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脑特异性金属硫蛋白—Ⅲ研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ)是富含半胱氨酸的低分子量蛋白,主要在脑内含Zn^2+神经元表达,与脑的发育过程有关。MT-Ⅲ可抑制体外培养的神经细胞生长和存活。MT-Ⅲ与Zn^2+的结合有相对特异性,可能影响依赖于Zn^2+的一系列生物活动。AD患者脑内MT-Ⅲ表达减少,敲除MT-Ⅲ基因的小鼠对红藻氨酸诱发癫痫更敏感,提示MT-Ⅲ可能在某些脑变性疾病中发挥作用。 相似文献
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兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型:ZnMT-Ⅰ和ZnMT-Ⅱ.在酸性条件下脱金属,经Sephadex G-25柱层析得到脱金属硫蛋白(apoMTs).用圆二色性(CD)光谱法研究,发现两种亚型apoMTs 与Pb2+ 的结合依赖于Pb2+ 的加入比例及pH 值.apoMT-Ⅰ在pH3~5之间,apoMT-Ⅱ在pH4~6之间与Pb2+ 结合形成特征簇合物Pb7MTs,其CD谱图特征峰位于316nm (- ),270 nm (+ ),245 nm (+ )及225 nm (- ),提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境.不同亚型apoMTs 与Pb2+ 的结合方式各不相同:Pb2+ 与apoMT-Ⅰ的结合采取平均分配的方式,而与apoMT-Ⅱ则为选择性结合方式,表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异. 相似文献
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本文以异硫氰基荧光素(FITC)作为荧光探针标记于金属硫蛋白分子上,用荧光光谱研究了Cd^2+及Ag^+离子与ZnMT2-FITC进行金属交换及与ApoMT2-FITC进行金属重组时的构象变化。结果表明,标记后MT与Cd^2+离子进行金属交换及金属重组时不具有明显的结构域特征,而Ag^+离子进行金属交换及金属重组时,分别在Ag6MT、Ag12MT及Ag18MT处具有明显的结构域形成特征。此外高温下 相似文献
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小鼠金属硫蛋白基因在丝状体蓝藻中的表达及对重金属抗性的提高 总被引:3,自引:0,他引:3
应用蓝藻类金属硫蛋白启动子(smtOP)的金属诱导性,在丝状体蓝藻鱼腥藻(Anabaenasp.PCC7120)中表达具有更高金属结合能力和对Cd2+有选择特异性的小鼠金属硫蛋白基因(mMTⅠcDNA)。构建穿梭表达载体pKTMRE并在大肠杆菌HB101中扩增,经三亲接合转移、链霉素筛选、DNA和蛋白质印迹等方法鉴定得到稳定的转基因工程蓝藻。转基因蓝藻对金属离子吸附能力和较高重金属浓度下放氧活性测定表明,外源基因的表达提高了蓝藻对重金属离子的抗性,是野生蓝藻的1.5~2.0倍。 相似文献
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锌_7-金属硫蛋白与镉_7-金属硫蛋白抗羟自由基保护线粒体效应 总被引:2,自引:0,他引:2
制备了Zn7-与Cd7-金属硫蛋白。分离出大鼠心肌线粒体。用电子自旋共振自旋标记方法测定线粒体膜脂流动性及膜蛋白构象、运动性。分析了线粒体Ca2+-Mg2+-ATP酶活性及45Ca摄入。羟自由基损伤使线粒体膜脂流动性下降,膜蛋白构象改变及运动性降低,线粒体Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低及45Ca摄入活性下降。Zn7-金属硫蛋白与Cd7-金属硫蛋白均有抗羟自由基、保护心肌线粒体的作用,且Zn7-金属硫蛋白的作用比Cd7-金属硫蛋白的作用更明显。原因是去金属蛋白对Cd2+的亲和力比对Zn2+高10000倍,因而在近pH中性的环境中,Zn7-金属硫蛋白将释放更多Zn2+,并暴露较多的还原态巯基。 相似文献
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植物类MT与植物络合肽 总被引:15,自引:0,他引:15
金属硫蛋白在哺乳动物的解毒方面民挥着重要作用,植物本身也存在类似的解毒机制。研究表明,植物存在基因编码的类MT,另外还有非基因编码的植物MT,又称植物络合肽,类MT在必需重金属离子(例如Zn^2+、Cu^2+)的代谢中挥着重要作用而植物络合肽在非必需重金属离子(例如Cd^2+)的解毒中起到关键作用。本文了类MT和植物络合肽之间的关系以及各自的生物合成途径、相关的结构与功能、在植物中的分布等。 相似文献
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Ca2+对叶绿体光还原活性的影响及与钙调素的关系 总被引:3,自引:0,他引:3
外加Ca^2+能有效地提高杂交水稻汕优63离体叶绿体的光还原活性,Ca^2+专一性螯合剂乙二醇双乙胺醚四乙酸(EGTA)抑制其活性,钙调素(CaM)抑制剂三氟拉嗪(TFP),Ca^2+通道阻断剂Co^2+,以及Zn^2+抑制离体叶素体的光还原活性,外加Ca^2+可以部分地减少TFP,Co^2+和Zn^2+抑制作用,叶绿体的光还原活性与Ca^2+和CaM密切相关。 相似文献
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通过荧光探针、酶的活力测定及对金属硫蛋白(MT)分子中金属与巯基配位键的特征吸收检测,比较研究了锌诱导兔肾不同亚型ZnMT使脱金属碳酸酐酶(ApoCA)复活的能力大小。结果表明,不同亚型ZnMT对ApoCA具有不同的反应活性,MT1比MT_2对于AnoCA的复活具有更强的反应活性,此结论与我们在研究不同亚型MT清除自由基时的结果相一致。这两种亚型MT在反应活性上的差异,很可能与其在生物体内功能上的分化密切相关。 相似文献
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二价铅离子与金属硫蛋白相互作用的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
通过紫外吸收光谱和平衡透析法研究了二价铅离子同脱金属硫蛋白(apo-MT)、锌-金属硫蛋白(Zn-MT)的相互作用,证实Pb(Ⅱ)是以金属巯基复合物(金属巯基比为1∶2)的形式同金属硫蛋白结合,表观离解常数(KD)为8.71×10-7mol/L.在自由铅浓度达到6.52×10-6mol/L的条件下,铅离子即可将Zn-MT上的Zn完全取代下来.通过EDTA、DTNB竞争反应、圆二色性(CD)光谱分析,认为Pb-MT的金属巯基复合物不同于Zn-MT中Zn与巯基形成的紧密的正四面体结构,而是可能形成一种三级结构相对松散、热力学上不稳定的Cys-S-Pb-S-Cys平面形结构.研究认为金属硫蛋白的两种亚型MT-Ⅰ、MT-Ⅱ与Pb(Ⅱ)的结合能力并无显著差异 相似文献
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芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 总被引:6,自引:0,他引:6
用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase 基因在大肠杆菌中得到表达。SDSPAGE 分析表达产物MTSase蛋白的分子量约为74kDa ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约4-4 % 。pSBGT1 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使DE 值降低,得到非还原糖或低还原糖。 相似文献
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低氧对培养的肺血管周细胞凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究低氧是否影响肺血管周细胞凋亡并参与腺泡内无肌肺动脉的构型重建, 用TUNEL法和免疫组化方法, 观察低氧(H) 组和低氧肺动脉内皮细胞条件培养液(HECCM) 组对肺血管周细胞凋亡发生率及抑凋亡基因bcl2 蛋白表达的影响。结果表明:H组和HECCM 组的凋亡指数明显较对照组减小。H 组和HECCM 组bcl2 蛋白的表达量分别是NECCM 组的117 倍、113 倍, 是N组的133 倍、127 倍。提示低氧诱导的抑凋亡基因bcl2 的过度表达, 对周细胞凋亡发生的抑制作用和低氧促进的周细胞增生过程可能都参与无肌肺动脉的构型重建, 与肺动脉高压的形成有关。 相似文献
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人神经生长抑制因子β结构域的高效表达及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
神经生长抑制因子( G I F)是一种特异存在于哺乳动物脑中的金属硫蛋白(m etallothionein, M T)类似物,又称 M T Ⅲ.它与 M T 有相同的结合 Zn(Ⅱ), Cd(Ⅱ), Cu(Ⅰ)等金属的能力,但与 M T 不同的是它能够抑制神经细胞的生长,并发现在患 Alzheim er disease( A D 症)病人的大脑中 G I F蛋白量和m R N A 的量均显著下降,研究证明 G I F对神经细胞的抑制活性主要存在于其 β结构域中.为进一步研究 β结构域结构和功能的关系,将 β结构域的 c D N A 克隆入融合表达载体p G E X 4 T 1 中, I P T G 诱导并高效表达了 β结构域蛋白,通过氨基酸组成和质谱的测定,证明得到了目的蛋白.利用金属重组的方法,分别得到了结合 Cd 和 Zn 的 G I F 的 β结构域,并测定了其巯基和金属含量对蛋白量的比值,证明所得 G I F β与 M T β在结合金属能力上十分相似.用紫外光谱学的研究表明, Cd M T 的 β结构域在250 nm 处比 Cd G I F 的 β结构域有一明显肩峰,从而表明二者的金属—巯基结合簇的结构有明显不同,而这种结构上的差异有可能导致二者在功能上的不同. 相似文献
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MRL lpr/lpr自发狼疮鼠血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及其在发病中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体在系统性红斑狼疮发病中的作用。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)的方法检测MRLlpr/lpr自发狼疮鼠和MRL系小鼠8和18周时肾、心、肺、肝、脑、垂体、肾上腺、睾丸、卵巢和子宫组织中血管紧张素ⅡAT1A、AT1B和AT2受体的基因表达。结果:在18周龄MRLlpr/lpr小鼠肾、心、肺、肝、脑和睾丸等明显受损伤的组织中,AT1A受体的mRNA表达有显著升高,而AT1B和AT2受体的基因表达与MRL小鼠8和18周时及MRLlprl/lpr小鼠末发病(8周龄)时比较则无明显改变。应用血管紧张素转化酶抑制剂盐酸苯那普利治疗后,18周龄MRLlpr/lpr小鼠的尿蛋白和肾、心、肺、肝、脑和睾丸组织中AT1A受体的mRNA水平显著降低,但上述脏器的病理损伤无明显减轻。结论:AT1A受体参与了狼疮导致的多脏器损伤过程并起到一定作用。 相似文献
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脱金属硫蛋白与二价汞离子的络合作用及构象研究 总被引:5,自引:1,他引:4
用圆二色谱研究兔肝锐金属硫蛋白的两个亚型apo-MT1、apo-MT2与Hg^2+在不同分子数比和pH值下的络合规律。发现:(1)在pH2下与Hg^2+重组MTs的CD谱特征峰是304nm(+),260nm(-),250nm(+)。络合Hg^2+的数目n远远超过7。任何pH值下过量Hg^2+的存在都将破坏MTs的正常构象。pH值对形成和维持MTs稳定构象的影响很大,当pH≥4.9时,apo-MTs 相似文献
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人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达 总被引:16,自引:1,他引:16
用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),以人胎肝组织总RNA为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,ZnSOD)的cDNA,并进行序列分析,将该hCu,ZnSODcDNA重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDSPAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为19kD的蛋白质,与抗人SOD多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的30%,具有特异性SOD酶活性,酶活力可达1797u/ml培基。 相似文献
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将马铃薯Y病毒普通系(PVY0)的外壳蛋白基因克隆到表达质粒pMALc2中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体pMALc2PVY0CP。SDSPAGE及Westernbloting检测结果表明,这一表达栽体在E.coliDH5α中经IPTG诱导可表达分子量为71.8kDa的特异性融合蛋白。以amyloseresin亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为1∶1024的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Westernbloting对PVY进行检测 相似文献
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用电泳迁移分析方法研究了21nt脱氧寡核苷酸G3TG2TGT2G5TG2TGT(CP1)与129bp的乙肝病毒(HBV)核衣壳启动子(Cp)片段内一位点结合形成的三链DNA的特异性及稳定性.在克隆有HBV基因组的质粒pCP10的酶切产物中,CP1仅与含Cp的129bp片段结合.在20mmol/LMg2+溶液中其解离常数(Kd)为1.4×10-7mol/L.不同离子稳定三链DNA的效果依次为sp4+(精胺)>Mg2+>Zn2+>Na+>K+,离子之间存在相互竞争作用.比CP1多一误配碱基的脱氧寡核苷酸G2TG2TGTG3TG2TG2TG2T(CP2)在20mmol/LMg2+溶液中与Cp结合的Kd值约为CP1的1/7,而在60mmol/LK+或5mmol/LZn2+溶液中检测不到它与Cp的结合,这进一步显示了三链DNA形成的特异性.细胞的生理离子浓度被认为是:Sp4+1mmol/L,Mg2+10mmol/L,K+140mmol/L,因此,CP1在细胞内将能特异地与Cp结合并具有较好的稳定性. 相似文献
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猫头端延髓腹外侧区微量注射内皮素—1对心脏节律的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的和方法:本工作采用脑立体定位和微量注射的方法,研究猫头端延髓腹外侧区(rVLM)微量注射内皮素1(ET1)对心脏节律的影响。结果:在正常心脏,rVLM内微量注射ET1(2pmol)不引起心脏节律的紊乱;在缺血心脏,rVLM内微量注射ET1则引起严重的心脏节律的紊乱,美托洛尔(metoprolol,1.5mg/kg,β1肾上腺素能受体阻滞剂)对其不能完全有效地抑制。结论:中枢内ET1可能在心肌缺血时,对心律紊乱的发生、发展起重要作用 相似文献