核糖体 RNA 的生物功能、自我剪接与自我复制

核糖体RNA在肽链合成的起始、延伸和终止等整个过程中都有重要的功能。RNA N-糖苷酶是一类核糖体失活蛋白;它只水解rRNA特定位置上的一个腺苷酸的糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白是一种核糖体失活蛋白。目前已知最小的ribozyme是人工合成的13寡聚核糖核苷酸。利用四膜虫ribozyme转磷酸酯的逆反应合成了一个42寡聚核糖核苷酸。这说明RNA可以催化RNA的合成。     

几种核糖体失活蛋白对超螺旋环状DNA的切割与解旋作用

天花粉蛋白(trichosanthin)是一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP),它失活核糖体的机制属于RNA N-糖苷酶型。最近Li等发现天花粉蛋白可作用于超螺旋环状DNA,将其切割与解旋成缺口及线状分子,但并不作用于线状DNA。为了     

天花粉蛋白引起敏感细胞膜上G蛋白激活的初步研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是一种单链核糖体失活蛋白,具引产、抗肿瘤、抗HIV等多种生物学功能。天花粉蛋白专一性杀伤敏感细胞的机制一直未被研究清楚。本文首次以生物分子相互作用分析(BIA)证明在天花粉蛋白敏感的细胞膜上存在着能与天花粉蛋白专一结合的组分。我们进一步利用[~(35)S]GTPγS结合实验发现天花粉蛋白能够激活敏感细胞膜上的G蛋白,而对不敏感细胞没有相应的G蛋白激活。这些结果表明了在敏感细胞膜上天花粉蛋白特异受体的存在。     

核仁和核仁蛋白

核仁是位于细胞核内的非膜结构。电子显微镜下的核仁从形态上可以分为三层结构包括纤维中心区(FC)、高密度纤维区(DFC)和颗粒区(GC)。核仁内的蛋白有核糖体蛋白和非核糖体蛋白两种。利用蛋白质组学方法已经鉴定了350多种核仁蛋白,其中包括80多种核糖体蛋白。核仁是核糖体合成的场所,核仁中的非核糖体蛋白对核糖体的生物合成起关键调控作用。核仁不仅是细胞内通讯和核糖体：RNA加工的中心,而且在细胞周期、细胞增殖和衰老中起重要调控作用;核仁也是tRNA、mRNA和其它类型小分子RNA加工的场所。因此核仁是一个多功能的细胞生命活动中心。     

“核糖体失活蛋白抗艾滋病病毒活性及构效关系的研究”获2003年度云南省科学技术奖（自然科学类）二等奖

中国科学院昆明动物研究所郑永唐研究员主持的“核糖体失活蛋白抗艾滋病病毒活性及构效关系的研究”,利用分子生物学和病毒学等手段,系统研究了核糖体失活蛋白(RIP)抗人艾滋病病毒(HIV)活性,并对天花粉蛋白(TCS抗HIV活性的作用机制、构效关系进行了深入的研究。     

天花粉蛋白突变基因TCSA-S在大肠杆菌BL21中的表达

天花粉蛋白是具有N-糖苷酶活性的一种植物Ⅰ型核糖体失活蛋白,本研究用PCR方法获得了天花粉蛋白的突变基因TCSA-S,构建了表达载体pET-30a( )-TCSA-S,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在30℃条件下诱导表达。经SDS-PAGE电泳检测,重组的突变体基因TCSA-S表达产物主要存在于包含体中。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶附着在核糖体上。经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用BSA,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的比较观察,也证明滋养层细胞和绒癌细胞对天花粉蛋白的专一亲和性。更有趣的是:天花粉蛋白肝癌单抗胶体金结合物进入绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同;先以旰癌单抗处理也不影响天花粉蛋白肝癌单抗结合物进入绒癌细胞。然而,对于旰癌细胞,天花粉蛋白肝癌单抗胶体金颗粒则专一地结合在细胞的微绒毛表面,这种结合因先以肝癌单抗处理而明显地被竞争抑制。这些实验结果相互印证地提供天花粉蛋白对滋养层细胞和绒癌细胞高度专一的亲和性,并证明天花粉蛋白对靶细胞的原初损伤部位是核糖体。进一步探讨天花粉蛋白在靶细胞表面结合位点的化学性质以及这种蛋白在靶细胞内的转运机制将是重要的问题。     

天花粉蛋白诱发白血病细胞K562凋亡的研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS),是一种从栝楼块根内提取的核糖体失活蛋白,具有流产、抗肿瘤和抗HIV等多种生物活性。本文利用FACS检测到天花粉蛋白可使K562白血病细胞产生明显的凋亡小峰、DNA区带电泳成典型的“梯状”条带,电镜检测可观察到明显的细胞凋亡形态。这些结果表明天花粉蛋白可以诱发K562白血病细胞产生凋亡。     

天花粉蛋白及其与抗体的复合物对蛋白质合成的抑制作用(简报)(英文)

天花粉蛋白在无细胞系统中显示强烈的抑制蛋白质生物合成的能力,其活性与经巯基试剂还原开裂的蓖麻毒蛋白相当。天花粉蛋白对BEL-7402人肝癌细胞的毒性甚低,但当它通过二硫键与抗肝癌单抗Hepama-1偶联后,其毒性增强五十倍。张学军和王家槐不久前发现天花粉蛋白与蓖麻毒蛋白A链的一级结构有很大的相似性~[5]。我们的实验结果与他们的发现互相印证。天花粉蛋白与抗体偶联后,可能通过抗体与细胞表面抗原的结合而内化,从而增强了它的细胞毒性。考虑到天花粉蛋白与其他植物单链致核糖体失活蛋白(RIPs)有不少特性十分相似,我们推断天花粉蛋白是RIP家族中的一员。天花粉蛋白与抗体偶联过程中,双功能试剂SPDP的修饰使天花粉蛋白的活性降低一个数量级,似乎意味着天花粉蛋白上的某些氨基可能对其活性至关紧要。发展新的偶联方法的工作正在进行。如能在双功能试剂修饰后保留其大部分活性,天花粉蛋白作为免疫毒素的“弹头”药物可能颇具潜力。     

核糖体RNA拓扑学与RNA N－糖苷酶研究进展（下）

28S rRNA的α-sarcin结构域直接参与核糖体催化的蛋白质合成反应,已经证明天花粉蛋白是一种RNA N-糖苷酶,一种测定RNA N-糖苷酶活力的新方法也已初步建立.天花粉蛋白能使超螺旋DNA解旋并断裂为缺口环状和线状DNA.并已发现其它RNA N-糖苷酶也具有这一核酸内切活性.天花粉蛋白对28S rRNA,超螺旋DNA和艾滋病毒(HIV-1)RNA三种底物可能有相同的分子作用机制.     

天花粉蛋白的作用机制—RNA N—糖苷酶型

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类广泛分布于植物界的能抑制真核细胞核糖体功能的毒蛋白。其作用的分子机制有两类:(1)RNA水解酶型,如帚曲霉素(α-sarcin),专一水解28SrRNA第4325—4326位之间的磷酸二酯键;(2)RNA N-糖苷酶(RNA N-glycosidase)型,如蓖麻蛋白A     

核糖体失活蛋白的结构功能与分布

核糖体失活蛋白是一类在植物中较广泛存在的毒蛋白。植物核糖体失活蛋白具有RNAN-糖苷酶活力,可作用于核糖体RNA,使核糖体失去蛋白质合成的功能。根据一级结构,核糖体失活蛋白可分为两种类型。Ⅰ型核糖体失活蛋白由一条链组成,分子量在25—30 kDa之间。Ⅱ型核糖体失活蛋白由两条以二硫键相连的链(A、B链)组成,分子量在60 kDa左右。B链可以与细胞表面含半乳糖的受体结合,有助于A链进入细胞,作用于核糖体。目前至少已从9个科31种植物中分离纯化了Ⅰ型RIP。Ⅱ型RIP较少,仅在6科8种植物中发现。除了具有RNA N-糖苷酶活性,还发现一些核糖体失活蛋白可以切割超螺旋双链DNA,产生缺口环状和线状DNA。此外,一种Ⅰ型RIP,克木毒蛋白还具有超氧化物歧化酶活性。     

放射性同位素标记测定RNA N-糖苷酶活性的新方法

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类抑制真核细胞蛋白质生物合成的毒蛋白。近几年发现,有相当一部分RIP的作用机制属于RNAN-糖苷酶(RNA NGlycosidase),如蓖麻毒蛋白A链(ricinA-chain)及一些单链RIP。它们能专一水解大鼠核糖体28 SRNA的第4324位腺苷酸的C-N糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基,在相应的核糖Cl位上留下一个醛基。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶着在核糖体上,经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用ＢＳＡ,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同,先以肝癌单抗处理也不影响天花粉蛋白的结果相同,先以肝癌单抗处理也不影响天花粉蛋白的肝癌单抗结合物进     

天花粉蛋白R122G突变体的构建及活性研究

天花粉蛋白Ｒ１２２Ｇ突变体的构建及活性研究袁惠东１柯一保孔梅柯欣永夏其昌１张祖传１聂慧玲＊（中国科学院上海细胞生物学研究所,上海２０００３１;１中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词天花粉蛋白;突变体;ＲＮＡＮ－糖苷酶天花粉蛋白（ｔｒ...     

栝楼籽核糖体失活蛋白（TCK）与天花粉蛋白（TCS）性质比较研究

建立了从栝楼种籽大规模制备核糖体失活蛋白（ＴＣＫ）的方法。进行了ＴＣＫ与天花粉蛋白（ＴＣＳ）性质比较研究。     

核糖体RNA拓扑学与RNA N－糖苷酶研究进展（上）

核糖体RNA拓扑学的研究对阐明核糖体RNA(rRNA)在蛋白质生物合成中的作用具有重要的意义.RNA N-糖苷酶是一类核糖体失活蛋白.它只水解rRNA特定位置上一个腺苷酸的糖苷键,释放一个腺嘌呤碱基,使核糖体失活.Ricin A链是研究得最早和最详细的RNA N-糖苷酶,迄今已发现有二十五种核糖体失活蛋白具有RNA N-糖苷酶活性.RNA N-糖苷酶作用于28S rRNA的α-sarcin结构域,改变核糖体的构象而使其失活.     

用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法

植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类能作用于核糖体最大RNA的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体RNA结构与功能的有力工具.利用RIP能在DNA中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋DNA解旋的特点,分别以常用的质粒PUC18、PUC19和PBR322 DNA为底物,建立了测定RIP酶活性的一种新方法,其灵敏度是50ng(天花粉蛋白)和5ng(还原型的辛纳毒蛋白),酶催化反应的时间是60min.这个新方法具有方便、快捷、灵敏的特点,避免了常用方法中制备核糖体、提取RNA的仪器和技术条件的限制,检测的时间由原来的几天缩短到约120min,大大地降低了检测的费用,为广泛和深入地研究RIP提供了有利的条件.     

单链核糖体失活蛋白的核糖核酸酶活性

以芹菜4.5SRNA为底物, 在pH5.0的条件下, 5种纯核糖体失活蛋白:天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性, 放射自显影图显示出它们对RNA分子中的各种碱基具有不同的敏感性.     

滨藜（Atriplex patens）核糖体失活蛋白基因的克隆和分析

为开发利用新疆野生植物滨藜,采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR),从滨藜（Atriplex patens）叶中克隆核糖体失活蛋白（ribosome inactivating proteins ,RIPs）基因的完整读码框ORF片段.序列分析表明,该片段大小为843 bp,编码1 条长280个氨基酸肽链, 其中N 端的26个氨基酸是信号肽.滨藜核糖体失活蛋白（ApRIP）属Ⅰ型核糖体失活蛋白.同源性比较分析显示,滨藜RIP与藜科植物藜的核糖体失活蛋白,天花粉蛋白（TCS）和美洲商陆蛋白（PAP）基因序列的同源性分别为82%,41%和55%.氨基酸序列比对和SWISS-MODEL同源模建分析表明,滨藜RIP的3′端氨基酸肽链具有与其它RIP相同的活性中心位点"EAARXKXI".