肺进行病理分析;RT-PCR的方法检测大鼠肺组织中AQP1、AQP5基因表达;western blot法检测大鼠肺组织中AQP1、AQP5蛋白水平。结果:1)与正常组相比,模型组局部出现明显炎症反应(P<0.01),治疗组局部炎症反应减轻(P<0.05)。2)mRNA结果显示,AQP1在正常组有表达,在模型组和治疗组未见表达。AQP5模型组与正常组相比,表达量显著增高(P<0.01);治疗组与模型组比较,表达量显著降低(P<0.01),但与正常组无显著差异。3)蛋白水平上,AQP1在模型组和治疗组与正常组相比差异显著(P<0.05),表达下降。AQP5模型组与正常组相比,显著升高(P<0.01);治疗组与模型组比较,显著下调(P<0.05);正常组表达低于治疗组,差异显著(P<0.05)。结论:1)AQP1和5基因及蛋白表达量变化是肺虚痰阻证的病理机制之一。2)补肺化痰中药复方可调节肺虚痰阻证模型大鼠肺组织AQP 5基因及蛋白表达。提示补肺化痰中药复方治疗肺虚痰阻证其作用机制与调节AQP5有关。     

益生菌对胆汁淤积性黄疸大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨双歧三联活菌(培菲康)对胆汁淤积性大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1(zonula oc-cludens-1)和Occludin表达的调控机制。方法雄性3周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组和培菲康组,模型组和培菲康组均给予α-异硫氰酸萘酯(ANIT)50 mg/kg一次性灌胃,建立急性肝内胆汁淤积动物模型,培菲康组于造模前4 d开始给予培菲康4.2×107个活菌数/(kg.d)灌胃大鼠。分别于造模后24、48和72 h三个时间点处死大鼠,取末端回肠黏膜组织,采用免疫组化和Western blots免疫印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、闭锁蛋白(Occludin)的分布和表达,并利用图像分析系统对Western blots图像结果进行定量分析。结果ZO-1和Occludin蛋白主要沿大鼠小肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,模型组大鼠24 h时ZO-1和Occludin的阳性染色较对照组减少,48 h减少最为明显,72 h阳性染色有所恢复,而培菲康组大鼠各时间点ZO-1和Occludin的阳性染色和模型组相比均明显增多。Western blots结果与免疫组织化学结果相一致,模型组24 h已经开始下降(ZO-1 0.1294±0.0481)、(Oc-cludin 0.1950±0.0441),48 h达到最低(ZO-1 0.0395±0.0095)、(Occludin 0.0137±0.0092),72 h开始恢复(ZO-10.2024±0.0498)、(Occludin 0.1494±0.0355),各时间点与对照组(ZO-1 0.2887±0.0237)、(Occludin 0.4266±0.0670)相比差异有统计学意义(P0.01);而培菲康组各时间点蛋白表达分别为24 h(ZO-1 0.2110±0.0367)、(Occludin 0.3056±0.0572),48 h(ZO-1 0.1173±0.0423)、(Occludin 0.0521±0.0123),72 h(ZO-1 0.2601±0.0191)、(Occludin 0.2050±0.0721),与模型组相应时间点数据相比差异有统计学意义(P0.05)。结论双歧三联活菌能够影响胆汁淤积性大鼠小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达,可以恢复肠黏膜上皮屏障的完整性。     

吸烟大鼠肺脏AQP4 和MUC5AC 的表达及其与 一氧化氮的关系

目的:研究烟草烟雾吸入对大鼠肺组织水通道蛋白4(AQP4)和粘蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物水平的关系,探讨氧化应激对肺部水转运和粘液分泌的影响。方法:免疫组化法观察AQP4在肺组织内的表达,平均光密度法比较模型组和空白组大鼠AQP4的表达差异;半定量RT-PCR法检测肺组织内AQP4及MUC5AC mRNA的表达水平;硝酸还原酶法测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度,分析模型组AQP4、MUC5AC mRNA的表达水平与支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢物浓度之间的相关关系。结果:AQP4在空白对照组呈强阳性染色,在模型组呈弱阳性染色,两者平均光密度值有显著差异(P<0.05)。模型组动物肺组织AQP4 mRNA的表达降低,MUC5AC mRNA的表达升高,与空白组比较均有显著差异(P<0.05),模型组动物支气管肺泡灌洗液内一氧化氮代谢产物的浓度与肺组织AQP4 mRNA表达水平呈负相关,相关系数r=-0.798(,P<0.05),与MUC5AC mRNA的表达水平呈正相关,相关系数r=0.857(,P<0.05)。结论:吸烟可导致肺组织AQP4表达下降进而影响气道内水的转运。一氧化氮可能参与了烟雾吸入动物模型中AQP4与MUC5AC基因表达的调控。     

整肠生对溃疡性结肠炎 小鼠肠上皮屏障的保护作用

目的探讨整肠生对溃疡性结肠炎小鼠肠道紧密连接蛋白表达以及对氧化应激反应的影响。方法选用雄性8~10周龄C57BL/6小鼠40只,随机分为4组:对照组、模型组(3%DSS)、5-ASA组(3%DSS+5-ASA 200mg/kg灌胃)和整肠生组(3%DSS+联合整肠生及5-ASA灌胃),每组10只,造模7d。观察各组小鼠便血程度、组织学损伤情况,通过投射电镜观察各组肠道上皮间紧密连接改变情况,应用Western blot和RT-PCR的方法,检测小鼠结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-2的表达情况。结果 (1)与模型组比较,5-ASA组和整肠生组小鼠便血程度明显减轻,DAI评分显著降低(P0.05)。整肠生组与5-ASA组比较,便血减轻,DAI评分降低(P0.05)。(2)电镜显示,对照组肠上皮间紧密连接呈一条致密条带,结构完整,见细胞桥粒,微绒毛光滑、排列整齐,细胞间隙狭窄;模型组肠上皮间紧密连接结构松散、模糊、密度降低,桥粒结构消失,微绒毛稀疏,短缩且长短不一,细胞间隙增宽;各治疗组的紧密连接的破坏情况较模型组有不同程度的改善,整肠生组紧密连接清晰,细胞间隙缩窄,微绒毛排列整齐,出现细胞桥粒。(3)应用Western blot和Real time-PCR法检测,与正常组相比,模型组Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达显著下降,Claudin-2表达显著上调(P0.05);各治疗组较模型组Occludin、ZO-1蛋白表达上调,Claudin-2蛋白表达下调(P0.05),整肠生组较单用5-ASA组更明显提高Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达。(4)与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活性降低,与5-ASA组相比,整肠生组能更显著地降低MDA含量,提高SOD活性(P0.05)。结论联合应用整肠生通过调节紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达和降低氧化应激反应,来改善溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障功能。     

慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压小鼠肺组织Rho激酶的表达变化

慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压严重威胁着国民身体健康,但其发病机制尚未完全阐明。该研究通过检测正常对照组和慢性低氧高二氧化碳组小鼠右心室肥厚指数(right ven-tricular hypertrophy index,RVHI)、管壁厚度占血管外径的百分比(vessel wall thickness/total vasculardiameter,WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(vessel wall area/total vascular area,WA%),RT-PCR检测肺组织中Rho激酶(ROCK1,ROCK2)基因的表达,Western blot检测肺组织中ROCK1、p-MYPT1(phospho-myosin phosphatase target subunit 1)蛋白的表达,免疫组织化学法观察ROCK1的定位表达,探讨了Rho激酶在慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压形成中的作用。结果发现,慢性低氧高二氧化碳组小鼠RVHI、WT%、WA%值均显著升高(P<0.01),ROCK1、ROCK2基因表达明显增加(ROCK1 P<0.01,ROCK2 P<0.05),ROCK1、p-MYPT1蛋白表达显著增加(P<0.01),ROCK1蛋白表达于肺动脉、肺泡和支气管。以上结果提示,慢性低氧高二氧化碳条件下,小鼠肺组织中Rho激酶表达升高,可能参与了肺动脉高压的形成。     

牵张应力对成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA和ROCK表达的影响

目的:探索机械牵张应力对人成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA/ROCK信号通路的影响。方法:将同一条件培养的细胞MG-63分为实验组(加力)与对照组(不加力),实验组采用Flexcell牵张应力加载系统,选择12%形变率作为加载应力值,分为五个时间组,分别加载1 h,4 h,8 h,12 h,24 h,RT-PCR检测RhoA、ROCK mRNA水平表达的变化,Western-Blot检测RhoA与Rock蛋白含量变化。结果:RT-PCR显示MG-63细胞受应力刺激后1 h RhoA、ROCK均未见明显变化(P0.05),4小时后略有升高(P0.05),在8 h达到最大值(P0.05),12、24 h降低,但仍高于对照组(P0.05);Western-Blot显示MG-63细胞受应力刺激后1 h RhoA、ROCK均未见明显变化,4 h仍未见明显变化,在8 h达到最大值,12、24 h降低,高于对照组。结论:机械牵张力加载下MG-63细胞内RhoA、ROCK表达升高并随时间增加出现峰值,提示其可能在成骨细胞力学信号转导过程中发挥重要作用。     

13-甲基十四烷酸对大鼠脑皮层星形胶质细胞氧反常的影响

目的研究13-甲基十四烷酸(13-methyltetradecanoic Acid,13-MTD)对大鼠脑皮质星形胶质细胞氧反常的保护作用。方法传代培养新生SD乳鼠大脑皮质星形胶质原代细胞,以氧糖剥夺/再复氧糖(OGD/R)方法复制氧反常模型,OGD 10 h/R 24 h,于再复氧糖即刻分别给予13-MTD 20,40,80μg/m L(M20,M40,M80)干预,倒置显微镜动态观察星形胶质细胞形态,细胞免疫化学鉴定角质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),MTT法检测线粒体活性,免疫组化法检测星形胶质细胞的水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)蛋白表达。结果OGD 10 h/R 24 h损伤后,体外培养的SD乳鼠脑皮质星形胶质细胞出现明显损伤,线粒体活性显著下降(P0.01),星形胶质细胞膜AQP4蛋白表达量明显增加(P0.01);与模型组比较,13-MTD 20,40,80μg/m L可减少损伤,使线粒体活性上升、AQP4蛋白表达减少,以80μg/m L效果最好(P0.01)。结论 13-MTD可通过降低AQP4的表达,提高线粒体活性,减轻细胞水肿,进而保护氧反常诱导的星形胶质细胞损伤。     

车前子对腹泻大鼠炎性因子和结肠组织 AQP8蛋白表达的影响

为了观察车前子对番泻叶诱导的腹泻大鼠血清中炎性因子和结肠组织中水通道蛋白8(AQP8)蛋白表达的调控作用,实验将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组(9 mg/kg)和车前子高、中、低剂量组(3.8、1.9、0.95 g生药/kg),每组10只。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液(20 mL/kg),正常组灌胃等量的蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量的蒸馏水,连续14天。实验期间每天观察大鼠排便情况,实验结束后,收集血清、结肠组织标本检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)的含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察病理形态学变化;免疫组化法和Western blot法检测结肠组织中AQP8蛋白表达情况。结果显示车前子各剂量组均能改变大鼠粪便性状,大便基本成形;降低血清中TNF-α、IL-6和CRP的含量;减轻结肠黏膜的病理损害;上调AQP8蛋白的表达。上述研究结果表明,车前子能防治番泻叶所致的腹泻,其作用机制可能与抑制炎症反应、修复结肠黏膜病理损伤,上调AQP8蛋白表达,促进水液代谢有关。     

脑水肿时紧密连接蛋白occludin及AQP4的表达变化

目的:采用枕大池内注入脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)的方法建立大鼠脑水肿模型,观察脑组织病理形态学变化,脑组织含水量(brain water content,BWC),血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的紧密连接蛋白Occludin和水通道蛋白-4(aquaporin 4,AQP4)表达水平的动态变化,研究AQP4及Occludin与脑水肿形成的关系,及其可能的作用机制,为临床脑水肿的治疗提供理论依据。方法:选用Wistar健康成年大鼠,随机分为正常对照组,生理盐水组和脂多糖组,后两组的观察时间点选定于造模后3 h、6h、12 h、24 h、72 h。采用经皮穿刺枕大池内注入脂多糖的方法制备脑水肿动物模型,正常对照组、生理盐水组及脂多糖组分别于各时间点进行开颅取脑,测定脑组织含水量,通过HE染色法观察脑组织的病理形态学变化,应用Western blot方法检测occludin的表达变化。应用RT-PCR技术测定脑组织内AQP4mRNA的表达变化。结果:生理盐水组各时间点中有少量AQP4mRNA及occludin蛋白的表达,与正常对照组之间无显著性差异;脂多糖组在造模后3 hAQP4的mRNA表达开始增加,6-12 h达高峰,此后明显下降,随后表达开始减弱,24-72 h表达显著低于生理盐水组;occludin蛋白表达下降出现于造模后3 h,12-24 h下降更明显,72 h表达开始升高。结论:枕大池内注入脂多糖(LPS)所建立脑水肿模型中,脑组织含水量及血脑屏障通透性增加,病理学特点是血管源性脑水肿出现早且持久,后期伴有细胞毒性脑水肿的改变。AQP4早期表达增强是胶质细胞的适应性反应,与血脑屏障的破坏有关,促进了血管源性脑水肿的发生。后期AQP4表达减弱是机体内在防御机制的表现,同时又促进细胞毒性脑水肿的形成。occludin在脑组织中表达量随脑水肿的加重而降低,即与脑水肿的程度呈负相关,目前认为这与脑水肿时内皮细胞通透性增加,血脑屏障的通透性改变,导致occludin的表达下调有关,促进了血管源性脑水肿的发生。针对以上特点,我们可以进一步研究调控AQP4及occludin表达的药物,从而减轻脑损伤后脑水肿的程度,为脑水肿的治疗提供新的临床策略。     

通窍明目IV号对青光眼模型大鼠视神经保护的机制研究

目的:观察不同浓度通窍明目Ⅳ号对青光眼模型大鼠凋亡相关蛋白表达的干预作用。方法:将42只SD大鼠随机分为空白组,模型组,通窍明目4号低、中、高剂量组和神经营养剂组,共计6组,每组7只。经眼球前房角膜缘注射卡波姆复制高眼压模型,成模21天后灌胃给药,给药期4周。采用HE染色观察视网膜形态及视神经节胞、免疫组化法测定BCL-2、Bax、P53蛋白表达,用Western Blot法测定Caspase-3、Caspase-9蛋白表达。结果:与空白组对比,模型组视网膜Bax与p53阳性表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,神经营养剂组与通窍明目Ⅳ号高、中剂量组视网膜Bax与p53蛋白的阳性表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组视网膜Bcl-2阳性表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,神经营养剂组与通窍明目Ⅳ号各剂量组视网膜Bcl-2的阳性表达有不同程度的提高。模型组大鼠caspase-3、caspase-9的蛋白表达水平均高于空白组(P<0.01);与模型组比较,神经营养剂组与通窍明目Ⅳ号各剂量组大鼠视网膜Caspase3及caspase-9表达水平明显降低(P<0.01)。结论:通窍明目Ⅳ号可能通过下调Bax、P53表达,促进Bcl-2表达升高、抑制Caspase-3、Caspase-9激活凋亡途径,从而对青光眼视神经起到保护作用。