半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素可与甘露聚糖结合。本文以ＰＴＬ与＾１２５Ｉ标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对ＰＴＬ的糖结合活性的影响,并对ＰＴＬ的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或ＥＤＴＡ对其糖结合活性无显著影响,但Ｋ＾＋可明显增加ＰＴＬ的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制ＰＴＬ与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。ＰＴＬ专一与高甘露糖型糖链结合。     

来源于嗜碱芽孢杆菌N16-5甘露聚糖利用基因簇的乙酰酯酶AesA的克隆及性质分析*

天然来源的多糖底物上常存在乙酰基取代,特异性的乙酰酯酶能够切割这些底物上的乙酰基,从而有利于聚糖底物的进一步降解.对Bacillus sp. N16-5甘露聚糖利用基因簇上编码的乙酰酯酶AesA进行了基因克隆和异源表达,并对其酶学性质进行了研究.aesA基因长957bp,编码318个氨基酸,属于碳水化合物酯酶第7家族.AesA对4-甲基伞形酮乙酸酯(4-methylumbelliferyl-acetate)表现出较好的催化活性,金属离子Fe³⁺,Fe²⁺,Mn²⁺及Cu²⁺对AesA活性均有不同程度的促进作用.AesA与甘露聚糖酶ManA对乙酰化的甘露聚糖底物具有显著的协同作用.此项研究有助于理解嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.N16-5对甘露聚糖的水解机制,并且在甘露聚糖降解中具有潜在的应用前景.     

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制陈政良（广州第一军医大学免疫学教研室,广州５１０５１５）关键词甘露聚糖结合蛋白,糖识别甘露聚糖结合蛋白（ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＢＰ）是一种血浆蛋白,因被发现能选择性识别并结合酵母菌外壁上的...     

硫酸化对金顶侧耳多糖构象及生物活性的影响

从金顶侧耳子实体中分离纯化一半乳甘露聚糖ＰＣ－３。该多糖在水中为无规线团构象,与Ｃｏｎ Ａ可相互结合并产生沉淀,对柯萨奇病毒ＣＢ５有一定的抑制作用,ＰＣ－３经硫酸化修饰后,由于同性电荷的排斥作用,使糖链的无规线团扩展呈伸展状态,局部可能形成螺旋。硫酸化的ＰＣ－３与Ｃｏｎ Ａ不能结合成多糖－蛋白复合物,但显著地提高了抗病毒ＣＢ５的活性。     

半夏凝集素在脂双层形成的阳离子通道

半夏凝集素是从多年生植物三叶半夏的块茎鲜汁中分离纯化的糖结合蛋白,具凝集素活性,与甘露聚糖有专一结合。本工作利用双室系统观察了它对人工脂双层的作用。 人工脂双层由卵磷脂和胆固醇(重量比为4:1)的正癸烷溶液形成。电阻≥10GΩ。在电压箝位下将半夏凝集素(1—4μg/ml)加至系统的一小室,几分钟后即观察到通道样活动噪音,脂双层电阻下降。甘露聚糖对这种变化有明显的对抗作用,加入40μg/ml的甘露聚糖可使脂双层的膜电阻立即从2GΩ恢复到对照水平(≥10GΩ)。在低浓度半夏凝集素和低维持电压下可获得单位电导涨落记录。在100mmol/L对称KCl溶液中记录的半夏凝集素单通道电流的优势电导为35pS。通过测定在非对称盐溶液中的平衡电位,根据Goldman—Hodgkin—Katz电位方程可推算出通道的离子选择性。结果表明,半夏凝集素形成的通道为阳离子通道。     

激光在研究生物大分子结构与功能中的应用——酵母甘露聚糖波谱性质和形成分子载体的初步研究

为了进一步了解酵母甘露聚糖的精细结构信息,以便研究其功能,我们采用本实验室“拟规模化制备酵母甘露聚糖新工艺”,从废啤酒酵母（工厂下脚料）和市售鲜酵母细胞壁中制取了纯化的酵母甘露聚糖（ｍａｎｎａｎ）。气相色谱法测定它们的糖组分和其相对含量,并且测定和比较分析酵母甘露聚糖与其组份糖的游离形式（甘露糖和葡萄糖）和酸解后的单体糖的可见—紫外吸收光谱和荧光发射光谱,和以Ｈｅ—Ｎｅ激光为激发光源的红外光谱。从中获得了：组份单糖聚合成甘露聚糖和多聚糖再分解成组份糖单体的光谱特征峰;和这些相关样品的光谱特征峰在聚合和分解过程中的变化与相应糖的细微结构变化的相关光谱信息。这些糖结构光谱特征相关信息为我们制备新型分子载体——甘露聚糖的聚合物（ｐｏｌｙｍａｎｎａｎ）和其功能研究提供了研究基础。     

魔芋球茎贮藏淀粉和甘露聚糖粒的形态观察

在光学显微镜和透射电镜下观察了魔芋（Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｕｓｃｏｎｊａｃ）球茎中甘露聚糖粒和淀粉粒的形态。两种贮藏多糖分别位于不同的细胞中。淀粉粒在造粉体内发育,以复粒存在,用魔芋球茎仔茎茎尖为材料观察显示,淀粉粒的形成早于甘露聚糖颗粒的形成。甘露聚糖粒形态多数近随圆形,一些甘露聚糖颗粒内包含了针晶体,但多数的甘露聚糖粒内部不包含针晶体,由纯净的甘露聚糖构成。     

MBL调控MASP激活补体系统

甘露聚糖结合凝集素(MBL;或甘露聚糖结合蛋白,MBP)是由相同的多肽链组成的寡聚物,它通过结合细胞表面的碳水化合物能够有效地识别侵入体内的多种致病微生物,并激活补体来杀灭病原微生物。MBL能与血清中其相关蛋白酶(MASP)结合,MASP包含3个丝氨酸蛋白酶MASP-1、MASP-2、MASP-3和非酶蛋白MAp19。研究显示,MBL通过2种机理调控MASP-2的活性,在先天性免疫中具有重要的作用。本文简要综述MBL调控MASP激活补体的作用机理。     

魔芋球茎中的β-甘露聚糖酶

迄今研究高等植物的β-甘露聚糖酶主要是用贮藏甘露聚糖的种子为材料(Halmer等1975,Halmer和Bewley 1979,Reid等1977,McCleary 1983)。营养器官贮藏甘露聚糖的植物,仅存在于单子叶植物的少数科(Meier和Reid 1982)。魔芋球茎贮藏大量甘露聚糖,Sugiyama等(1973)和Shimahara等(1975)从萌发的球茎中部分纯化了β-甘露聚糖     

乙烯对苹果果实细胞壁降解效应初探

以陕西主栽苹果品种'秦冠'为试材,研究了不同浓度乙烯利以及加热处理下苹果果实中与细胞壁代谢相关酶的活性变化及其与细胞壁组分降解的关系.结果表明:乙烯对各细胞壁酶活性的促进效应因乙烯利施用浓度不同而异.乙烯利浓度由10 mg/L增至1 000 mg/L时,果胶甲酯酶(PME)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)和纤维素酶(CS)的活性先逐渐增强,而后又被抑制;木聚糖(Xyl)没有受到明显影响.加热处理可增进乙烯利的作用,如在60℃时,PME、PG、CS、Xyl活性分别是对照的1.5、2.7、1.1和1.5倍.PG活性的显著增加同时引起了果实可溶性糖含量的显著升高,但其他酶活性变化与可溶性糖含量无直接相关.     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择

以蚕豆（ＶｉｃｉａｆａｂａＬ．）叶片下表皮为材料,比较ＴｒｉｔｏｎＸ１００、冷丙酮和（ＮＨ４）２ＳＯ４对ＡＢＡ结合蛋白（简称ＡＢＡＢＰ）的提取效果。结果表明：０．５％（Ｗ／Ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ１００去垢剂提取的ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ特异结合活性较高（０．４８７ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ）,维持结合活性的时间较长（４℃下反应４０ｈ保持最大结合的６０％）;而冷丙酮法提取的ＡＢＡＢＰ特异结合活性只有０．３２５ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ,且容易失活,１０ｈ仅保持最大结合的３０％左右。实验比较了各种盐离子对ＡＢＡＢＰ的影响,高盐（＞３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）不利于ＡＢＡＢＰ的结合反应,低浓度ＫＣｌ对ＡＢＡＢＰ活性略有促进。ＡＢＡＢＰ的结合活性需要介质中有一定量的Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋,用ＥＤＴＡ螯合介质中Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋后,ＡＢＡＢＰ活性大大降低,分别为最大结合的７５％和６０％。ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ在６．５,这些条件为亲和层析纯化ＡＢＡＢＰ提供了依据。     

小麦萌发素G和ψG的纯化及其部分特性

利用亲和层析方法纯化了小麦草酸氧化酶G和ψG,并对其生化特性进行了初步分析.G和ψG的最适pH为3.5,在60℃以下较稳定.当草酸浓度大于0.2mmol/L时,G和ψG的活性受到抑制.G和ψG的Km值分别为0.084和0.053mmol/L.0.1 mmol/L的EDTA、NH4 、Cl-、Mn2 、Mg2 、Na 和K 对G和ψG的活性没有影响,0.1 mmol/L的Zn2 、Cu2 、Fez 、Al3 、CO32-、NO3-和SO42-抑制G和ψG的活性.0.1 mmol/L的H2PO4-和HPO42-仅抑制G的活性.0.1 mmol/L的核黄素、FMN和FAD抑制ψG活性,G的活性则不受FAD和FMN的影响.     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择

The abaxial epiderm of Vicia faba L. was chosen to prepare the crude extract of ABA binding protein (ABA-BP). The activity of ABA-BP was dependent on different extraction methods. The specific binding capacity of ABA-BP extracted with 0.5% Triton X-100 (binding activity (B) = 0. 487 nmoL/g protein) was higher than that with extracted cold acetone (0. 325 nmol/g protein) or (NH4)2SO4(0. 223 nmol/ g protein). The activity duration of ABA-BP extracted with Triton X-100 (60% Bmax after 40 h) was longer than that with cold acetone (30% Bmax after 10 h). The ABA-BP activity of binding ABA was sensitive to pH change with an optimum pH of 6.5. The ABA-BP specific binding activity decreased quickly under high concentration of NaC1 ( > 300 mmoL/L), but increased 12% with 5 mmol/L KC1. Some divalent cations like Ca2+ and Mg2 + were required for enhancing the ABA-BP activity. These optimum conditions are primordial for ABA-BP purification.     

树状多节孢酸性磷酸酶的分离纯化与性质研究

树状多节孢Nodulisporium sylviforme是从东北红豆杉Taxus cuspidata分离、可产生紫杉醇的内生真菌。研究以树状多节孢为材料,利用液体发酵手段获得菌丝体,通过CM-cellulose阴离子交换柱层析、Q-Sepharose阳离子交换柱层析和FPLC凝胶过滤层析（Superdex 75）,获得纯化的树状多节孢酸性磷酸酶蛋白（Nod-ACP）。结合FPLC和SDS-PAGE分析,判定该磷酸酶为分子量44kDa单亚基蛋白。酶学性质研究表明,其最适pH值为3.0,最适温度为58℃。6     

重金属离子对猪红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶的作用

猪红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶是一种钙调蛋白(CaM)依赖酶,其活力又依赖巯基的完整性。实验应用Ca~(2+)-ATP酶这一模型体系观察到重金属离子,Pb~(2+)、Cd~(2+)和Hg~(2+)都能替代Ca~(2+),激活CaM,从而激活Ca~(2+)-ATP酶;其最大刺激活力分别为85％、80％和30％,半刺激浓度分别为32、27和0.7μmol/L。当三种重金属离子的浓度增加时,则与Ca~(2+)-ATP酶的巯基结合,抑制酶的活力,Pb2~(2+)、Cd~(2+)和Hg~(2+)的半抑制浓度分别为370、440和2μmol/L。抑制作用为渐进性过程,而刺激作用为即时效应。抑制作用可为巯基化物,特别是二巯基化物所逆转。研究结果提示,CaM可能是重金属中毒最初作用的靶分子,而重金属中毒不仅使CaM“开关”失灵,还可能导致细胞内Ca~(2+)的调节全面失控。     

Colipase residues Glu64 and Arg65 are essential for normal lipase-mediated fat digestion in the presence of bile salt micelles

Pancreatic triglyceride lipase (PTL) requires colipase for activity. Various constituents in meals and in bile, particularly bile acids, inhibit PTL. Colipase restores activity to lipase in the presence of inhibitory substances like bile acids. Presumably, colipase functions by anchoring and orienting PTL at the oil-water interface. The x-ray structure of the colipase.PTL complex supports this model. In the x-ray structure, colipase has a hydrophobic surface positioned to bind substrate and a hydrophilic surface, lying opposite the hydrophobic surface, with two putative lipase-binding domains, Glu(45)/Asp(89) and Glu(64)/Arg(65). To determine whether the hydrophilic surface interacts with PTL in solution, we introduced mutations into the putative PTL binding domains of human colipase. Each mutant was expressed, purified, and assessed for activity against various substrates. Most of the mutants showed impaired ability to reactivate PTL, with mutations in the Glu(64)/Arg(65) binding site causing the greatest effect. Analysis indicated that the mutations decreased the affinity of the colipase mutants for PTL and prevented the formation of PTL.colipase complexes. The impaired function of the mutants was most apparent when assayed in micellar bile salt solutions. Most mutants stimulated PTL activity normally in monomeric bile salt solutions. We also tested the mutants for their ability to bind substrate and anchor lipase to tributyrin. Even though the ability of the mutants to anchor PTL to an interface decreased in proportion to their activity, each mutant colipase bound to tributyrin to the same extent as wild type colipase. These results demonstrate that the hydrophilic surface of colipase interacts with PTL in solution to form active colipase.PTL complexes, that bile salt micelles influence that binding, and that the proper interaction of colipase with PTL requires the Glu(64)/Arg(65) binding site.     

Study on the Binding State of Calcium in Photosystem ⅡOxygen-Evolution Complex

Washing spinach PSII oxygen-evolution complex (OEC) with 2 mmol/L EGTA or extraction medium caused a 28.4% and 25.0% loss of oxygen evolution activities respectively, but the loss of polypeptide components of OEC did not take place, whereas washing with 1 mol/L NaCI caused both a 90.0% loss of oxygen evolution activity and loss of 17, 23kD polypeptides. Adding 5–10 mmol/L CaC12 could restore oxygen evolution activities of OEC by various washing to a great extent, but had no effect on control OEC, whereas adding 5–10 mmol/L EGTA had no effect on the OEC by various' washing, but caused the loss of oxygen evolution mixtures, which could induce the release of of 17, 23kD polypeptides from OEC, caused 54.3% loss of oxygen evolution activity, under this circumstance, adding 2 mmol/L of EGTA could only maintain a weak oxygen evolution activity of OEC, but adding 10 mmol/L of CaCl2 could restore oxygen evolution activity of OEC to the control level. These findings' suggest a two way loose binding of Ga2+ to PSⅡ OEC in one way Ca2+ is loose bound to the surface of PSⅡOEC and in other, the Ca2+-binding site is wrapped by 17, 23kD polypeptides. Both of them have effect on oxygen evolution activity of PSⅡ OEC. By way, Mn2+ can antagonize the restoration of oxygen evolution activity by Ca2+ to the NaCl-washing PSⅡ OEC.     

培养牛心内膜内皮细胞的腺苷三磷酸双磷酸酶的特性研究

包括血管内皮细胞在内的多种细胞和组织存在腺苷三磷酸双磷酸酶,但心内膜内皮细胞是否含有ａｐｙｒａｓｅ尚无报道。本文旨在研究牛心内膜内皮细胞ａｐｙｒａｓｅ的特性。以无机磷释放法检测培养牛心内膜内皮细胞（ＢＥＥＣ）ａｐｙｒａｓｅ的活性,公认的ａｐｙｒａｓｅ抑制剂叠氮钠呈浓度依赖性地抑制ａｐｙｒａｓｅ活性;另一种ａｐｙｒａｓｅ抑制剂氟化钠也明显抑制ａｐｙｒａｓｅ活性地抑制活性而Ｎａ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓ