醛化人血清火箭免疫电泳Ig定量技术 Ⅰ.人血清蛋白质醛化条件及IgG定量的初步探讨

本文确定了醛化人血衍的最适条件是:0.3毫升稀释的血清加0.2毫升2.2M 甲醛,37℃保温5分钟。已醛化的血清在含1.4%兔抗人IgG 抗血清的琼脂糖凝胶中电泳150分钟,出现单一的正极峰,染色后可用厘米直尺测量峰高。同一血清样品同时使用Mancini 免疫单扩散法进行测定。两法结果相比较,误差无显著性意义。认为本文醛化条件用于血清IgG 定量测定具有快速、敏感和重复性良好等优点。     

醛化人血清火箭免疫电泳Ig定量技术 Ⅱ.微量全血IgG定量法

报告了一种快速、微量、可重复的全血IgG定量法。用血色素吸管采耳垂血20微升,用生理盐水适当稀释后,按前文所述方法进行醛化和火箭免疫电泳,结果每一样品形成单一的火箭蜂。测定了十八名健康青壮年耳垂血和十六例慢性气管炎病人静脉血,并将同一个体的2毫升全血和1毫升血清的IgG含量作了比较,结果差别无统计学意义。根据正常人全血中血浆约占55%的体积,提出公式D_s=2D_b(1—5%),借以将每2毫升全血的IgG含量换算成1毫升血清IgG含量的近似值。同一份血标本分别用不同稀释液稀释,保存于4℃,并在两周内反复作八次电泳,测它们的IgG含量。变异系数分别为7.11%和5.47%。应用此法,IgG的定量只需几滴血,且很适合于对婴儿、儿童血中Ig水平的测定,也适合于对同一个体血中Ig动态变化的研究。     

人血清中肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体定量ELISA的初步验证

目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体进行定量检测,并对该方法的线性、检测限、检测范围、准确度、精密度、特异性进行初步验证。结果该方法检测13份质控血清的12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的范围分别是0.02~4.38 ng/m L、0.14~34.68 ng/m L、0.10~25.20 ng/m L和0.12~29.78 ng/m L,r2均0.99,最低检测限分别为0.35 ng/m L、0.37 ng/m L、0.44 ng/m L和0.88 ng/m L。准确度为71.15%;试验间CV值均20%;特异性均85%。结论肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测,需对准确度、精密度和特异性进一步验证。     

人血清脂蛋白的超速离心分离——Ⅰ.人血清极低密度及低密度脂蛋白的大量分离

本文报道了用区带转头超速离心分离人血清两种低密度脂蛋白的新方法,该法先用硫酸右旋糖酐粗提,浓缩,得到人血清中VLDL和LDL混合液,然后再用溴化钠密度梯度区带超速离心法将VLDL、LDL及其中少量的杂蛋白分开,最后获得较大量纯净的VLDL及LDL制品。本法分离效果好,重复性佳,固定离心条件后,特别是离心速度和时间,可在相同的位置获得VLDL和LDL样品。又由于分离时样品已浓缩,区带超速离心后仍能保持较高的浓度,因而可直接观察VLDL和LDL所在的管数,简化了步骤、缩短了时间,不需浓缩即可使用,避免了在样品浓缩过程中可能产生的变化。本文为大量制备纯净的VLDL及LDL提供了一较大量分离的方法。     

人血清脂蛋白的超速离心分离——Ⅰ.人血清极低密度及低密度脂蛋白的大量分离

本文报道了用区带转头超速离心分离人血清两种低密度脂蛋白的新方法,该法先用硫酸右旋糖酐粗提,浓缩,得到人血清中VLDL 和LDL 混合液,然后再用溴化钠密度梯度区带超速离心法将VLDL、LDL 及其中少量的杂蛋白分开,最后获得较大量纯净的VLDL及LDL制品。本法分离效果好,重复性佳,固定离心条件后,特别是离心速度和时间,可在相同的位置获得VLDL和LDL样品。又由于分离时样品已浓缩,区带超速离心后仍能保持较高的浓度,因而可直接观察VLDL和LDL所在的管数,简化了步骤、缩短了时间,不需浓缩即可使用,避免了在样品浓缩过程中可能产生的变化。本文为大盆制备纯净的VLDL及LDL提供了一较大量分离的方法。     

人血清脂蛋白的超速离心分离——Ⅱ.人血清极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白性质的鉴定

本文对硫酸右旋糖酐粗制的VLDL和LDL混合液,再以区带超离心分离提纯的VLDL和LDL的样品,进行纯度鉴定、理化性质、免疫活性和化学组成的分析。琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳结果证明,经脂质和蛋白染色均呈现一条带;免疫双扩散和免疫电泳只呈现一条沉淀弧;超速离心分析LDL只有一个单一面尖锐的峰,上浮速率为6.75,与直接由人血清分离者无明显差异。证实本实验方法所得VLDL和LDL为较纯的制品,但从VLDL和LDL各管的琼脂糖电泳行为、电子显微镜中的分子颗粒大小以及VLDL在分析超速离心中的上浮速率均提示:二者有亚类的存在,特别是VLDL。VLDL和LDL的化学组成分析说明LDL与文献上报道数据一致,但VLDL有一定差异。本方法为大量制备纯净的VLDL和LDL提供了一个有效的方法。     

人血清中Hib荚膜多糖抗体定量的ELISA方法建立及初步验证

目的比较两种不同活化方法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-Ty)的特性,分别作为包被抗原建立测定人血清中Hib荚膜多糖特异抗体含量的ELISA方法。比较并确定包被抗原,对建立的ELISA方法进行初步验证。方法分别用CNBr和CDAP作为活化剂制备PRP-Ty,经Sepharose CL-4B层析分析相对分子质量分布范围,并确定适宜PRP-Ty抗原包被浓度的间接ELISA方法,以人Hib荚膜多糖IgG抗体定量标准品作为阳性标准,通过四参数非线性拟合计算人血清Hib荚膜多糖IgG抗体含量。结果 CNBr活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyCNBr)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量向小相对分子质量方向偏移,而CDAP活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyC DAP)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量分布无显著变化;两种PRP-Ty在0.65～2.00μg/mL的包被浓度范围内均有良好的包被活性,方法的灵敏度均达到0.02μg/mL IgG抗体检测水平。结论 PRP-TyC DAP作为包被物的ELISA测定方法可以更加真实可靠地反映人血清IgG抗体水平。     

人血清脂蛋白的超速离心分离 Ⅱ.人血清极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白性质的鉴定

本文对硫酸右旋糖酐粗制的VLDL和LDL混合液,再以区带超离心分离提纯的VLDL和LDL的样品,进行纯度鉴定、理化性质、免疫活性和化学组成的分析。琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳结果证明,经脂质和蛋白染色均呈现一条带;免疫双扩散和免疫电泳只呈现一条沉淀弧;超速离心分析LDL 只有一个单一面尖锐的峰,上浮速率为6.75,与直接由人血清分离者无明显差异。证实本实验方法所得VLDL 和LDL 为较纯的制品,但从VLDL 和LDL 各管的琼脂糖电泳行为、电子显微镜中的分子颗粒大小以及VLDL 在分析超速离心中的上浮速率均提示:二者有亚类的存在,特别是VLDL。VLDL 和LDL 的化学组成分析说明LDL 与文献上报道数据一致,但VLDL 有一定差异。本方法为大量制备纯净的VLDL 和LDL 提供了一个有效的方法。     

蛋白质结构与抗原性的关系 Ⅰ.N-溴代琥珀酰亚胺对牛血清清蛋白理化性质及抗原性的影响

(1)牛血清清蛋白在pH=4.1—4.2的醋酸-脲缓冲液中经15moles/mole BSA的NBS处理后,色氨酸肽键处断裂,出现新N-末端氨基酸,用叔戊醇及1.6M磷酸系统双相层析证实分别为丝氨酸及甘氨酸。(2)NBS处理后之BSA分子量由正常65,000增加到110,000。特性粘度由正常0.041上升至0.076,说明分子有部分聚合现象,在电泳图谱上出现一个新的峰。(3)BSA经NBS处理后此旋光度无变化,说明螺旋程度未发生明显的改变。(4)琼脂扩散及免疫定量实验结果显示NBS处理后BSA的抗原性减弱。     

人外源性干扰素的研究——Ⅰ.人全血细胞干扰素诱生条件的研究

以新城鸡瘟病毒为诱生病毒,用制备冻干血浆剩余的血细胞试制干扰素。制备方法为全血细胞法,每200毫升血液的血细胞可制备200毫升粗制干扰素,效价大多数在每毫升1000—2000单位之间。用人肺纤维母细胞 SL?株为检定细胞,以滤泡性口腔炎病毒为被干扰病毒,建立了干扰素的检测系统,可较稳定地测定干扰素效价。并对制备干扰素的条件包括诱生病毒剂量,培养液成分以及加液量等进行了研究。     

产蛋白酶枯草杆菌的选育及应用研究——Ⅰ.菌种筛选及产酶条件初步试

从沟泥等土样中分离筛选到四株蛋白酶高产菌株,进行了产酶条件复筛试验,其中枯草杆菌N1025在45℃摇瓶培养24小时酶活可达3400u/ml,该酶具有良好的脱丝胶性能。此菌培养温度高,生长周期短,具有较大的生产潜力。     

北京鸭卵清蛋白基因调控的研究——Ⅰ.停产与产蛋的北京鸭肝脏和输卵管染色质蛋白质的比较

从停产和产蛋的北京鸭的肝和输卵管制备纯染色质。用0.4NH_2SO_4抽提组蛋白和酸溶性非组蛋白,剩余的非酸溶性非组蛋白用牛胰DNaseI消化DNA法制备。对染色质大分子含量的测定表明,非组蛋白和RNA的含量在产蛋鸭染色质中明显地增加了。用乙酸脲电泳分析,核心组蛋白成份在所有实验样品中都是恒定的,但在产蛋鸭肝和输卵管染色质组蛋白H_1呈两条区带,并且出现较多条酸溶性非组蛋白区带。用SDS电泳分析,产蛋鸭肝和输卵管染色质中出现分子量约20,000的非酸溶性非组蛋白。非组蛋白的这些变化,启示它们可能是控制基因活性的调节因素。     

芽孢杆菌074碱性纤维素酶的研究——Ⅰ.菌种的分离、筛选及发酵条件

从碱性土样中,分离到产碱性纤维素酶的细菌134株。经摇瓶初筛、复筛后,得到一株芽孢杆菌074,在pH9条件下能产生具有较高活性的纤维素酶。该菌株的最适生长pH为中性,最适生长温度为32℃。NaC1对酶的产生影响较大。羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对酶的产生有一定促进作用,但不是唯一碳源。用最佳培养基和培养条件,48小时酶活性最高可达6u/ml。     

芽孢杆菌074碱性纤维素酶的研究——Ⅰ.菌种的分离、筛选及发酵条件

从碱性土样中,分离到产碱性纤维素酶的细菌134株。经摇瓶初筛、复筛后,得到一株芽孢杆菌074,在pH9条件下能产生具有较高活性的纤维素酶。该菌株的最适生长pH为中性,最适生长温度为32℃。NaC1对酶的产生影响较大。羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对酶的产生有一定促进作用,但不是唯一碳源。用最佳培养基和培养条件,48小时酶活性最高可达6u/ml。     

微生物产生大豆蛋白凝固酶的研究——Ⅰ.菌种的分离筛选及产酶条件的研究

从141份土壤样品中筛选到一株产大豆蛋白凝固酶的细菌,在适宜的发酵条件下,酶活力可达0.6—1u/ml。酶反应的最适温度为70℃、pH为5.5。在45℃、pH6.3—8.0条件下,酶活力稳定。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究——Ⅰ.菌种分离、筛选及发酵条件的研究

从38份土样中筛选到一株嗜碱性短小芽孢杆菌R115,能在pH10以上的环境中生长,并在pH10条件下产生较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适pH为10.5,最适温度45℃;在pH12条件下最适温度为28℃。     

中药马鞭草对子宫作用的研究——Ⅰ.马鞭草对人及大白鼠子宫肌条的作用

1.马鞭草在浓度为1.6×10~(-2)克/毫升时,对大白鼠子宫肌条及非妊娠和妊娠人体子宫肌条均有一定的兴奋作用。 2.在大白鼠子宫肌条,动情期的标本对马鞭草最为敏感,加入马鞭草后常常引起紧张性和收缩振幅同时增加;而在其他各期的标本常常只是收缩振幅有所增加。人的子宫肌条对马鞭草的反应大致和大白鼠子宫肌条相似,但反应较弱,一般只是紧张性发生变化。     

血清抑癌多肽作用机制的初步探讨——对癌细胞膜及其骨架的影响

本文研究血清抑癌多肽(SCSP)对癌细胞表面的效应和其表面蛋白质分子的侧向扩散及其内的F-actin的变化.扫描电镜观察结果是SCSP作用后,艾氏腹水癌细胞表面的微绒毛变为平坦而光滑的结构.从荧光漂白恢复技术测得的结果是上述癌细胞表面蛋白质分子的侧向扩散系数(?)降低.用Rhodamine—Pha-lloidin标记上述癌细胞得知其内的F—actin增加.从上述结果推测,在SCSP杀伤艾氏腹水癌细胞过程中,使F—actin在癌细胞内重组,有更多的F—actin与癌细胞质膜内大分子紧密相连,使癌细胞表面分子的活动性降低,故在癌细胞表面的结构变平,其蛋白质分子的扩散受限制而变慢.     

南亚热带常绿阔叶林种间联结测定技术研究——Ⅰ.种间联结测式的探讨与修正

本文基于2×2联列表,应用联结系数、共同出现百分率、点相关系数以及x~2统计量度量等常用公式,测定了鼎湖山厚壳桂(Cryptocarya chinensis)群落的15个主要种群的种间联结性。并以半矩阵、全矩阵阳星座图等图形表达测定结果。研究结果表明,上述技术均适用于南亚热带常淋阔叶林的种间联结测定。但在一个群落内的种间联结测定是以联结系数和x~2统计量较佳,在多个群落间的种间联结测定,共同出现百分率的效果亦较理想。本文较完整地推导了x~2统计量度量公式。同时指出当某个种出现频率为100%时,应用某些测式如将b、d值加权为1,效果则更佳。     

产蛋白酶枯草杆菌的选育及应用研究——Ⅱ.N1025菌产酶条件与酶性质的初步考察

本文报道产蛋白酶菌株枯草杆菌N1025的产酶条件及酶性质的初步考察。在45℃培养,最适产酶时间为20小时,培养基以自然pH为好,CaCl₂、MgSO₄、FeCl₃及CaCO₃有促进产酶作用,尿素、(NH₄)₂SO₄及NaNO₃对产酶有明显的抑制作用。以酪蛋白为底物,在45℃时,pH7—8酶活性较高;在52—55℃,出现pH 7及9两