用电镜直接观察核酸分子的制样技术

脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)都是链状生物高分子。双链核酸1埃长度的平均质量为196—197道尔顿,如果DNA分子量为2×10~6,则其长度应为10~4埃,即1.0微米左右,如此巨大的分子在电子显微镜下完全应能观察到,主要问题在于如何克服生物高分子反差弱的困难和保持核酸分子在溶液中的构型。若在制样时能克服上述困难,则通过电子显微镜的直接观察,可以区分各种核酸的单链和双链,环状或支链等不同的形态,计算核酸分子的长度和分子量,     

用隧道扫描电镜直接观察DNA的碱基

当科学家正在用十分麻烦的化学方法分析人类基因组序列的时候,美国新墨西哥州的两位科学家用隧道扫描电子显微镜首次获得了DNA单个碱基的图象。他们的这一成功,使得人们梦寐以求的直接观察DNA序列的愿望更接近了现实。长期以来,不少科学家利用各种先进的电子显微镜对DNA进行观察,他们获得的只是DNA分子的螺旋形状。此次所获得的单个     

检测喹诺酮耐药大肠埃希菌DNA诊断芯片的开发和评估[英]／Yu XL…／／J Clin Micro biol．

大肠埃希菌是对喹诺酮类抗生素耐药最严重的菌种之一,DNA旋转酶A亚单位上的错义突变被认为是对喹诺酮耐药的主要原因。Yu等用DNA芯片技术,研制了一种诊断芯片,能从临床分离株中检测出对喹诺酮耐药的大肠埃希菌(简称大肠杆菌)。     

XeCl 准分子激光辐照生物大分子对其结构影响初步研究-Ⅰ308 nm紫外激光辐照小牛胸腺DNA的电镜观察与分析

XeCl 308 nm紫外激光(单脉冲输出能量33.4 mJ,脉冲频率 2次/秒,辐照时间45秒,光斑6×3 mm,透镜焦距300 mm)辐照330 mm处小牛胸腺DNA(固体).用扫描电子显微镜和透射电子显微镜可以观察到DNA受照射后有断裂、分叉、扭曲、聚集和交联等现象,影响生物大分子的初级结构和高级结构的变化.在我们的实验条件下是以影响DNA构象变化为主.     

苜蓿根瘤菌巨大质粒的观察与正确分子量的确定

采用在缓和条件下溶菌和蔗糖密度梯度离心等方法,分离出苜蓿根瘤菌(Rkizobium meliloti)菌株MV~2/1细胞内的全部DNA。用电子显微镜观察DNA部分时,可看到超卷曲的或呈松驰状态的完整巨大质粒和全部染色体。经测定DNA链的长度,利用经验公式正确地     

环氧树脂厚切片的染色

供电子显微镜观察的超薄切片,一般用各种环氧树脂作包埋剂。用环氧树脂的包埋头也能切成厚1—2微米的切片,供光学显微镜观察。这种厚度的切片与几百埃计算的超薄切片相对而言,可称之厚切片或半薄切片。在超薄切片之前,用环氧树脂包埋头先切     

鼠肝细胞核仁结构与rRNA基因转录位点研究

通过常规电子显微镜观察了鼠肝细胞核仁的超微结构,并采用NAMA-Ur细胞化学DNA特异染色方法分析了核仁中DNA的分布及其原位位置,直观的显示了鼠肝细胞核仁DNA来源于核仁伴随染色质,并在核仁DFC区域连续伸展,排布于FC的边缘部位及DFC区域中,进一步借助于RNA/DNA杂合体抗体选择性直接标记核仁中rRNA基因转录位点,结果表明了鼠肝细胞核仁rRNA基因的转录位点是在FC的边缘及DFC区域.     

利用流式细胞术研究大肠埃希菌对肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—16A3的作用

利用小鼠肝癌腹水瘤细胞Hca-F25/CL-16A3,运用流式细胞技术研究了大肠埃希菌对肿瘤细胞的作用,对细胞DNA含量的影响以及诱导细胞凋亡的作用,结果表明：大肠埃希菌在直接希伤肿瘤细胞的同时,还可以影响细胞DNA的含量,并可诱导细胞发生调亡。     

原子力显微镜拉伸吸附在金膜表面的短单链DNA分子

对单根DNA分子的操纵和拉伸可以直接研究DNA的弹性等力学性质. 首先通过将金沉积到云母表面制备了表面粗糙度小于0.3 nm的金膜,然后一段硫代的单链DNA (100 bases) 吸附到金膜表面. 利用原子力显微镜观察不同浓度的DNA吸附在金膜上的表面形貌. 进一步用原子力显微镜的力曲线模式拉伸DNA分子,在50％的情况下DNA可以被针尖拉伸,观察到了由于针尖和DNA分子间作用力的不同导致的多种不同力曲线.     

一种简单实用的适于大、小质粒的DNA提取方法

以Birabolm和Doly的质粒提取方法为基础,用醋酸铵取代醋酸钠,沉淀染色体DNA和RNA,用异丙醇取代乙醇沉淀质粒DNA,降低了质粒DNA标本中蛋白质和RNA的含量,减少了标本体积。并发现在质粒DNA标本中加入冷异丙醇或冷乙醇后,在-70℃、-20℃、-10℃、4℃和室温下作用,对质粒DNA的回收量无明显影响,在质粒DNA标本中加入冷异丙醇后,在4℃作用0、10、20和30分钟,对质粒DNA的回收量无明显影响。用该方法提取的质粒DNA可直接用于限制性内切酶消化。用该方法提取大肠埃希氏菌     

DNA及其蛋白质复合体的电镜观察及研究应用

对生物大分子形状的正确了解有助于对其功能的解析。事实上,借助于电子显微镜观察法,使我们在对构成细胞各组分功能的探讨和研究方面收益匪浅。自从生物学家们认识到DNA在细胞行使其功能中的重要性以来,电子显微镜便成为一种最重要的技术手段而被用于分析DNA的结构,研究DNA的复制、重组和转录机制。近年来,这一领域的研究技术又有了非常大的改进,使人们已经能够借助于电子显微镜,观察介入DNA复制、重组和转录等过程中的DNA蛋白质复合体的活体状态。今后,在对生物大分子的活体行为进行探讨时,电子显微镜技术将发挥越来越重要的作用。     

细胞的亚显微结构

一.前言自从电子显微镜发明并改进和提高了它的解象力,设计出了较满意的固定、包埋和切片方法,有可能切出薄到200埃厚度的组织切片以来,近十几年来在生物学和医学中已进行了许多方面的研究工作,并且得到了很显著的成绩。目前电子显微镜的解象力已达到10埃左右,与可见光显微镜比较(以下简称为光学显微镜,其解象力为0.2微米),提高了约二百倍。因此,在细胞构造方面观察到了许多以前未能见到的微细结构,并且提出了许多代表这些结构的新名词。     

染色质结构——组蛋白与DNA形成的重复单位

真核细胞染色质含有等重量的组蛋白和DNA。五种主要的组蛋白是F_1,F_2A_1,F_2A_2,F_2B及F_3,每一种组蛋白与100对DNA碱基组成一组(但F_1除外,它只与50对DNA碱基组成一组),每两组在染色质中形成重复单位。这个事实最早是从X射线衍射图发现细胞核中有相当清晰的带而证实的。从核中把染色质提取出来,它几乎是很纯的组蛋白和DNA的络合物。X射线衍射图看到的带表明重复单位沿着染色质长轴相隔约100埃出现。单独的组蛋白或DNA都不呈现X射线衍射带状图。X射线衍射图也看到染色质“超卷曲”结构。在DNA双螺旋的外面套了一个组蛋白外壳,卷曲成一个大螺旋,螺距长120埃,直径100埃(DNA本身的双螺旋长340埃,也就是每100个碱基对形成一个螺旋),染色质就是这样的单位的不断重复。     

DNA左手螺旋的意义

1979年底美国以里奇为首的一个研究小组用X射线衍射,在高达0.9埃的分辨水平上解析了一段人工合成的DNA晶体结构,结果发现了一种新的构象——DNA的左手螺旋。这个片段由六个交替的CG碱基对组成。1980年初     

基于图像信息处理的蒜核仁内DNA原位排布及其结构模型的研究

真核细胞核仁内的DNA超微结构对于阐述rRNA转录位点有着重要的意义.虽然已经有许多研究者对此提出了不同的观点,但是都是基于直接实验观察的.应用电子显微镜技术和改进的NAMA-Ur DNA特异染色方法,获得蒜核仁超微结构的图像,提出一种新技术定量分析核仁中DNA原位位置.为此,建立多尺度形态梯度算子方法,编制HEREN.CELL自动分析软件,从而抽取出核仁超微结构的精细轮廓,显示出核仁DNA的原位位置.同时,提出了DNA纤丝以“花瓣包迹”模式向中心外方向放射的结构模型.对电镜图像处理技术和核仁超微结构研究具有重大意义.     

pBR322 DNA的超螺旋波动

开环状pBR322 DNA在不同溴乙啶浓度下通过DNA联接酶转变为闭环状分子。除去溴乙啶后,每种样品中都含有一组超螺旋数即拧数(W_r)不同的闭环状分子。这些样品和天然pBR322DNA的W_r都直接用琼脂糖凝胶电泳加以分析和测定。作者观察到用同样的培养剂在37℃培养同一菌株所获得的不同pBR322DNA样品,其超螺旋数值可以在相当大的范围内波动。为了便于比较不同的超螺旋DNA,作者采用了一种新的单位——超螺旋跨距,它可能有助于进一步研究环状双链DNA的本质。     

pBR322 DNA的超螺旋波动

开环状pBR322 DNA在不同溴乙啶浓度下通过DNA联接酶转变为闭环状分子。除去溴乙啶后,每种样品中都含有一组超螺旋数即拧数(W_r)不同的闭环状分子。这些样品和天然pBR322 DNA的W_r都直接用琼脂糖凝胶电泳加以分析和测定。作者观察到用同样的培养剂在37℃培养同一菌株所获得的不同pBR322 DNA样品,其超螺旋数值可以在相当大的范围内波动。为了便于比较不同的超螺旋DNA,作者采用了一种新的单位——超螺旋跨距,它可能有助于进一步研究环状双链DNA的本质。     

美Cetus公司用单根毛发鉴定DNA

美国加州埃墨里维尔的Cetus公司通过科学文献不断地推销了它的DNA扩增技术。最近的《自然(Nature)》杂志(1988年,332卷,543～546页)介绍了这只用一根人或动物毛发进行DNA鉴定的技术。Cetus公司的研究人员说,即使不是现拔下来的而是已脱落的毛发,只要毛根(hair root)完整,此法仍然有效。试验采用公司的聚合酶链反应(PCR)技术,用了它,一个DNA样品经过足够次数重复就能增殖到一百万倍(见本刊1986年12月10日号     

洋葱细胞核仁内DNA的结构变化及排布过程(英文)

以洋葱 (AlliumcepaL .)细胞为研究材料 ,应用DNA细胞化学特异染色方法 (NAMA_Ur)及常规电子显微镜技术 ,观察了洋葱细胞核仁FC(纤维中心 )内DNA的超微结构 ,发现FC内DNA存在着一个介于集缩到解集缩之间的变化过程 ,并揭示了DNA在核仁内的连续排布过程 ,即核仁外DNA经过核仁通道进入到FC后 ,继续沿FC的边缘或DFC(致密纤维成分 )与FC的交界处环绕FC而排布 ,再经FC之间的核仁通道 ,延伸到另外的FC区域     

腺病毒介导的bak基因诱发肿瘤细胞的凋亡

构建了含ｂａｋ基因的转移载体ｐＣＡ１３－ｂａｋ,并用该载体和含有Ａｄ－５（人腺病毒５型）大部分基因组的重组质凿ｐＢＨＧ１１共转染２９３细胞（转化人胚肾细胞系）,分离并提纯缺陷型病毒Ａｄ－ｂａｋ。用该病毒感染ＨｅＬａ细胞（人宫颈癌细胞系）,相差显微镜、扫描电子显微镜直接观察到了典型的细胞凋亡形态,联蛋埃Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ－ＦＩＯＴ７凋亡试剂盒检测到原本位于细胞３膜内侧的磷脂酰丝氨酸向外播转,进一步证