过氧化氢酶对固定化葡萄糖氧化酶稳定性的影响

本文通过重氮盐共价键合法把葡萄糖氧化酶接到交联琼脂糖上制备固定化酶。为了提高固定化酶的使用稳定性,把过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶同时接到载体上,并研究了这两种酶在不同比例时对固定化葡萄糖氧化酶活力和稳定性的影响,随着加入过氧化氢酶量的增加,固定化葡萄糖氧化酶稳定性显著增加。所制得的固定化葡萄精氧化酶-过氧化氢酶在25℃下连续使用36h,活力几乎不变,失活半衰期可达1155h。     

一种免受乙醇干扰的GOD的酶电极

将酶电极应用于发酵糖的测定时。与糖共存的乙醇常常会影响测糖的准确性,通过对葡萄糖氧化酶(GOD)电极的研究,探讨了乙醇对测糖酶电极测定影响,进而研制出抗干扰的GOD酶电极,若是GOD电极的酶膜通过夹心法制备．在乙醇含量为0．1％(V／V)时·即产生显著的影响,使测定结果偏大4．3%,且乙醇的影响随浓度的升高而增大,若用尼龙网固定GOD膜,GOD电极在测定20mmol／L和5mm01／L左右的葡萄糖溶液时,含量高达9％的乙醇仍未对测定产生显著的影响．表现出良好的不受乙醇干扰的特性,并且,该尼龙网GOD电极具有良好的重复性、稳定的响应活性及较长的保存期．     

用葡萄糖酶电极法测定葡萄糖淀粉酶活性的研究

利用固定化葡萄糖氧化酶酶膜和过氧化氢电极组成酶电极测定葡萄糖淀粉酶的活性单位。用已知单位的葡萄淀粉酶作为测定标准定标后,在仪器上直接测出被测样品的葡萄糖淀粉酶活性单位,测定时间１４０ｓ,操作周期３ｍｉｎ,连续１０次测定ＣＶ值为０.６７％,５０～５００ｕ／ｍｌ的范围内线性良好,ｒ＝０.９９９９。     

媒体酶电极

通过精心设计电极表面,电解质系统并以小分子有机导电化合物作为电子传递体,可在生物氧化-电化学反应过程中达到无氧反应,因而为排除反应系统中的pH,氧分压和其他电活性物质的干扰,提高分析测定的灵敏度,精度和扩大测定范围打下基础。本文拟就媒体修饰电极系统中的酶、有机导电媒体、电极、以及此类酶电极的应用与前景作一综述。     

酶稳定剂和还原剂对固定化葡萄糖氧化酶稳定性的影响

本文研究了几种酶稳定剂和还原剂对固定化葡萄糖稳定性的影响。血红蛋白能提高固定化葡萄糖氧化酶的活力,在投入酶蛋白量和血红蛋白量之比为1：10时效果最明显。此外,在底物反应液中,加入还原性物质亦能提高固定化葡萄糖氧化酶的使用稳定性,其中维生素c效果最显著。     

L-赖氨酸脱羧酶酶电极的研制

将赖氨酸脱羧酶直接固定于CO₂电极的硅橡胶气透膜上制成的赖氨酸脱羧酶酶电极,性能如下:(1)酶电极对赖氨酸的线性响应浓度范围为0.0025—0.1％;极差为50—55mV;CV值小于5％;(2)连续使用寿命超过30天;(3)高度专一;(4)用于测定发酵过程赖氨酸浓度变化,结果与瓦氏呼吸仪的数据平行,相关性良好。     

小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的部分结构

为了弄清小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 (polygalacturonase inhibitingprotein ,PGIP)的作用机制 ,并为其在基因工程中的应用提供依据 ,对其结构进行了研究 .用Edman降解法测得小麦PGIP的N端序列为Lys Pro Leu Leu Thr Lys Ile Thr Lys Gly Ala Ala Ser Thr .用CD谱研究其二级结构 ,发现小麦PGIP天然态含有 4 3 7%的 β折叠和 13 1%的α螺旋 .酸碱和温度变性引起了二级结构改变 .不完全变性阶段 ,二级结构的变化表现为α螺旋无明显变化 ,β折叠遭到破坏 ;活性完全丧失阶段 ,β折叠变化很小 ,α螺旋含量明显减少 .用NR R(非还原 还原 )双向对角线SDS PAGE鉴定出小麦PGIP含有链内二硫键 .用去糖基化法确证了小麦PGIP的糖含量为 2 2 %.小麦PGIP与双子叶植物PGIP相比 ,一级结构差异较大 ,同源性由 36 %变为 9%;二级结构相似 ,都是高 β 折叠的蛋白 ;均具有链内二硫键 ;在糖含量上也相似 .研究结果为进一步弄清小麦PGIP作用机理打下了基础 ,同时对于植物抗赤霉病基因工程具有重要意义 .     

原蛋白转变酶的生物化学结构与功能

肽或者蛋白质以前体形式合成后,需要原蛋白转变酶,和/或羧基肽酶,酰胺化酶等加工酶的协同作用才能获得完全的生物活性。原蛋白转变酶是这个过程中最重要的功能酶,它们由9种Ca2+依赖性的蛋白内切酶组成,许多重要的生理过程需要它们的直接参与,如肽与蛋白质激素、膜受体和病毒外壳蛋白的成熟等。它们的功能与许多疾病相关,如癌症、脑卒中、糖尿病、脂代谢紊乱等疾病,该文对原蛋白转变酶的生化结构和功能作一简述。     

酶电极流动注射分析法测定葡萄糖

 一种酶电极流动注射分析系统(EFIA)用于血糖和发酵葡萄糖的快速测定。研究了酶电极及其工作系统的性能和各种影响参数,,奠定了实用化基础。     

乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白的结构和功能研究

乙肝病毒蛋白结构和功能是当前研究乙肝病毒的热点之一。HBV多聚酶的末端蛋白在病毒复制过程中起重要作用,主要包括前基因组RNA包装和DNA合成的蛋白引发等,并可抑制细胞对干扰素的反应。本文综述了乙肝病毒多聚酶末端蛋白的结构和功能,还比较了乙肝病毒与逆转录病毒多聚酶结构和功能的异同。     

副粘病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白结构与功能的研究进展

副粘病毒的血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白具有重要的生物学活性,其中前者具有受体识别活性、神经氨酸酶活性和促进融合蛋白的细胞融合作用.本文对近年来血凝素-神经氨酸酶结构和功能方面的研究进展进行了综述.     

结构修饰提高酶稳定性、活性

酶因其特异性和可持续性而成为广泛应用的绿色催化剂，其稳定性和催化活性是决定酶适用性的关键因素。为满足实际应用需求，通过蛋白质结构修饰赋予其所需的催化特性是当前的研究热点。提高热稳定性的策略有：引入非共价/共价相互作用（疏水相互作用、氢键、盐桥、芳香环相互作用、二硫键）、环截短、C端和N端工程，及增加脯氨酸/减少甘氨酸的数目等；获得具有高效性和多样性的生物催化剂的策略有：降低空间位阻、拓宽催化口袋、增加底物亲和力及调节活性位点灵活性等。然而，在稳定性或催化功能改造的过程中，新突变的引入会削弱其他功能，致使进化过程中稳定性和催化活性相互制约。因此，采用基于理性计算优选突变热点、基于多重蛋白质稳定性或活性改造策略的共进化，以及基于高度稳定的蛋白质骨架创造或/和优化蛋白质功能等多种策略克服酶稳定性-活性之间的权衡。本综述重点阐述了结构修饰方法在提高酶稳定性或/和催化活性方面的应用，并展望了该领域的未来发展前景。     

牛心线粒体ATP酶抑制蛋白对酶的催化部位构象的影响

以标记在ＡＴＰ酶（Ｆ１）催化部位的ＴＮＰ－ＡＴＰ为荧光探针,比较测定了Ｆ１与其抑制蛋白（ＩＦ１）结合前后的ＴＮＰ－ＡＴＰ荧光光谱,荧光寿命和荧光偏振光谱,结果表明在ＩＦ１的作用下,酶分子催化部位的极性下降,ＴＮＰ－ＡＴＰ分子的自由度减小,提示ＩＦ１引起了Ｆ１催化部位的构象改变。     

化学修饰对胰激肽释放酶稳定性及其性质的影响

以自制高活性ＰＰＫ为材料，在氰基硼氢化钠存在下经水溶性乙醛酸修饰其表面氨基，使基抗不可逆热失活稳定性有显著提高，结果表明，修饰ＰＰＫ在等电点等基本性质方面都有变化，修饰ＰＰＫ的ＢＡＥＥ活性为天然酶的８２％，氨基修饰度为５８％，抗蛋白酶水解，贮藏和冻干稳定性都有加强。     

以二茂铁为中间介质的葡萄糖电极的研制

以二茂铁为中间介质的葡萄糖电极是由葡萄糖氧化酶、含有二茂铁的电极糊和铂金电极构成的。由于用二茂铁代替氧作为电子受体,故此电极的响应只取决于葡萄糖浓度,而与氧分压无关。该电极的稳态响应时间为40—120s,线性范围为0.6—16m mol/l。本文还讨论了各种因素(pH、温度、搅拌速度和一些基质)对电极的影响。用此电极对牛血清和发酵液中的葡萄糖含量进行测定并与酶法比较,结果令人十分满意。     

真菌漆酶的结构与功能

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,能催化氧化酚类和芳香类化合物,同时伴随4个电子的转移,并将分子氧还原成水。漆酶结构的解析是阐明其催化作用机理、了解蛋白质结构与功能关系的基础。综述近年来对真菌漆酶蛋白结构及其功能研究的进展。