1983年报刊目录索引选(动物部分)(四)

份稚动物学内蒙古化德县二登图和哈尔鄂博新第三纪哺乳动物群 凡h.b。二e,v,邱铸鼎:to,eh,G中国科学B辑 1 983,(1):75一‘赤魔染色体复制的研究段幸生等中国科学B辑 1953,(3):230一235大鼠快、慢肌纤维肌球蛋白的特征章生良等动物 学报l,83,z,(2):105。大鼠皋丸间质细胞的小管结构及其功能的初步研究 杨勇正动物学报19832,(2):112几种哺乳动物精子膜伴刀豆球蛋白A受体的观察王 一飞等动物学报19日3,29(2):192云南灵长类的分类和分布。李致祥等动物学研究 1953,一(2):川一120。金丝狠(只HINOPITHEcUs)胃的研究。彭燕章等 动物学研究19.…     

实验5 DNA片段的亚克隆

DNA片段的亚克隆通常包括连接、转化、筛选、鉴定等步骤。 一、载体的选择 根据待亚克隆的DNA片段的两端顺序、用途(如准备作DNA顺序分析、大量扩增或作酶切图谱分析等)和载体DNA分子带有的限制酶位置,选定合适的载体。     

狗凝血Ⅸ因子cDNA的克隆及其离体表达研究

根据cFⅨcDNA(canineFⅨ ,cFⅨ )顺序设计引物 ,采用RT PCR技术 ,从狗肝细胞中提取mRNA ,逆转录成cFⅨcDNA ,克隆到pGEM T质粒载体上 ,经DNA顺序分析 ,挑选克隆 ,拼接并测序鉴定 ,得到DNA顺序完全正确且含有cFⅨ完整编码区的cDNA ,进一步构建成以G1Na为框架的反转录病毒载体G1NaCcⅨ (hCMV启动子控制cFⅨ转录 )和G1NaMBcⅨ (MCK增强子和β actin启动子共同控制cFⅨ转录 ) ,并用于反转录病毒介导的基因转移 .狗原代皮肤成纤维细胞实验结果显示 ,cFⅨ能够在狗皮肤成纤维细胞中表达 ,表达水平分别为G1NaCcⅨ :173ng/ 10 6 细胞·2 4h ;G1NaMBcⅨ :2 11ng/ 10 6 细胞·2 4h .此结果为血友病B狗基因治疗动物试验的开展奠定了基础 .     

弓形虫特异DNA片段顺序分析及体外基因扩增

从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的弓形虫株DNA、人工感染弓形虫的三头幼猪白细胞和胸腺DNA经过PCR扩增,均出现特异的扩增条带;而正常人、正常幼猪外围血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、溶组织内阿米巴和人巨细胞病毒DNA均不出现特异的扩增条带。对扩增产物进行了Southern印迹和限制性内切酶图谱分析,证明该PCR产物是弓形虫DNA特异的顺序。该方法可测出少至1pg的弓形虫DNA或1个弓形虫体的裂解液。本文分析的DNA顺序和设计合成的引物顺序数据,经电脑DNA数据库检索,证明无相同的顺序。本方法并具有简便、快速等优点,便于推广应用。     

人基因组转录图研究技术

人类基因组研究的主要任务是二个:第一是读出人基因组全部ATCG“语言”,即全基因组DNA核苷酸顺序分析;第二是读懂人基因组全部ATCG“语言”,即全部基因的DNA顺序及功能研究。无疑第二项任务有赖于第一项任务完成的基础。在进行第一项研究任务时,由于人基因组十分巨大和复杂,不可能直接进行顺序分析,所以通常总要先进行染色体DNA的大片段克隆,并借助于某些物理标志把克隆在染色体上排序,这样就形成了某种物理图谱。现在已在进行的人基因组的图谱分析有以下几种:遗传连锁图(Linkage Map),分辨率在     

cosmid克隆筛选的体内同源重组法——一个含有小鼠t复合体连锁DNA顺序的cosmid克隆的分离

一个从cosmid分子克隆库中筛选特别基因顺序的遗传学方法——体内同源重组(invlvo homologous recombination)法。即使探针DNA与分子克隆库中带有与探针同源顺序的克隆发生体内重组,然后以遗传学方法进行筛选。cosmid分子克隆库构建在rec宿主细胞内,经体内包装(in vivo Packaging)成λ噬菌体颗粒,把该噬菌体颗粒转入带有探针DNA的rec~+细胞内,探针是已被克隆在与cosmid载体没有同源顺序的质粒(如PUC8或PUC9)内的。经过一段时间(1—3小时),待重组发生后,把cosmid进行体内包装。此时探针DNA连同质粒已整合入cosmid基因组内,因此它带有原为两个载体所分别带有的双重抗性——Amp~r(氨苄青霉素,PUC8或PUC9)和Kan~r(卡那霉素,cosmid)。这种双重抗性菌落可在含有这2种抗菌素的培养平皿上选出,该重组cosmid借助于λ切除酶的作用将已被整合的探针质粒重新切除,再经体内包装后,该cosmid被还原并纯化,然后可用一含有Xgal的培皿识别和选出。本文用此法以有关DNA探针从cosmid分子克隆库中分离得到含有与小鼠t复合体连锁的基因组顺序的克隆,并对该克隆作了物理图谱分析。     

重组DNA技术在神经科学中的应用

重组DNA技术是生物工程的主要技术,它在神经科学研究中发挥着重要的作用,形成为一个新的前沿——分子遗传神经科学。重组DNA技术主要包括四方面:(1)用限制性内切酶将DNA切割成特定的片段,(2)用核酸杂交钓出特定的DNA或RNA顺序,(3)DNA克隆和扩增,(4)DNA顺序测定,再根据三联密码推断蛋白质的氨基酸排列顺序,其速度远超过经典的蛋白质化学方法。换言之,重组DNA技术可以将特定的基因从基因库中分离开来,进     

水稻cDNA文库的构建以及100种随机挑取克隆部分结构的分析

以水稻 (Oryza sativa)“广陆矮 4号”黄化苗为材料 ,用 λZAP 为载体构建了 c DNA文库。对随机挑取的 1 0 0个 c DNA进行部分顺序测定后 ,与水稻和其它植物已知的基因结构作同源性比较分析 ,表明1 3%的 c DNA克隆可以确定功能 ,1 2 %的 c DNA克隆与其它植物中未知功能的基因片段有同源性 ,其余75%的克隆则表现出极少相似性或无任何同源性 ,从中可能发现新的基因。结果表明这个 c DNA文库适宜于进行大量顺序分析。由此将会获得更多功能性基因的信息。     

马铃薯GBSS基因的克隆与DNA顺序分析

构建了中国马铃薯 (Solanum tuberosum)栽培品种“东农 30 3”基因文库 ,用 PCR扩增得到淀粉粒结合淀粉合成酶基因 (GBSS,granule- bound starch synthase)的部分顺序 (GB3) ,以此为探针从基因文库中筛选到 2 0个阳性克隆。测定其中 1个克隆 (GBSS1 7- 1 )的 DNA顺序共 542 8bp;它包括 GBSS基因 5′侧翼区 1 82 3 bp、结构基因 2 964 bp和 3′侧翼区 641 bp。该顺序与已报道的 GBSS顺序同源性很高 ,但 5′侧翼区最上游 730 bp尚未见文献报道 ;并存在较多的茎环结构。     

臭鼩高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与树鼩TSr(Bgl Ⅱ)-1顺序的比较

将臭鼩DAN经过Bam H Ⅰ酶切得到的高重复顺序DNA最小片段重组到质粒pAT153上,转化后得到了含有臭鼩BMS(Bam H Ⅰ)-1高重复顺序DNA片段的克隆。再把此片段重组到M_(13)mp19噬菌体DNA上。用末端终止法测得全部苷酸顺序为495个碱基对。对臭鼬BMS(Bam H Ⅰ)-1片段的结构特点进行了分析,并和树鼩TSr(BglⅡ)-1高重复顺序DNA进行了比较。为确定树鼩在分类学上的地位,提供了一定的分子遗传学证据。     

懒猴高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与类α-DNA顺序的比较

为确知懒猴高重复顺序与灵长类类α顺序间的相互关系,我们将懒猴DNA经EcoRI酶切所得到的高重复顺序DNA的最小片段重组到质粒pUC~(12)上,经转化、筛选、鉴定得到含有懒猴高重复顺序片段的克隆,命名为pLS(EcoR Ⅰ)-1,测定其全部核苷酸顺序为641bp,发现该顺序有与类α顺序的相似性,但变异性较大,我们对此进行了讨论。     

编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆

用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。     

第23届国际生物学奥林匹克竞赛试题实验1·分子生物学和细胞生物学

<正>本次实验需要完成以下任务:利用限制性核酸内切酶切割DNA片段,并进行基因作图。A部分确定是否已将人类DNA插入到了1个克隆质粒中(80分)。B部分确定DNA片段插入的方向(20分)。材料、仪器设备     

疫苗

综述了重组DNA技术在疫苗的研究和发展上的应用。专题包括:(A)编码抗原决定簇的基因克隆,(i)抗原鉴定,(ii)抗原墓因的克隆,(iii)克隆DNA分子的特性,(iv)克隆DNA体外操作,和(V)衍生自抗原的合成肤的生产;(B)抗病原     

征稿简则

《中国科学C辑:生命科学》报道生物学、农学、医学领域的基础研究与应用研究方面有重要意义的成果．由中国科学院与国家自然科学基金委员会主办,中国科学杂志社出版．网络版双月1日出版,印刷版双月20日出版．《中国科学C辑:生命科学》与Science in China Series C:Life Sciences(ISSN 1006-9305)是两个相对独立的刊物,后者为SCI所收录．     

DNA顺序有序测定中特定亚克隆的 简便检出

在按非随机法测定策略由Dnase I处理获得大量亚克隆后,随机从中选出一些亚克隆测定其DNA顺序,就可以迅速获得几组彼此不相联的亚克隆组,以这些亚克隆组首尾的克隆作电泳对照,与混合克隆同时电泳,就能方便地检出填平克隆组间空缺的特定亚克隆。用此方法,我们迅速完成了对含有psr基因的4064bp DNA片段的DNA顺序测定。     

水稻(Oryza sativa L.)重复DNA顺序的克隆及序列分析——重复顺序存在意义的探讨

以大肠杆菌启动子选择质粒pKK175-6、pKK232-8为载体,将通过复性动力学方法获得的水稻重复DNA顺序片段进行克隆。阳性克隆菌株表现出对四环素或氯霉素不同程度的抗性。DNA序列分析表明．克隆到的某些水稻重复DNA顺序具有丰富的基因表达调节元件的同源序列。     

水稻(Oryza sativa L.)重复DNA顺序的克隆及序列分析——重复顺序存在意义的探讨

以大肠杆菌启动子选择质粒pKK175-6、pKK232-8为载体,将通过复性动力学方法获得的水稻重复DNA顺序片段进行克隆。阳性克隆菌株表现出对四环素或氯霉素不同程度的抗性。DNA序列分析表明,克隆到的某些水稻重复DNA顺序具有丰富的基因表达调节元件的同源序列。     

PCR筛选BAC文库和直接BAC末端测序方法的建立

建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法.用PCR技术进行大麦BAC DNA 文库(含816个平板,每个平板含384个克隆)的筛选分4步进行.在实验中,建立了两个水平的BAC DNA池(一级池和二级池).一个二级池由一个平板(含有384个克隆)的DNA 组成,一个一级池由连续10个稀释100倍的二级池的DNA混合而成(如1～10,11～20等),共82个一级池.BAC DNA 文库筛选的第一步是对82个一级池的筛选.得到阳性一级池后(如2号一级池),对其所含的10个二级池(从11～20)进行第二步筛选.得到阳性二级池后,培养相应的阳性平板的所有克隆(384个),从头开始(左上侧),每相邻的4个克隆为一组,在96孔板上(4 X 96=384) 进行第三轮PCR反应;之后对筛选结果为阳性的4个克隆分别进行菌落 PCR(第四轮)得到单一阳性克隆.根据BAC DNA Hind III 酶切指纹图谱,对同一引物筛选的BACs进行重叠群作图(Contig).对代表contig 的两端的BAC DNA直接进行末端测序并对测序结果Blast,以检测其在大麦中是否属于单拷贝序列.根据测序和Blast结果设计引物,用中国春附加系(附加大麦染色体)对来自BAC克隆的引物进行染色体定位并用分离群体进行遗传学作图,以确定是否可以用作下一步的染色体步行.     

用聚合酶链反应方法诊断弓形虫病

弓形虫病是一种人畜共患的传染病。目前对弓形虫病的实验室诊断,常用血清学和动物接种分离虫体法,但不够特异和灵敏,且不能短时有结果。可见,建立一种特异、灵敏和快速检测弓形虫基因组的方法,对弓形虫病的诊治是十分有意义的。作者从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆(1.1kb),对克隆的片段用M13克隆和末端终止测序体系对部分片段进行了顺序分析。根据所得DNA顺序的数据,设计并合成若干长度为19～20NT的特异的寡核苷酸引物对,并建立体外扩增弓形