火炬松成熟合子胚离体培养过程中诱导不定芽的影响因素研究(英文)

火炬松（ＰｉｎｕｓｔａｅｄＬ）界南方松中最重要的针叶树种之一,在环境保护,园林绿化和林业生产中有重要应用价值。有关火炬松未成熟胚的体细胞胚胎发生和器官发生的研究报道不多,其成熟合子胚的愈伤组织器官发生则未见报道。本文以取自湖南省邵阳市林场的火炬松成熟种胚为外植体,在诱导其愈伤组织器官发生的基础上,系统地研究了ＢＡ浓度,基本培养基（ＴＥ）浓度和不同碳源等对愈伤组织上不定芽的发生和发育的影响,优化了火炬松离体再生的培养条件,为火炬松的无性繁殖技术应用于实际生产奠定了基础。研究结果表明：不同的浓度条件下,４ｍｇ／ＬＢＡ培养基上的不定芽诱导频率和每个胚上的芽平均数最高,分别是７６．３％和３．４。火炬松器官发生愈伤组织（Ｆｉｇ．１）上的不定芽形成于愈伤组织表面（Ｆｉｇ．２）。不定芽的发生常不同步（Ｆｉｇ．３）。不定芽在低浓度ＢＡ（１～２ｍｇ／Ｌ）条件下发育较好（Ｆｉｇ．４）,在高浓度ＢＡ（８～１６ｍｇ／Ｌ）条件下发育减慢（Ｆｉｇ．５）,在１ｍｇ／ＬＢＡ条件下伸长生长较快（Ｆｉｇ．６）;不同浓度基本培养基的实验结果表明,当基本培养基浓度为１．２５ＴＥ时,不定芽诱导频率（７３．５％）和每个胚上的芽平均数（３．９）最高。当     

影响火炬松胚性悬浮细胞原生质体的胚胎发生的因素(英文)

火炬松（ＰｉｎｕｓｔａｅｄａＬ．）是我国亚热带和部分热带地区最重要的绿化和造林树种。它的生长周期长,杂合程度高,难以用常规的杂交方法进行品种改良。建立火炬松的原生质体胚胎发生体系,有可能、进而以遗传转化为基础进行火炬松等针叶树的品种改良。本研究以湖南省绍阳市的火炬松成熟种子为材料,建立胚性细胞悬浮系。将其培养至对数生长期,用１％ＲＳ、２．５％Ｒ１０和０．２％Ｙ２３的酶混和液分离原生质体,活力达９０％以上（Ｆｉｇ．１）。纯化原生质体,在再生培养基上培养２天后,细胞壁再生（Ｆｉｇ．２）;;６天后,６５％的原生质体第１次分裂（Ｆｉｇ．３）;培养３周后,形成小细胞团（Ｆｉｇ．４）;６周后,形成大细胞团（Ｆｉｇ．５）;８周后,形成胚性胚柄细胞团（ＥＳＭ）（Ｆｉｇ．６）;１０周后,形成早期体细胞胚（ＥＳＥ）（Ｆｉｇ．７）;１２周后,形成后期体细胞胚（ＬＳＥ）（Ｆｉｇ．８）火炬松原生质体胚形成过程中的关键结构是ＥＳＭ,ＥＳＥ和ＬＳＥ。它们形成的最佳基本培养基是１．２５ＬＰ培养基。再生培养基中高浓度的ＢＡ和低浓度的肌醇有利于ＥＳＭ的形成,但不利于ＥＳＥ和ＬＳＥ的形成。反之,低浓度的ＢＡ和高浓度的肌醇不利于ＥＳＭ的形成,     

影响火炬松胚性悬浮细胞原生质体的胚胎发生的因素

火炬松（Pinus taeda L.）是我国亚热带和部分地区最重要的绿化和造林树种。它的生长周期长,杂合程度高,难以用常规的杂文进行品种改良。建立火世松的原生质抗体胚胎发生体系,有可能、进而以遗传转化为基础进行火炬松等针叶树的品种改良。本研究以湖南省绍阳市的火炬松成熟种子为材料,建立胚性细胞悬浮系。将其培养至对数生长期,用1％RS、2．5％和0．2％Y－23的酶混各液分离原生质体,活力达90％以上（Fig.1)。纯化原生质体,在再生培养基上培养2天后,细胞壁再生（Fig.2);6天后,（65％的原生质体第1次分裂（Fig.3);培养3周后,形成小细胞团（Fig.4);6周后,形成大细胞团（Fig.5);8周后,形成胚性胚柄细胞团（ESM）（Fig.6);10周后,形成早期体细胞胚（ESE）（Fig.7);12周后,形成后期体细胞胚（LSE）（Fig.8)。火炬松原生质体胚形成过程中的关键结构是ESM,ESE和LSE。它们形成的最佳基本培养基是1．25LP培养基。再生培养基中高浓度的BA和低浓度的肌醇有利于ESM的形成,但不利于ESE和LSE厮。再生培养基中高浓度的BA和低浓度的肌醇有利于ESM的形成。但不利于ESF和LSE的形成;反之,低的BA和高的浓度的肌醇不利于ESM的形成,但有利于ESE和LSE的形成。因此,用不同的再生培养基对火炬松原生质体培养物所形成的ESM,ESE和LSE进行分步培养可能更有利于火炬松原生质体胚胎发生效率的提高。     

防风组织培养中畸形胚状体的发生和控制

采用组织培养和石蜡切片法,分析多种因素对防风畸形胚状体发生和发育过程的影响及控制。结果表明,诱导正常体细胞胚高频发生的培养基组合是：启动胚性愈伤组织的培养基是MS 0．5mg／L 2．4-D,蔗糖浓度3％;分化培养基是MS 1mg／L 6-BA 0．2mg／L NAA 0．5mg／L ABA,蔗糖浓度4％～5％;成熟培养基是MS培养基,蔗糖浓度3％。结论：一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的分化和发育过程中起协同作用;蔗糖浓度、ABA、接种方法以及适宜的培养条件和培养容器等均可有效降低畸形胚状体的发生率。     

雷竹体细胞胚诱导的初步研究

以雷竹（Phyllostachys violascens）种胚为外植体, 脱分化产生愈伤组织, 愈伤组织诱导产生体细胞胚, 并发育成苗。实验结果表明： 愈伤组织诱导体细胞胚基本培养基为MS无机盐＋20 g·L^-1葡萄糖（glucose）＋10 mg·L^-1腺嘌呤（adenine sulfate）＋ 0.5 g·L^-1麦芽抽提物（malt extract）＋0.1 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1氨氯吡啶酸（picloram）＋10 g·L^-1type A agar; 将基本培养基中的氨氯吡啶酸浓度升高至0.1 mg·L^-1即为愈伤组织诱导的最佳培养基, 早期子叶胚是愈伤组织诱导的最佳胚体; 愈伤组织在添加0.001 mg·L^-1TDZ和0.3 mg·L^-1ABA的愈伤组织最佳培养基上光照培养4周后, 去除其中的ABA, 并添加0.1 mg·L^-1NAA继续培养1个月, 体细胞胚数量最多可达87.43%, 该培养基是体细胞胚发生的最佳培养基; 将上述体细胞胚发生培养基中的6-BA浓度升高至1 mg·L^-1, 继代培养2个月后有小苗出现。组织学观察显示, 体细胞胚细胞核大、质浓且多数呈球形原胚状。     

火炬松成熟合子胚离体培养过程中诱导不定芽的影响因素研究

火世松（Pinus taed L）界南方松中最重要的针叶树种之一,在环境保护,园林绿化和林业生产中有重要应用价值。有关火炬松未成熟胚的体细胞胚胎发生和器官发生的研究报道不多,其成熟合子胚的愈伤组织器官发生未见报道。本文以取自湖南省邵阳市林场的火炬松成熟种胚为外植体,在诱导其愈伤组织器官发生的基础上,系统地研究了BA浓度,基本培养基（TE）浓度和不同碳源等对愈伤组织上不定芽的发生和发育的影响,优化了火炬松离体再生的培养条件,为火炬松的无性繁殖技术应用于实验生产奠定了基础。研究结果表明：不同的浓度条件下,4mg/LBA培养基上的不定芽诱导频率和每个胚上的芽平均数最高,分别是76．3％和3．4。火炬松器官发生愈伤组织（Fig.1)上的不定芽形成于愈伤组织表面（Fig.2)。不定芽的发生常不同步（Fig.3)。不定芽在低浓度BA(1-2mg/L）条件下发育较好(Fig.4),在高浓度BA（8－16mg/L）条件下发育减慢（Fig.5),在1mg/LBA条件下伸长生长较快（Fig.6);不同浓度基本培养基的实验结果表明,当基本培养基浓度为1．25TE时,不定芽诱导频率（73．5％）;不同浓度基本培养基的实验结果表明。池基本培养基浓度为0．5或0．75TE时,不定芽基部易形成愈伤组织（Fig.7)。在1．5TE培养基上,不定芽瘦弱且发育缓慢（Fig.8);不同碳源的实验结果表明,以2％的葡萄为碳源时,不定芽的诱导频率和每个胚上的芽平均数均最高,分别是83．7％和5．8。由此可见,4mg/LBA,1.25TE基本培养基和2％葡萄糖可能是构成火炬松成熟合子胚离体高效无性快速繁殖体系的决定性和关键因素。     

2,4-D、BA对人参体细胞胚胎发生过程的影响研究

以人参芽胞、二年生人参根、实生苗（茎、叶）为外植体研究了体细胞胚的发生条件,并对其发生过程中可溶性蛋白、相关酶活性及内源激素的变化等进行了研究。结果表明,诱导愈伤组织的培养基为MS＋2,4-D4．0mg／L＋BA0．2mg／L;在MS＋2,4-D1．0mg／L＋KT0．2mg／L培养基上继代培养,可获得胚性愈伤组织;在无2,4-D的培养基上可诱导出胚状体。将胚状体转入无任何激素的MS培养基上继续培养,之后转入1／2MS培养基上获得再生植株。在体细胞胚胎发生过程中,可溶性多糖和可溶性淀粉含量在早期胚时较低,可溶性蛋白含量、POD及PPO活性在早期胚时最高;IAA在早期胚时期含量最高,在成熟胚时期ABA含量最高,而ABA／IAA比值在成熟胚时较高,利于体细胞胚的发育成熟。     

火炬松细胞悬浮培养体细胞胚胎发生的研究

用火炬松成熟合子胚诱导产生的胚性愈伤组织建立了胚性细胞悬浮系。研究了细胞密度,继代时间和ＡＢＡ浓度等对悬浮条件下胚性柄细胞团及体细胞胚形成的影响。结果表明：当细胞密度为６×１０＾３个／ｍｌ,继代时间为２个月,ＡＢＡ浓度为５ｍｇ／Ｌ时,最有利于ＥＳＭ及ＳＥ发生。在悬浮培养条件下,还观察到裂生胚及子叶原基的分化。     

应用311-A最优回归设计研究ABA、PEG4000及AgNO3对落叶松体细胞胚发生数量的影响

采用三因素多项式回归311-A最优设计方法对影响落叶松体细胞胚发生数量的ABA、PEG4000和AgNO₃的用量进行了研究,建立了华北落叶松正常体细胞胚发生数量与ABA、PEG4000和AgNO₃的数学模型,分析了落叶松体细胞胚发生数量试验因子的主效应和互作效应,优选了落叶松体细胞胚发生数量最佳结果的最佳技术组合方案为ABA18.9138mg/L,PEG4000.888007g/L与AgNO310.7513 mg/L时,最佳体细胞胚数量应为107.5278个子叶胚/g.callus。实验结果表明：该方法是针叶树体细胞胚胎发生过程中,主要激素种类与浓度配比、处理组合,科学、合理的培养基优化途径。     

黄瓜胚性细胞悬浮培养及其原生质体的植株再生

黄瓜子叶原生质体来源的胚性愈伤组织,在液体培养中形成胚性悬浮细胞系,已继代两年,仍保持胚胎发生能力,不同的ABA和蔗糖浓度对胚状体的生长发育和同步化有明显影响。1mg/l的ABA和7－9％的蔗糖能显著地减少培养物的愈伤化,并同步地控制胚状体处于球形或球形后期,低浓度的蔗糖（1％）有利于胚状体的早期萌发,继代3－5天的胚性是浮细胞团酶解后,获得大量有活力的原生质体,原生质体在DPDK,液滴或浅层培养,或褐藻酸钠包埋培养中活跃分裂,形成细胞团和球形胚,转至固体培养基上或将包埋培养物直接转入液体振荡培养,胚状体可不断增殖,胚状体在大量元素减半,不加外源激素的MS培养基上发育成小植株。