球孢白僵菌在红火蚁体表侵染的扫描电镜观察

利用扫描电镜观察了球孢白僵菌Beauveria bassiana Bb04菌株分生孢子对红火蚁Beauveria bassiana 工蚁体壁的侵染过程。结果表明: 分生孢子多分布在红火蚁工蚁节间膜、胸部的褶皱、气门、体壁的凹陷部位、刚毛窝附近, 以及着生较密刚毛的足上。萌发的分生孢子在节间膜以及体表缝隙、刚毛窝及刚毛稀少的凹陷部位、胸部褶皱和足胫节处入侵。分生孢子在附着12 h后开始萌发, 接种后18 h附着在节间膜处的孢子首先侵入成功, 接种后24 h刚毛窝附近孢子萌发入侵, 接种后60 h胸、腹和足等部位的孢子均成功穿透侵入表皮。分生孢子可以直接以芽管侵入表皮, 也可以产生附着胞再侵入。     

球孢白僵菌不同感染方式侵染棉铃虫幼虫的毒性比较及组织病理变化

为明确球孢白僵菌在不同感染方式下对棉铃虫的侵染能力, 采用饲喂法和浸渍法测定了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner) 2龄幼虫的致病力, 并通过组织切片显微技术、 扫描电镜技术观察了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫的致病方式。结果表明: 白僵菌HFW-05可通过消化道（饲喂法）成功侵染2龄棉铃虫, 接种感染6 d后的校正死亡率为75.8%。经由体表（浸渍法）接种白僵菌HFW-05的试虫, 试验中体重的变化和取食量与对照相近（6 d校正死亡率仅为17.3%, 不能通过体表达到致病效果）。组织病理学变化表明: 26±1℃条件下, HFW-05菌株对棉铃虫以消化道侵染为主, 侵染后可导致寄主中肠微绒毛脱落严重, 肠壁组织溶解并最终只剩余底膜; 马氏管变形萎缩, 边缘向外突出隆起, 管径变大; 脂肪体萎缩解体, 结构松散; 表皮下的细胞被菌丝侵染破坏。浸渍法接种的试虫, 切片观察处理6 d后试虫, 体内未发现菌丝, 肠壁组织正常完整。扫描电镜观察, 浸渍法接种的分生孢子未能穿透棉铃虫表皮, 而是贴于寄主表皮表面生长, 在湿度合适的条件下, 菌丝生长到一定时间后断裂成为芽生孢子。白僵菌HFW-05可经由消化道对棉铃虫达到较高的致病效果, 在一定程度上弥补外界环境对白僵菌侵染的不利影响, 对今后应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。     

球孢白僵菌对温室蚜虫的侵染生物学

研究了球孢白僵菌在不同浓度、施菌方式、温度和相对湿度下对温室蚜虫的侵染力以及接种后对蚜虫的侵染速率。结果表明,高(109个孢子.mL-1)、中(108个孢子.mL-1)、低(107个孢子.mL-1)3个浓度剂量对蚜虫都有较强的致病力,且浓度越大,蚜虫的死亡率越高,死亡时间越提前。用浸渍法和孢子浴法接种蚜虫,6 d的累积死亡率分别为100%和31.1%。在测试的3个温度(22、26、30℃)中,26℃时蚜虫侵染力最强,第3天出现死亡高峰,第5天时累积死亡率就达到100%,明显高于22、30℃的处理。相对湿度越大,球孢白僵菌的致病力越强,蚜虫死亡速度越快。在温湿度组合中相对湿度为95%时,温度对白僵菌的侵染力几乎无影响,但影响发病速度,相对湿度低于95%时,26℃的侵染力始终高于22和30℃时的侵染力。通过接种后不同时间段用0.2%百菌清处理蚜虫测定该菌株的侵染速率,结果表明接种后24 h是该球孢白僵菌有效侵染蚜虫的关键时期。     

球孢白僵菌的侵染特性及应用研究进展

球孢白僵菌是一种重要的虫生真菌,具有致病力强、侵染范围广、安全无污染等优点,其制剂可作为一种真菌类杀虫剂应用于农林业害虫的防治,也可用于人工生产中药材僵蚕。本文综述了球孢白僵菌的培养性状、侵染特性、应用生产和存在的问题,并提出了发展对策,为球孢白僵菌的进一步开发应用提供参考。     

草菇VvLaeA调控球孢白僵菌的生长发育

食用真菌草菇[Volvariella volvacea(Bull.ex.Fr.)Sing.]VvLaeA在调控真菌发育方面的功能并不清楚。本研究在对草菇VvLaeA进行生物信息学分析基础上,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法将超量表达启动子Vvgpd和草菇VvlaeA基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)进行融合,并将融合片段克隆入pK2(bar)载体。采用农杆菌介导的转化方法将重组载体pK2(bar)-OEVvlaeA转入球孢白僵菌中进行表达,测定转化子的菌株发育情况。结果表明,草菇VvLaeA与其他真菌的蛋白同源性较低;和野生型相比,转化菌株的菌落直径显著增大,色素减少,分生孢子产量和萌发率均显著下降,对胁迫反应的敏感性增强。进一步研究发现,转化菌株分生孢子的细胞壁结构成分发生改变,和分生孢子发育相关基因的表达被显著下调。提示草菇VvLaeA能提高球孢白僵菌菌株的生长速率,而负调控色素沉积和分生孢子发育,这为草菇基因功能鉴定提供了启示。     

球孢白僵菌对桃蚜接种后特定时间内的侵染率

用球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)BBSG870 2菌株的分生孢子悬液 (5× 10 6个·ml-1孢子 )对桃蚜 (Myzuspersicae)始产若蚜的成蚜进行表面接种 ,在接种后 5 6h内 ,每隔 8h取样用 0 .2 %百菌清处理蚜虫 ,使其体表残存的孢子全部失活 ,分别置于 10℃和 2 0℃下逐日观察感染引起的死亡 .结果表明 ,10℃下接种后 5 6h、2 0℃下接种后 40h内各时间段有效侵染引起的死亡率相互间存在显著差异 ,并与不用杀菌剂的对照处理差异显著 (P <0 .0 5 ) .与对照相比 ,接种后 8、16、2 4、32、40和 5 6h内 ,10℃下的有效侵染率分别为 2 2 .9、48.8、6 4.9、80 .4、72 .7和 98.3% ,2 0℃下分别为 31.6、48.8、5 8.6、86 .9、97.2和 98.7% .由此表明 ,在 10～ 2 0℃范围内 ,接种后 2 4h内是该菌有效侵染桃蚜的关键时段 ,有效侵染率达 5 9～ 6 5 % .     

球孢白僵菌在棉铃虫表皮上萌发的研究

在扫描电子显微镜下,观察了球孢白僵菌三株不同毒力菌株的分生孢子在棉铃虫幼虫表皮表面的萌发,发现高、低毒力菌株的分生孢子都能在棉铃虫幼虫表皮上萌发和生长,但高毒力菌株的萌芽管伸长至分生孢子长径的1.5～2.5倍时能发生定向生长,垂直向里穿透表皮,低毒力菌株的萌芽管呈蔓延生长,极少有穿透表皮的发生,偶见极度伸长的菌丝穿透表皮。此外,还发现球孢白僵菌穿透菌丝穿透表皮的过程不是垂直向里一步完成的。     

利用冷冻切片对球孢白僵菌侵染西花蓟马过程的观察

为探索球孢白僵菌对西花蓟马的侵染,研究球孢白僵菌在西花蓟马体表和虫体内的侵染过程,采用冷冻切片与HE染色技术,对被球孢白僵菌侵染的西花蓟马成虫进行组织切片及HE染色。结果表明,接菌4 h,体表粘附的孢子开始萌发,8-12 h芽管继续伸长并出现穿透体壁。18 h虫菌体出现在西花蓟马体内,球孢白僵菌成功侵入西花蓟马体内。之后,西花蓟马体内虫菌体、菌丝明显增多,各组织器官均受到感染,消化道、肌肉组织等发生病变。     

普通齿蛉幼虫的呼吸系统及呼吸行为

研究了普通齿蛉Neoneuromus ignobilis Navás幼虫的呼吸系统及其呼吸行为。结果表明:普通齿蛉幼虫为全气门式(10对气门)呼吸系统,前中胸、中后胸之间、腹部8节各有1对气门,腹部8节各有气管鳃1对,前6对细短,管状,有较短绒毛,后2对气管鳃较粗长,呈羽毛状。腹部1～7节各有1对毛簇,第8腹节无毛簇。侧纵干气管较粗,4束,自前胸前缘部分成左右2组,每组两根侧纵干气管,向胸腹部延伸,二级气管分别伸达各个气门和毛簇,腹部每节由毛簇处的二级气管分支而来的三级气管相连或延伸至消化道等处。气管鳃中无气管。有毛簇呼吸、气门呼吸和体壁呼吸3种呼吸方式,在水中以毛簇呼吸为主,在陆上进行气门呼吸和体壁呼吸。     

球孢白僵菌对桃蚜及其两种捕食性天敌的影响

从自然感病的温室桃蚜上分离到一株球孢白僵菌Bb21,测定了该菌株对桃蚜的致病性及其对两种捕食性天敌的影响.结果表明:Bb21菌株对桃蚜的致病力强,LD5o为97孢子·mm-2,95％置信区间为45～191孢子·mm-2;对草蛉2龄幼虫有较弱的致病性,LD50为1089孢子·mm-2,是桃蚜的11.2倍;对异色瓢虫致病性极小,高浓度处理(5×108孢子·mL-1)的平均感染率仅为l3％.该菌株低浓度处理对两种捕食性天敌的发育历期和生殖力均无显著影响,但高浓度处理(5×108孢子·mL-1)使异色瓢虫的幼虫期平均缩短1.4d,羽化率降低33％,产卵量减少14％,使普通草蛉的幼虫期平均缩短0.7d,羽化率降低24％,产卵量减少11％.该菌株对桃蚜的半致死剂量远低于对两种捕食性天敌的半致死剂量,并且在防治桃蚜使用浓度下对两种捕食性天敌成虫羽化率和繁殖力的影响极小,可作为温室桃蚜的生物控制因子在有害生物综合治理中应用.     

普通齿蛉幼虫的消化系统结构和取食分析

研究了普通齿蛉Neoneuromus ignobilis Navás幼虫消化系统的解剖和电镜扫描结构,并结合肠道内食物残渣的成分分析了其取食特性.结果表明,普通齿蛉幼虫消化系统较为简单,无特殊的变异,消化道细长,由前肠、中肠和后肠构成,前后肠较长,分别占体长的42%和47%,中肠最短,仅占总长度的11%.前肠由食道、嗉...     

普通齿蛉幼虫的游泳行为（英文）

为了探究广翅目昆虫幼虫在水中的游泳能力, 以丰富其水生习性的行为学资料, 选取中国特有种普通齿蛉Neoneuromus ignobilis幼虫为研究对象, 通过室内试验对其游泳的姿势、 刺激因素、 不同龄期游泳能力及在外界刺激下的游泳行为进行了观察和测定。结果表明： 普通齿蛉幼虫有垂直、 平行、 仰面和侧面等4种游泳姿势, 出现的频率分别为89.08%, 5.49%, 4.40%和0.61%。游泳时身体呈不同程度的“S”形, 利用头部和尾部方向的改变实现虫体的上升、 下沉和游泳姿势的改变。普通齿蛉幼虫利用身体的摆动游泳, 游泳时3对足以固定的姿势靠紧身体。不同龄期的幼虫游泳能力差异很大, 6龄幼虫的游泳能力远强于2龄和末龄幼虫。在游泳时, 普通齿蛉幼虫还具有比较复杂和独特的防御行为, 如其腹部末端会喷射出化学物质。据此认为, 普通齿蛉拥有较强的游泳能力, 有助于其逃生和防御。     

球孢白僵菌固态罐发酵产孢培养的研究

建立了一套两升圆柱体玻璃发酵罐的固态通风培养装置及通风系统。以球孢白僵菌Bb371为生产菌,培养基220g(82％麸皮 4．5％黄豆粉 4．5％玉米粉 9％稻壳)作为生产原料,接种30ml,23℃培养温度下,分阶段调节通风量和空气湿度,培养5d,产孢量可达到116亿／g干培养基。     

利用RAPD-PCR检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异

采用PCR-RAPD技术研究了球孢白僵菌2株野生型多孢株及其各1株单孢分离株的 RAPD扩增片段的多态性,比较了彼此间的相似率。结果显示,相似率在63.6～99.3％之间变化很大,表明各分离子间的基因组DNA已发生变化。球孢白僵菌与另一种白僵菌布氏白僵菌之间的相似率在64.9％～80.9％之间,与粘孢白僵菌之间的相似率在50.0～61.9％之间。     

球孢白僵菌侵染中黑盲蝽致病过程的电镜观察

[目的]为揭示白僵菌Beauveria bassiana对中黑盲蝽Adelphocoris suturalis的致病机制,并探索盲蝽生物防治的有效方法.[方法]本文利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察白僵菌菌株Bb-Ⅷ对中黑盲蝽成虫的侵染过程.[结果]接种白僵菌后,其分生孢子在中黑盲蝽的体壁褶皱、凹陷处或虫体连接部位附着;接种16 h后分生孢子萌发产生芽管,并借助机械压力和酶的作用侵入中黑盲蝽体壁;36-72 h时,菌丝体相继侵入中黑盲蝽的肌肉组织、脂肪体和肠体绒毛内,并在昆虫血腔内进行出芽或分隔生殖;接种48 h后中黑盲蝽死亡,虫体内的菌丝体伸到体外并萌发成气生菌丝和分生孢子,继而布满虫体.[结论]白僵菌的附着受中黑盲蝽体表物理结构的影响,其分生孢子在接种48 h内完成对中黑盲蝽的寄生并最终导致虫体发病死亡,表现出较强的致病力.菌丝入侵的机械破坏力和酶类的水解作用是白僵菌对中黑盲蝽的重要致病因子.     

三株球孢白僵菌对栗实象甲幼虫的感染和致病力研究

为了明确球孢白僵菌Beauveria bassiana 3菌株TST05、FDB01、SYN01对栗实象甲老熟幼虫的感染、致死率、致死中时、以及胞外蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶的活性与毒力的关系,本研究采用3个菌株的孢子悬浮液(1.0×108孢子/m L),浸虫法感染栗实象甲幼虫,统计连续8 d的校正死亡率;以栗实象甲幼虫的虫体作为菌株的唯一碳源制备液体培养基,测定培养过程中各菌株的脂肪酶、几丁质酶、类枯草杆菌蛋白酶(Pr1酶)连续8 d的酶活性变化。结果表明,球孢白僵菌3个菌株TST05、FDB01、SYN01感染栗实象甲幼虫后,1-4 d内表现出染病和死亡的症状,连续8 d累积校正死亡率分别为40%、44.4%、62.22%,菌株SYN01对栗实象甲的致死率最高,与其他两菌株的差异显著;菌株TST05、FDB01、SYN01的Pr1酶活性最大峰值分别为(175.56±0.7)U/m L、(172.74±2.32)U/m L、(195.71±5.41)U/m L。几丁质酶活性最大峰值分别为(12.58±0.58)U/m L、(13.06±1.16)U/m L、(15.12±0.32)U/m L。都是菌株SYN01的酶活性最大,而TST05和FDB01之间差异不显著;球孢白僵菌3个菌株的Pr1酶、几丁质酶、脂肪酶在8 d内的酶活性平均值与染菌幼虫8 d累积校正死亡率的线性回归方程分别为y=0.4641x+122.45(R2=0.8854)、y=0.034x+10.473(R2=0.9328)、y=0.0354x+2.4586(R2=0.1201),说明菌株的Pr1酶和几丁质酶活性与幼虫死亡率之间呈显著的线性相关,而菌株的脂肪酶活性与菌株对幼虫的致死率不具有线性关系。综合分析,菌株SYN01可以作为生物防治栗实象甲的病原菌种;Pr1酶与几丁质酶的活性可作为菌株的毒力因子。