猪皮胶原蛋白水解产物中的抗氧化活性肽的分离及其氨基酸组分

利用不同蛋白酶水解猪皮胶原蛋白,根据水解产物对自由基的清除率,筛选最适蛋白酶的组合,筛选抗氧化活性较高的肽类,并进行氨基酸分析.结果表明:胃蛋白酶→木瓜蛋白酶→菠萝蛋白酶为酶解胶原蛋白的最佳组合;分离纯化得到了三种具有较高抗氧化活性的肽;氨基酸组分分析显示:P1′、P2′和P3′组分具有自由基清除作用的关键氨基酸甲硫氨酸、酪氨酸和组氨酸等.     

高压脉冲电场辅助酶法提取鹿托盘胶原蛋白北大核心CSCD

为了提高鹿托盘中胶原蛋白的提取率,采用高压脉冲电场技术辅助胃蛋白酶的方法提取胶原蛋白。以胶原蛋白提取率为指标,通过对胃蛋白酶添加量、脉冲数和电场强度进行单因素考察,采用正交实验对胶原蛋白提取条件进行优化。优选出鹿托盘胶原蛋白的最佳提取条件为:胃蛋白酶添加量2%、脉冲数8、电场强度20k V.cm-1,在该条件下鹿托盘胶原蛋白的提取率可达到(73.27±0.73)%。与普通酶法相比,高压脉冲电场辅助提取胶原蛋白的得率比普通酶法提高了10.34%,且处理时间较短。聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明所提取的胶原蛋白由α1、α2和β-亚基组成,结构特征表明胶原蛋白具有完整的螺旋结构和Ⅰ型胶原蛋白的特性。该研究可为高压脉冲电场用于胶原蛋白的提取提供理论参考。     

高压脉冲电场辅助酶法提取鹿托盘胶原蛋白

为了提高鹿托盘中胶原蛋白的提取率,采用高压脉冲电场技术辅助胃蛋白酶的方法提取胶原蛋白。以胶原蛋白提取率为指标,通过对胃蛋白酶添加量、脉冲数和电场强度进行单因素考察,采用正交实验对胶原蛋白提取条件进行优化。优选出鹿托盘胶原蛋白的最佳提取条件为:胃蛋白酶添加量2%、脉冲数8、电场强度20k V.cm-1,在该条件下鹿托盘胶原蛋白的提取率可达到(73.27±0.73)%。与普通酶法相比,高压脉冲电场辅助提取胶原蛋白的得率比普通酶法提高了10.34%,且处理时间较短。聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明所提取的胶原蛋白由α1、α2和β-亚基组成,结构特征表明胶原蛋白具有完整的螺旋结构和Ⅰ型胶原蛋白的特性。该研究可为高压脉冲电场用于胶原蛋白的提取提供理论参考。     

胶原蛋白酶产生菌的筛选及酶的分离纯化

从堆积骨骼的土样中筛选出高产胶原蛋白酶的MBL13菌株,经鉴定为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus。对其所产的胶原蛋白酶BCC进行分离纯化,并进行酶学性质的研究。从菌株的发酵液中纯化出分子量约为38.0kDaBCC酶。酶反应的最适温度为40℃,最适pH为8.0。在50℃以下稳定,60℃保温1h酶活仅保留10%;在pH7.0～8.5活性较稳定;金属离子Ca2+、Zn2+、Mg2+对酶有激活作用,金属离子Cu2+对酶有显著的抑制作用。EDTA和EGTA能抑制该酶,表明BCC酶为一种金属蛋白酶。酶的底物特异性表明该酶为骨胶原蛋白酶,且对Ⅰ型骨胶原蛋白水解能力极显著高于Ⅱ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白。将纯化的BCC酶应用于骨胶原蛋白的水解可以得到不同链长的多肽,其水解能力高于标准品胶原酶Ⅰ型。本研究为工业酶提供了新的菌株和新型胶原蛋白酶,为胶原蛋白酶的开发提供了重要的理论依据。     

定向酶解大豆7S蛋白及其ACE抑制活性的研究

以"活性肽搜寻与蛋白模拟水解数据库"为工具,选择胃蛋白酶+胰蛋白酶和碱性蛋白酶对大豆7S蛋白进行模拟水解,得出不同水平的ACE抑制肽肽段,并通过实验比较以上蛋白酶水解物ACE抑制活性的高低。模拟水解结果表明,胃蛋白酶+胰蛋白酶水解大豆7S蛋白得到较多的ACE抑制肽肽段,实验结果表明,碱性蛋白酶水解物ACE抑制活性最大,为73.0965%。     

水产废弃物胶原蛋白的提取

以水产废弃物为原料,利用酶法提取有价值的胶原蛋白。以胃蛋白酶为胶原蛋白提取用酶,鱼鳍和鱼鳞作为提取的原料,提取工艺为原料粉碎、脱钙、提取、纯化。鱼鳞和鱼鳍的胶原蛋白提取率分别达8．1％和6．6％。该方法对提高水产废弃物的综合利用具有重要的意义。     

重组胶原蛋白在表皮修复中的作用机理研究

为探究重组胶原蛋白（RHC）用于表皮创伤修护的作用机理,按照国标方法对RHC促进细胞生长、细胞迁移、细胞黏附、促进组织吸收胶原蛋白的各项能力展开研究。结果显示,RHC促进细胞生长的起效量为0.0025%;以0.1%浓度为例,RHC在2 h内即有显著的细胞修复能力,24 h RHC细胞修复比海洋胶原蛋白高21.1%;RHC浓度越大,细胞黏附增强,0.05%的RHC细胞黏附率大于40%,表现出优良的细胞黏附性能;透皮性实验显示RHC促进组织对胶原蛋白的吸收能力优于市售普通胶原蛋白。     

几种蛋白酶对文蛤肉的酶解工艺条件研究

以文蛤为原料,水解度为指标,从胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,胃蛋白酶和风味蛋白酶中选出水解效果较好的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶.并通过实验确定了胰蛋白酶,木瓜蛋白酶单酶水解及两者组合复合酶解文蛤肉的最佳工艺.结果表明:复合水解效果最佳.最佳工艺:先添加胰酶6000 u/g(原料),水解温度50℃,固液比1:3(V/W),pH 8.0,在此条件下水解6 h;然后改变条件,温度55℃,pH 5.5,底物浓度1:3(V/W),添加木瓜蛋白酶2000 u/g(原料),在此条件下水解2 h.通过实验验证,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合在该条件下对文蛤肉蛋白具有较好的水解效果,其水解度为28.15%.     

林蛙皮胶原蛋白的提取及其生物学特征分析

目的:建立林蛙皮胶原蛋白低温提取及纯化方法,保证胶原蛋白的活性,并对其生物学特性进行初步探讨。方法:采用低温酸酶提取结合的方法提取林蛙皮中的胶原蛋白,并对提取过程中过氧化氢的加入量进行考察;对纯化的胶原蛋白进行含量、相对分子质量分布等定性及定量检测,同时观察其对间充质干细胞增殖情况的影响。结果:在4℃经脱色脱脂处理(过氧化氢浓度为0.025%)后,用0.5 mol/L的醋酸提取48 h,沉淀再分别用0.67%、1.34%、2%的胃蛋白酶提取,在此工艺条件下,酸溶性胶原蛋白(ASC)的提取率为8.77%±0.44%,纯度为75.83%±3.78%;酶溶性胶原蛋白(PSC)的提取率为30.69%±0.83%,纯度为66.39%±1.79%。紫外扫描图谱表明提取物具有胶原蛋白的特征吸收。SDS-PAGE分析表明所得ASC与PSC均由2条α1链与1条α2链组成,为保持了三股螺旋结构特征的Ⅰ型胶原蛋白。对细胞生长影响的实验表明,ASC与PSC在0.05~20 mg/m L浓度范围对间充质干细胞的生长无抑制作用,并且在某些浓度下具有促进干细胞增殖的作用。结论:低温酸酶法可高效提取林蛙皮粉中的胶原蛋白,提取的胶原蛋白具有良好的生物学活性,本方法及提取的胶原蛋白在组织工程等领域具有良好的应用前景。     

乌贼皮胶原蛋白的提取及结构表征

为了充分利用乌贼加工废弃物,分析了乌贼皮的基本组成成分,优化了从乌贼皮中提取胶原蛋白的工艺条件,并利用SDS-PAGE垂直电泳、紫外扫描和傅里叶变换红外光谱对所提取的胶原蛋白进行了结构表征.结果表明,乌贼皮中含有大量胶原蛋白,可作为胶原蛋白来源的补充.采用酸酶复合提取胶原蛋白的最佳条件为:酒石酸浓度为0.1mol/L,胃蛋白酶添加量为1400U/g,料液比为1:20(m:V,原料),4℃提取18h,提取率为12.08％.SDS-PAGE垂直电泳、紫外扫描和傅里叶变换红外光谱的结果表明,采用酸酶复合法从乌贼皮中提取的胶原蛋白为I型胶原蛋白,保持了完整的三螺旋结构.