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将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT-PCR三种方法应用于水稻草矮病毒(RGSV)的检测。结果表明,利用自制的融合蛋白GST-NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为1mg鲜重的病株叶片或84ng提纯病毒,利用地高辛(DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法检测RGSV的灵敏度为50μg病叶或6ng病毒,而RT-PCR的检测灵敏度则为10μg病叶或2ng的病毒,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行 相似文献
3.
将含有鸡传染性支气管炎病毒 S1 基因c D N A 的重组转移质粒p S X I V V I+ X3 S1 . Holte 和p S X I V V I+ X3/4 S1 . Holte 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Tn N P V S V I- G D N A( O C C- ,gal+ ) 共转染草地夜蛾( Sf9) 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 和 Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 。将重组毒株分别感染 Tn5 B1 细胞,并进行 S D S P A G E 与 Westernblot 检测。结果表明, Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 在感染的细胞中高效表达了 S1 蛋白, S D S P A G E 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后72 h S1 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的35 .8 % ,而 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 感染的细胞内检测不出 S1 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 S1 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。 相似文献
4.
将马铃薯Y病毒普通系(PVY0)的外壳蛋白基因克隆到表达质粒pMALc2中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体pMALc2PVY0CP。SDSPAGE及Westernbloting检测结果表明,这一表达栽体在E.coliDH5α中经IPTG诱导可表达分子量为71.8kDa的特异性融合蛋白。以amyloseresin亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为1∶1024的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Westernbloting对PVY进行检测 相似文献
5.
以 P R R S V 弱毒株膜蛋白( M) 和核衣壳( N) 蛋白基因为模板,设计的一对含有 Eco R I 和 Bam H I酶切位点的引物,通过 R T P C R 扩增出一约900 bp 的 M N 基因片段,将此基因片段成功克隆于高效表达载体p B V220 ,构建成重组质粒p B V M N,导入大肠杆菌 D H5α,经温敏诱导,成功地表达了 M N 基因。表达产物经 S D S P A G E 电泳和 Western blot 印迹分析,其分子量约34 k D,与兔抗 P R R S V 高免血清发生反应,经光密度扫描分析,表达产物量占菌体总蛋白的12 % 。该研究为 P R R S 基因诊断抗原的研制奠定了基础 相似文献
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高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)接种到I.setosa上扩繁,以0.2mol/LpH7.2PBK缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化SPFMV。纯化的SPFMVOD260/280的比值为1.25。将纯化的SPFMV免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为1:4096;以SPFMV-IgG为第一抗体,应用Dot-ELISA对甘薯和I.selosa叶片中的SPFMV分别作了测定。 相似文献
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根据小麦黄花叶病毒( W Y M V) 核苷酸序列测定结果,将 W Y M V R N A2 上的28 k Da 蛋白基因克隆到p E T11a 上,构建了原核表达载体p E2839 。 S D S P A G E 分析表明,经 I P T G 诱导,28 k Da蛋白基因在大肠杆菌 B L21( D E3)p Lys S 中得到高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒 R N A2 蛋白特异性抗血清。 相似文献
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酵母菌SH2发酵产物增强干扰素抗病毒活性及其有效成分的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
酵母菌 S H2 发酵产物( 简称 F S H2) ,用 Sephadex G75 凝胶层析和 H P L C 色谱层析分离纯化,收集到一组蛋白。该组蛋白在 P A G E 和 S D S P A G E 电泳上带型一致,无蛋白亚基,分子量范围为52 ~72 k D。凝胶上糖蛋白的特异性染色——— Schiff’s 染色显示阳性染色带;用 Lowry’s 法测蛋白和硫酸酚法测糖,显示蛋白与糖的比例约为3∶1 。该组蛋白与人α干扰素作用,增强干扰素生物学效价分别为1 .6 ~2 .8 倍和1 .4 ~4 .0 倍;经 Sephadex G75 凝胶层析的 F S H2 蛋白洗脱峰增效2 .01 ~5 .68 倍;发酵液增效1 .64 ~6 .86 倍。并证实酵母菌 S H2 增效干扰素的活性成分为52 ~72k D 分子量范围的胞外糖蛋白( 简称 Y E G Ps) 。 相似文献
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球形幽门螺杆菌分子生物学研究 总被引:5,自引:1,他引:4
为研究幽门螺杆菌(HP)球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使3株HP发生球形变异,对弯曲形和球形HP作了SDS-PAGE、免疫印迹及4个毒力基因片段PCR和PCR-SSCP分析。SDS-PAGE图谱显示球形HP分子量在74×104以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形HP125×104蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形HP分子量为11×104和63×104的蛋白条带反应增强。PCR及PCR-SSCP结果表明球形HP的hpaA,VacA,CagA和UreA4个毒力基因片段未发生缺失,但在hpaA或VacA基因中存在点突变 相似文献
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提纯的水稻条纹病毒(云南宜良分离物)在电镜下的形态为多型性,但主要是宽8-10 nm,长80-250的分枝丝状体,有些为直径3 nm或8 nm的开环环状体,有些为13 nm宽,130-190 nm长的丝状体,但其基本结构应是直径3 nm、长度不等的丝状体.经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,vRNA4编码的病害特异蛋白(SP)分子量为19.9 kDa,而vcRNA3编码的外壳蛋白(CP)约为33.6 kDa.在非变性条件下,RSV的4条ssRNAs大小分别为3.0×106(ssRNA1)、1.2×106(ssRNA2)、0.9×106(ssRNA3)和0.8×106 Da(ssRNA4),有时出现一条大小为0.58×106 Da的单链RNA(ssRNA5);而4条dsRNAs的分子量分别为4.9×106(dsRNA1)、2.8×106(dsRNA2)、2.0×106(dsRNA3)和1.7×106 Da(dsRNA4).利用制备电泳分离提纯的外壳蛋白免疫家兔,得到了高特异性的抗血清.A蛋白夹心ELISA检测结果表明,RSV-CP与水稻草状矮化病毒(RGSV)CP抗血清有微弱的反应,但与RSV、RGSV的SP抗血清没有反应,而RSV-CP抗血清与RSV-SP及RGSV的SP、CP都无血清学关系,这个结果表明RGSV与RSV之间在进化上具有一定的亲缘关系. 相似文献
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水稻草矮病毒NS6基因在大肠杆菌中的表达及植物表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
Large amount of disease-specific protein(SP) accumulated in the rice plant cells infected by rice grassy stunt virus(RGSV). It was deduced that the protein was encoded by NS6 gene on genomic vRNA6 and thus referred to as NS6 protein.But its function is unknown. In an effort to prove the above deduction and to elucidate the function of NS6 protein of RGSV, we constructed a bacterial expression plasmid pGTNS6 producing a fusion protein of glutathione S-transferase (GST) and NS6 protein, and a plant expression vector pCBTNSv6 containing NS6 gene. A recombinant plasmid pTNSv 6 containing the coding region of NS6 gene and the non-coding region at its 5' terminus, cloned by RT-PCR from purified RNAs of Shaxian isolate of RGSV, was used as the start point. Western blot analysis showed that the fusion protein reacted strongly with antisera raised against RGSV-SP, which served as evidence of the deduction.EHA105 of Agrobacterium tumefasciens containing pCBTNSv6 has been obtained and the transformation of rice is underway. 相似文献
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Rice stripe disease (RSD), caused by rice stripe virus (RSV), is a serious disease in temperate rice-growing areas. We have created an RNAi construct containing coat protein gene (CP) and disease specific protein gene (SP) sequences from RSV. The RNAi construct was transformed into two susceptible japonica varieties, Suyunuo and Guanglingxiangjing, to develop resistance against RSD. The homozygous progeny of rice plants in the T(5) and T(7) generations containing RNAi constructs, after self-fertilization were strongly resistant to viral infection. RT-PCR indicated that viral replication of SP and CP in the transgenic plants was significantly inhibited. There were no obvious morphological or developmental differences between the transgenic and wild-type plants from seedling stage to maturity. The excellent agronomic traits of these two varieties, such as high yield and good quality were maintained. Suppression of virus genes using RNAi is therefore a practical and effective strategy for controlling viral infection in crops. 相似文献
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水稻草矮病毒在水稻原生质体中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过建立水稻原生质体培养体系,经多聚鸟氨酸(PLO)介导将提纯的水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)接种到水稻原生质体内,利用酶联免疫吸附法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blot),研究RGSV在水稻原生质体内的生长周期及其编码蛋白的表达情况。结果表明: RGSV在接种后24h左右开始在原生质体内复制,36h左右达到最大值。NS6在15h左右开始表达,在30h左右达到最大值。 相似文献
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吴琪瑶;韦传宝;李进华 《植物研究》2013,33(1):73-79
根据GenBank报道的浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)、浙贝母Y病毒(Fritillary virus Y,FVY)和百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)序列设计引物,扩增其CP基因。将CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株,IPTG诱导表达。经12% SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP,分别免疫小鼠获得抗CP血清。采用Western blot分析确定抗体的特异性及其之间的血亲学关系;采用ELISA分析确定抗体是否能与天然病毒粒子结合。采用Western blot、间接ELISA法和Dot-ELISA 法检测侵染浙贝母的3种病毒。结果表明,制备的抗体对CP有高度特异性,相互之间无交叉反应,且能与天然病毒离子结合。制备的抗血清可以用于检测3种病毒,其中间接ELISA法和Dot-ELISA法检测效果较好。 相似文献
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Kelei Han Haijian Huang Hongying Zheng Mengfei Ji Quan Yuan Weijun Cui Hehong Zhang Jiejun Peng Yuwen Lu Shaofei Rao Guanwei Wu Lin Lin Xuemei Song Zongtao Sun Junmin Li Chuanxi Zhang Yonggen Lou Jianping Chen Fei Yan 《Molecular Plant Pathology》2020,21(12):1647-1653
The jasmonic acid (JA) pathway plays crucial roles in plant defence against pathogens and herbivores. Rice stripe virus (RSV) is the type member of the genus Tenuivirus. It is transmitted by the small brown planthopper (SBPH) and causes damaging epidemics in East Asia. The role(s) that JA may play in the tripartite interaction against RSV, its host, and vector are poorly understood. Here, we found that the JA pathway was induced by RSV infection and played a defence role against RSV. The coat protein (CP) was the major viral component responsible for inducing the JA pathway. Methyl jasmonate treatment attracted SBPHs to feed on rice plants while a JA-deficient mutant was less attractive than wild-type rice. SBPHs showed an obvious preference for feeding on transgenic rice lines expressing RSV CP. Our results demonstrate that CP is an inducer of the JA pathway that activates plant defence against RSV while also attracting SBPHs to feed and benefitting viral transmission. This is the first report of the function of JA in the tripartite interaction between RSV, its host, and its vector. 相似文献
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利用RT-PCR检测感病植株和单头带毒灰飞虱, 均扩增出水稻条纹叶枯病毒特有的一个长540 bp的片段, 且人工饲毒虫的病毒含量高于自然感病稻田虫。以病毒S蛋白的多克隆抗血清, 采用Western印迹技术从单虫体内检测到病毒抗原的2个专一性条带, 大小分别为20.7和19.7 kDa。DIBA (dot immunobinding ass ay)检测法快速、简便, 但专一性和灵敏度不及RT-PCR与Western印迹检测。对不同检测方法所得昆虫带毒率差异的原因进行了探讨。 相似文献
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利用RT-PCR检测感病植株和单头带毒灰飞虱,均扩增出水稻条纹叶枯病毒特有的一个长540 bp的片段,且人工饲毒虫的病毒含量高于自然感病稻田虫。以病毒S蛋白的多克隆抗血清,采用Western印迹技术从单虫体内检测到病毒抗原的2个专一性条带,大小分别为20.7和19.7 kDa。DIBA(dot immunobinding assay)检测法快速、简便,但专一性和灵敏度不及RT-PCR与Western印迹检测。对不同检测方法所得昆虫带毒率差异的原因进行了探讨。 相似文献