低聚果糖对AOM/DSS诱导的结肠炎相关结直肠癌小鼠辅助性T细胞的调控作用

探讨益生元低聚果糖（FOS）对结肠炎相关结直肠癌（CAC）小鼠肠道辅助性T细胞的调节作用。

将6周龄SPF级雄性C57BL6小鼠（体重18～20 g）随机分为对照组、模型组和干预组,每组10只。通过偶氮甲烷、葡聚糖硫酸钠构建CAC小鼠模型,干预组每日使用2 mg/kg b.w. FOS灌胃,持续10周。造模期间监测各组小鼠体重变化,造模结束后测量结肠长度和肿瘤数目。采用微球免疫分析法检测血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,流式细胞术分析肠系膜淋巴结内Th1、Th2、Th17细胞亚群比例。

与模型组相比,干预组小鼠结肠长度显著增加（t=3.106,P=0.006 4）,肿瘤数目显著减少（U=15.000,P=0.011 1）,血清中IL-17A（t=3.504,P=0.008 8）、TNF-α（t=2.381,P=0.030 0）等促炎细胞因子水平降低,肠系膜淋巴结Th17细胞比例显著降低（t=6.031,P=0.002 7）,Th1/Th2显著升高（t=2.419,P=0.038 7）。

FOS可调控CAC模型小鼠结肠内辅助性T细胞的分化,抑制肿瘤的发生。

     

HPLC-ELSD法测定不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量北大核心CSCD

本文建立了雪莲果低聚果糖的HPLC-ELSD测定方法,分析不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量。用不同方法处理新鲜雪莲果,然后超声提取雪莲果粉末中低聚果糖,采用HPLC-ELSD测定,色谱柱：华谱XAmide（4.6×250 mm,5μm）,流动相：乙腈∶水=75∶25,流速：1 m L/min,柱温：30℃,检测器：ELSD,漂移管温度70℃。方法学考察结果表明,蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖在0.406～2.030 mg/m L、0.420～2.100 mg/m L、0.456～2.280 mg/m L范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为101.4%、99.7%、98.6%,RSD分别为1.53%、1.29%、2.81%。该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,不同处理方法所得雪莲果粉末中3种低聚果糖的含量差别较大,其中用清水漂洗0.5 h,然后冷冻干燥所得雪莲果粉末中的低聚果糖含量最高。     

红色原鸡外周血单个核细胞IFN-γ的诱导表达及其荧光定量PCR检测

为建立检测红色原鸡外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素γ(IFN-γ)mRNA表达水平的方法,通过优化刀豆蛋白A(Con A)诱导PBMC表达IFN-γ的条件,采用RT-PCR方法以3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参扩增IFN-γ基因,插入克隆载体pMD18-T分别构建重组质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH,以其作为标准品采用SYBR Green I染料法建立荧光定量PCR检测方法,并将该方法应用于34只红色原鸡PBMC IFN-γ表达量的检测。结果发现,PBMC在20μg/mL Con A刺激培养12-25 h时IFN-γ处于高表达水平;标准品质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH分别在拷贝数6.72×102-6.72×109、3.94×102-3.94×109范围内与其对应的Ct值呈现良好的线性关系(R20.99),扩增产物的熔解曲线均只有特异的单峰,表明所用引物特异性强。在优化Con A诱导红色原鸡PBMC表达IFN-γ条件的基础上,建立了可用于定量检测红色原鸡PBMC IFN-γmRNA表达水平的荧光定量PCR方法。     

白细胞介素21对SHIV感染的恒河猴外周血CD8~＋ T细胞分泌γ干扰素的影响

目的研究白细胞介素21（interleukin 21,IL-21）对SHIV感染CD8＋T细胞分泌干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的影响。方法从SHIV/恒河猴模型外周血中分选出CD8＋T细胞,加入IL-21诱导培养,应用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ浓度,RT-PCR方法检测细胞中IFN-γmRNA的表达水平,流式细胞术检测分泌IFN-γ的CD8＋T细胞所占的百分比。结果 10 ng/mL IL-21明显促进CD8＋T细胞分泌IFN-γ（P〈0.05）,IFN-γmRNA的表达明显升高,4 h为刺激CD8＋T细胞胞内IFN-γ合成的最佳时间。结论 IL-21对CD8＋T细胞分泌IFN-γ有促进作用。     

低聚果糖对慢性应激小鼠抑郁样行为及肠道菌群的影响

目的 探讨低聚果糖（FOS）对慢性应激小鼠的抑郁样行为及肠道菌群的影响。方法 选取8周龄健康雄性ICR小鼠随机分成3组,C组小鼠每天给予正常护理,S组和SF组小鼠每天随机给予1～2种应激源,持续8周,SF组小鼠在应激造模的同时经食物补充FOS。在造模4周和8周后,分别通过强迫游泳、蔗糖偏好试验评估各组小鼠抑郁样行为。造模结束后通过Western blot试验检测小鼠大脑皮层内糖皮质激素受体（GR）的表达,并收集结肠内容物进行16S rDNA扩增子测序分析。结果 应激造模8周后,C、S和SF三组小鼠的肠道菌群组成存在明显差异;与C组相比,S组小鼠强迫游泳的不动时间显著增加（t=3.970,P=0.0009）,蔗糖偏好率显著降低（t=3.890,P=0.0011）,脑内GR的表达显著降低（t=4.311,P=0.0125）;与S组相比,SF组小鼠强迫游泳的不动时间显著缩短（t=3.495,P=0.0026）,蔗糖偏好率和脑内GR表达有增加趋势。结论 益生元FOS可调节肠道菌群,改善慢性应激诱发的精神情绪异常。     

蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的表面展示及酶学性质分析

【目的】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶催化1分子蔗糖上的果糖基转移到另一个蔗糖分子上,形成1-蔗果三糖和葡萄糖。在低聚果糖中,1-蔗果三糖益生素活性最高。本研究将该酶展示在酵母菌细胞表面上,并用于1-蔗果三糖的制备。【方法】将来自莴苣的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶基因克隆到用于酵母细胞表面展示的表达载体上,并在解脂亚罗酵母菌中进行异源表达,表达的酶展示在该细胞表面上,然后以蔗糖为底物,研究表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的性质。【结果】免疫荧光实验结果表明蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶已展示在酵母菌的细胞表面上,高效液相色谱结果表明酵母表面展示的该酶具有转移酶的催化活性。该酶的最适作用温度、最适作用p H分别为45°C和7.5;该酶的催化活性受Zn2+和Cu2+的抑制,受Ca2+激活;该酶重复使用7次后,酶活下降50%。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶和3%蔗糖混合后在40°C条件下孵育30 min后,所产1-蔗果三糖含量最高为20.8 mmol/L。【结论】蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶在解脂亚罗酵母菌中得到成功表达,并展示在其细胞表面上,生化研究表明该重组蛋白具有果糖基转移酶活性,且催化蔗果三糖的生成。表面展示的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶作为一种全细胞催化剂能够用于1-蔗果三糖的制备。     

人γ干扰素转座子质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达

[目的]克隆人γ干扰素(hIFNγ)基因,借助自剪切肽P2A,构建hIFNγ-P2A-RFP(红色荧光蛋白)融合基因转座子表达载体,并在HEK293T细胞中检测其表达水平.[方法]首先,以脂多糖(LPS)激活人外周血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增hIFNγ基因;再通过重叠延伸PCR,获得hIFNγ-P2A-...     

γ-干扰素对膀胱癌T24细胞增殖影响及分子机制研究

探讨γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)对膀胱癌细胞株T24增殖影响及其分子机制.5种不同终浓度(125、250、500、1 000、2 000 U/mL)重组人细胞因子IFN-γ处理人膀胱癌T24细胞,分别在24、48、72 h采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法检测T24增殖抑制率;以作用浓度为500 U/mL IFN-γ作用T24细胞,并设为实验组,未经IFN-γ处理设为对照组.流式细胞仪检测T24细胞周期各阶段变化;RT-PCR检测hepaCAM(hepatocyte cell adhesion molecule)基因表达;Western blot检测p21WAF1蛋白表达.结果表明:IFN-γ抑制T24增殖呈时间剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,实验组经流式细胞仪检测提示细胞G0/G1期比例增高(n=5,P<0.01);RT-PCR结果提示hepaCAM基因表达水平升高(P<0.05);Western blot结果提示p21WAF1蛋白表达水平增高,有统计学意义(P<0.01).新基因hepaCAM在IFN-γ对膀胱癌细胞株T24增殖调节中可能起作用,并可能通过上调p21WAF1蛋白表达阻滞T24细胞于G0/G1期,而抑制T24增殖.     

低聚果糖联合锌制剂对小儿迁延性腹泻的治疗效果及对其肠道菌群结构的影响

目的观察低聚果糖联合锌制剂对小儿迁延性腹泻的治疗效果,并探讨其对肠道菌群结构的影响。方法回顾102例小儿迁延性腹泻的临床资料,均接受常规治疗,其中有48例接受锌制剂治疗,标记为A组;余54例接受低聚果糖联合锌制剂治疗,标记为B组。比较排便次数、大便性状、饮食/母乳喂养恢复正常的时间,治疗效果,治疗前后肠道菌群结构及药物安全性。结果 B组排便次数恢复正常、大便性状恢复正常、饮食/母乳喂养恢复正常时间均短于A组(均P0.05);两组疗效等级差异具有统计学意义(P0.05),B组总有效率明显高于A组(P0.01);治疗后两组肠道微生态Chao1指数、Shannon指数均较治疗前升高(均P0.05),治疗后B组肠道微生态Chao1指数、Shannon指数均高于A组(均P0.05);2组治疗后双歧杆菌属、乳杆菌属、肠杆菌属水平相对丰度均增加,且B组均高于A组,2组治疗后梭菌属、漫游球菌属、乳球菌属、链球菌属、拟杆菌属、希瓦菌属、冷杆菌属、葡萄球菌属水平相对丰度均下降,且B组均低于A组,差异均有统计学意义(均P0.05);两组不良反应发生率接近(P0.05)。结论对小儿迁延性腹泻予以低聚果糖联合锌制剂可促进症状消失,增强疗效,还可调节肠道菌群结构,安全可靠。     

煎煮时间对三果汤化学成分及抗疲劳作用的影响CSCD

探究煎煮时间对三果汤成分转化及抗疲劳作用的影响。采用HPLC法跟踪煎煮过程中三果汤的成分变化,通过偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)筛选出12个差异成分,其中已鉴定的有7个,它们在煎煮过程中的含量变化为:没食子酸、诃子次酸增加,诃子酸、诃黎勒酸、没食子酸乙酯、鞣花酸降低,柯里拉京先增加后降低。抗疲劳评价实验中,小鼠游泳时间及11种疲劳相关指标测定结果显示,煎煮时间越长,三果汤抗疲劳能力越强。差异化合物中与抗疲劳药效相关性最大的为没食子酸和诃子次酸。说明煎煮会促使三果汤大分子鞣质水解成没食子酸和诃子次酸,且这种水解有利于抗疲劳作用的发挥。     

猪T细胞受体γ链基因的克隆及生物信息学分析

目的:克隆猪T细胞受体γ链(pTCR-γ)基因,用以研究猪T细胞受体分子结构与功能。方法与结果:以GenBank上登载的pTCR-γ基因为参考序列,用RT-PCR法从猪外周血淋巴细胞中克隆pTCR-γ基因。序列分析表明,pTCR-γ基因开放读框为1026bp,编码341个氨基酸残基,含有由23个氨基酸残基构成的信号肽序列;与参考序列相比,在核苷酸和推导氨基酸序列上的同源性分别为95.6%和88.8%;系统进化分析发现,该基因与绵羊、恒河猴、人、马、牛的同源性相对较高,与褐鼠、家犬、家鼠、家猫的同源性次之,而与禽类、鱼类的同源性最低;生物信息学结构预测表明猪T细胞受体γ链含2个结构域,其中1个为IG_LIKE1结构域(IGv结构域),由第14～114位共101个氨基酸残基组成;另一个为IG_LIKE2结构域(IGc结构域),由第143～238位共96个氨基酸残基组成。结论:克隆并应用生物信息学技术分析了猪T细胞受体γ链基因序列及编码蛋白的结构特征,为进一步研究γ链的结构与功能奠定了基础。     

干扰素-γ对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

体外培养的人喉癌细胞系Hep-2细胞用10 ng/ml干扰素-γ处理不同时间后,利用细胞计数、细胞凋亡-DNA Ladder分析及半定量RT-PCR方法,探讨干扰素-γ对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响并初步分析其作用分子机制。结果显示,与不处理对照细胞相比,干扰素-γ处理后第2天起Hep-2细胞增殖明显变慢;细胞凋亡分析显示,干扰素-γ处理后Hep-2细胞基因组DNA电泳图谱呈梯状分布;半定量RT-PCR分析显示,干扰素-γ处理诱导Hep-2细胞IFI16基因表达。结果表明,干扰素-γ抑制Hep-2细胞增殖诱导Hep-2细胞凋亡,其机制可能与干扰素-γ诱导IFI16基因表达有关。     

γ-干扰素对哮喘儿童血清炎症因子及MUC5ac指标的影响

本研究以治疗儿童哮喘类病症为研究对象,通过临床实验研究了γ-干扰素在该类疾病的临床疗效及对炎症因子的影响,具体方法是将106例哮喘患儿随机分入测试组与普通治疗组,测试组:将IFN-γ雾化后吸入进行治疗;普通治疗组:采用目前常规的治疗方法,即口服孟鲁司特,比较两组患儿治疗疗效、血清炎症因子的改变及MUC5ac蛋白水平。结果表明,两组治疗方法都能降低哮喘患儿血清炎症因子及MUC5ac水平,治疗2个月后血清炎症因子都趋于正常水平,但MUC5ac蛋白水平却呈现出差异,其中测试组能恢复到正常水平,而普通治疗组MUC5ac蛋白仍比正常值高20%。测试组诊治后治疗率为94.34%,普通治疗组疗效率为81.13%。本研究的初步结果表明,将IFN-γ雾化吸入治疗法具有更好的治疗效果,治疗周期更短。     

乙型肝炎患者血清XCL1、IFN-γ与T细胞亚群的关系及临床意义

目的:探讨XCL1、γ干扰素的浓度变化与乙型肝炎慢性化的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清XCL1、IFN-γ的浓度;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群;时间分辨荧光分析仪检测乙型肝炎抗原/抗体半定量指标;全自动生化仪检测肝功能。结果:(1)随着肝脏炎症程度的加重,血清中XCL1的含量逐渐增加。HBeAg+组与HBeAg-组比较,HBeAg+组血清XCL1浓度显著高于HBeAg-组(P<0.05);HBeAg-组血清IFN-γ浓度显著高于HBeAg+组(P<0.05)。(2)血清XCL1浓度与CD4+T细胞含量呈负相关(r=-0.336,P=0.017),IFN-γ浓度与CD8+T细胞含量呈正相关(r=0.319,P=0.024)。结论:γ干扰素通过影响XCL1的表达促进乙型肝炎慢性化的形成与发展,XCL1参与了乙型肝炎慢性化进程。     

小反刍兽疫病毒Nigeria75/1疫苗毒及其N蛋白对山羊PBMCs免疫效应的影响

小反刍兽疫(PPR)是羊、骆驼等小反刍动物的一种急性、烈性、接触性A类传染病,发病率和致死率极高.目前,PPR在全球仍呈现区域性流行和多地散发势态.为探讨PPRV及N蛋白体外诱导山羊外周血单个核细胞(PBMCs)在不同时间对PBMCs免疫应答效应的影响.本研究将PPRVNigeria75/1疫苗毒(1 MOI)、重组N蛋白(10μg/mL)和RPMI 1640(阴性对照)体外刺激PBMCs 48h、72h、96h.采用CCK-8法检测PBMCs细胞增殖情况;qRT-PCR及ELISA检测炎症因子包括IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-a和IFN-γ的mRNA表达水平及分泌情况;流式细胞术检测T细胞CD4+和CD8+的表达、及单核来源树突状细胞(DCs)表面分子CD40、CD86、CD80的表达、以及检测PPRV感染PBMCs引起的细胞凋亡.研究发现:与对照组相比,PPRV能够抑制PBMCs的体外增殖,显著促进炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达(P＜0.05).并且PPRV感染PBMCs产生细胞凋亡,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞表达.另外PPRV体外刺激DCs,CD40、CD86、CD80的表达显著升高(P＜0.05),提示PPRV具有刺激DCs细胞成熟与分化的功能.进一步研究发现PPRV N蛋白体外刺激PBMCs能引起与PPRV作用相同的免疫效应.本研究表明PPRV Nigeria75/1疫苗毒体外感染PBMCs主要引起炎症反应与细胞凋亡、促进单核来源DCs成熟与分化,并且N蛋白参与PPRV引起的各项免疫功能.     

γ-分泌酶抑制剂对LPS诱导的小胶质细胞分泌炎症因子的调控及机制

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种进行性的脑内神经元退变性疾病,其中大多数与编码早老素的基因突变所导致的γ-分泌酶功能异常,小胶质细胞是阿尔茨海默病炎症反应中最主要的炎性细胞,实验以小鼠小胶质细胞系BV-2为研究对象,探究γ-分泌酶抑制后对细菌内毒素脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的炎症因子分泌的影响与分子机制。     

匹多莫德联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿IL-4，IFN-γ，免疫球蛋白及T细胞亚群的影响

目的:探讨匹多莫德联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿白细胞介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白及T细胞亚群的影响。方法:选取2015年6月至2016年6月我院收治的支气管哮喘患儿92例作为研究对象,随机分为观察组和对照组,对照组吸入布地奈德混悬液治疗,观察组在对照组的基础上联用匹多莫德口服液,检测并比较两组患儿治疗前后血清IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、IgM以及CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)的变化。结果:治疗前,观察组与对照组的IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、Ig M及CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)均无统计学差异(P0.05);与治疗前相比,观察组治疗后IL-4水平显著降低,IFN-γ、IgA、IgG、IgM水平、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平均显著升高,差异均有统计学(P0.05);而对照组治疗后的IFN-γ、IgA、IgG、IgM、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平与治疗前比较差异均无统计学意义(P0.05),仅IL-4水平显著降低(P0.05)。治疗后,观察组的IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、IgM、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:与单独使用布地奈德相比,匹多莫德联合布地奈德可更加显著提高支气管哮喘患儿的调节免疫功能。     

年龄、饮食及PPARγ对内脏脂肪组织调节性T细胞转录组的影响北大核心CSCD

炎症是肥胖和2型糖尿病之间的关键联系,过量的能量摄入可诱导内脏脂肪组织（visceral adipose tissue,VAT）的慢性炎症反应,最终引起血脂异常、胰岛素抵抗等代谢异常,甚至发展为2型糖尿病等代谢性疾病。前期研究发现,正常体重小鼠VAT 中存在一类调节性 T 细胞（regulatory T cell,Treg cell）,参与调控局部及系统性的炎症和代谢,其转录组与淋巴组织来源Treg细胞截然不同。然而,在不同生理或病理条件下,VAT Treg细胞的变化及调控机制尚不清楚。     

基于单细胞ATAC测序技术对18-三体综合征染色质开放性区域转录因子的分析

18-三体综合征是常见的常染色体非整倍体疾病之一,长期以来人们对18-三体综合征疾病的临床表型(如智力障碍、心脏、肾脏异常等)发生及发展相关的基因调控知之甚少。为探索影响该疾病表型的调控因子,本研究利用单细胞ATAC测序技术,对18-三体综合征和对照组的脐带血单个核细胞的开放性染色质区域的转录因子进行分析。捕获11,611个细胞构建的单细胞文库鉴定得到7种主要免疫细胞群,细胞数量统计的结果提示18-三体综合征的免疫系统异常。通过分析开放性染色质区域,筛选得到14个转录因子(P<0.05,|FC|>1.2)。采用实时荧光定量PCR验证其中4个转录因子(TEAD1、TEAD2、TEAD4、Twist2)的相对表达量的结果符合预期。上述研究结果表明这4个转录因子可能与18-三体综合征患者心脏和骨骼发育的异常相关,为18-三体综合征表型的发生及发展的机制研究提供候选分子。