ToRCH系列酶标诊断试剂的研制

Torch is the abbreviation of four pathgenic microbols Tonoplasma gondic (Toxo), Rubella Virus (RuV), Cytomegalovirus (CMV), and Herpes Simplex Virus (HSV_1-2). A new indirect ELISA reagent to detect the specific IgG and IgM antibody to ToRCH has been prepared. McAbs, labeled with horseradish peroxidase, against human IgG and IgM are used as the second antibodies. Purified Toxo, RuV, CMV, HSV_1-2 are used as antigens to coat wells. The reagent's quality has been tested. The result showed that the reagent has high specificity and low background. The sensitivity is up to 1∶160～640, the precision is high and the coefficient of variation (C.V) is between 1.4%～9.0%. The reagent is stable (stored at 37 ℃ for 4 days, the change range of each target is no more than 15%).     

甲胎蛋白酶联诊断试剂盒的质量分析

对国内６个厂家２８批ＡＦＰ ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的精密性、灵敏度、特异性、线性和盒内ＡＦＰ工作标准品的准确性进行全面质量的考查。结果表明目前我国大多数ＡＦＰ ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的灵敏度均能达到≤５ＩＵ／ｍｌ,精密性（孔间差）为１５％～２０％;线性ｒ值≥０９８;特异性良好。但存在的主要问题是盒内ＡＦＰ工作标准品的标示量与ＡＦＰ国家标准品标示量不符。不符合率占４２８％。     

乙型肝炎诊断试剂国家质控标准的建立

按新的方案建立了用于乙型肝炎诊断试剂的国家质控标准。包括用WHO国际标准品标化建立的我国HBsAg、抗-HBs定量标准品,对试剂的特异性、灵敏度、精密性、线性进行质量控制检定的系列参比品,及经过实验制订的检定标准。经近年来的实际应用,对国产试剂质量的提高起到了推动作用。     

基于供应链的公立医院体外诊断试剂管理

公立医院体外诊断试剂管理因试剂种类复杂,横跨药品和医疗器械两个行业,监管有一定难度,导致试剂的“进、销、存”缺乏整体性管理,严重影响医院的医疗安全和运行效率。江苏省人民医院采用信息化手段,运用供应链管理的理念来研发体外诊断试剂管理项目,实现医院体外诊断试剂的精细化的管理,有效地提高医疗安全。     

体外诊断试剂防腐剂的选择策略

对体外诊断试剂中防腐剂的作用机理及选择原则进行了阐述,并对目前常用的防腐剂如叠氮钠、庆大霉素、硫柳汞、异噻唑啉酮类等的性能进行了比较,为体外诊断试剂的研究开发及生产中防腐剂的使用提供有益指导。     

HIV诊断试剂的发展与使用策略

人类免疫缺陷病毒是导致艾滋病的病原,艾滋病在全球迅速传播,艾滋病防治的需要促使HIV诊断试剂不断发展。20年来HIV诊断试剂的敏感性不断提高,窗口期逐渐缩短,并且HIV诊断试剂的品种日益丰富。本文就HIV诊断试剂的品种及发展情况作一综述。     

基因工程重组嵌合抗原作为丙型肝炎诊断试剂的应用

利用基因工程重组技术获得了三种嵌合抗原,两种为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区核壳蛋白Ｃ２２和ＮＳ３非结构区Ｃ３３ｃ双表位的嵌合抗原Ｂ１和Ｂ２,另一种是既具有上述两段优势抗原,还包括ＮＳ４非结构区Ｃ１００多表位的嵌合抗原Ｃ２５。在大肠杆菌水解酶阴性Ｂ株菌中表达的产物,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,Ｂ１,Ｂ２和Ｃ２５嵌合抗原分子量分别为４３,５３和７０ｋＤ,抗原蛋白表达量分别各占电泳蛋白条带的４０％,１０％和     

抗ToRCH-IgM型抗体临床对比检测研究

ToRCH系列病原微生物(包括弓形虫Tox、风疹病毒RuV、巨细胞病毒CMV、单纯疱疹病毒HSV I/Ⅱ等)是一组具有致畸作用的病原体,孕妇感染可导致流产、早产、畸形甚至死胎.目前ToRCH IgM型抗体的检测都在不同程度上受到非特异性的干扰,采用有效方法消除干扰对ToRCH IgM型抗体检测的准确性至关重要.为此我们对比了多种消除IgM检测中非特异性干扰的方法,并以最佳方法对256例女性献血者、143例正常妊娠和61例异常妊娠标本进行ToRCH IgM抗体的对比检测.结果显示健康人群中ToRCH活动性感染率较高,健康孕妇ToRCH IgM的总阳性率高达23.1%(其中Tox5.6%、CMV9.8%、RuV8.4%、HSV4 9%);而异常妊娠则显著上升(p＜0.01),其中Tox、CMV、RuVIgM阳性率上升明显(p＜0.05),分别为19.7%、26.2%、24.6%.由此可见孕期ToRCH病原微生物活动感染是致异常妊娠的主要因素之一,应严密监视孕期ToRCH病原微生物活动性感染,特别是弓形虫、风疹病毒和巨细胞病毒的感染.     

抗ToRCH—IgM型抗体临床对比检测研究

ＴｏＲＣＨ系列病原微生物（包括弓形虫Ｔｏｘ、风疹病毒ＲｕＶ、巨细胞病毒ＣＭＶ、单纯疱疹病毒ＨＳＶ　　Ⅰ／Ⅱ等）是一组具有致畸作用的病原体,孕妇感染可导致流产　、早产、畸形甚至死胎。目前ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ型抗体的检测都在不同程度上受到非特异性的干扰,采用有效方法消除干扰对ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ型抗体检测的准确性至关重要。为此我们对比了多种消除ＩｇＭ检测中非特异性干扰　的方法,并以最佳方法对２５６例女性献血者、１４３例正常妊娠和６１例异常妊娠标本进行ＴｏＲＣＨ　　ＩｇＭ抗体的对比检测。结果显示健康人群中ＴｏＲＣＨ活动性感染率较高,健康孕妇ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ的　总阳性率高达２３．１％（其中Ｔｏｘ５．６％、ＣＭＶ９．８％、ＲｕＶ８．４％、ＨＳＶ４．９％）;而异常妊娠则显著上升　（　ｐ＜０．０１）,其中Ｔｏｘ、ＣＭＶ、ＲｕＶＩｇＭ阳性率上升明显（ｐ＜０．０５）,分别为１９．７％、２６．２％、２４．６％　。　由此可见孕期ＴｏＲＣＨ病原微生物活动感染是致异常妊娠的主要因素之一,应严密监视孕期ＴｏＲ　ＣＨ病原微生物活动性感染,特别是弓形虫、风疹病毒和巨细胞病毒的感染。     

Indirect ELISA with recombinant GP5 for detecting antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome is caused by the PRRS virus (PRRSV), which has six structural proteins (GP2, GP3, GP4, GP5, M and N). GP5 and N protein are important targets for serological detection by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and other methods. Toward this goal, we developed an indirect ELISA with recombinant GP5 antigens and this method was validated by comparison to the LSI PRRSV-Ab ELISA kit. The results indicated that the optimal concentration of coated recombinant antigen was 0.2 μg/well for a serum dilution of 1:40. The rate of agreement with the LSI PRRSV-Ab kit was 88.7% (266/300). These results support the potential use of recombinant GP5 as an antigen for indirect ELISA to detect PRRSV antibodies in pigs.     

Indirect ELISA with Recombinant GP5 for Detecting Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome is caused by the PRRS virus (PRRSV),which has six structural proteins (GP2,GP3,GP4,GP5,M and N). GP5 and N protein are important targets for serological detection by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and other methods. Toward this goal,we developed an indirect ELISA with recombinant GP5 antigens and this method was validated by comparison to the LSI PRRSV-Ab ELISA kit. The results indicated that the optimal concentration of coated recombinant antigen was...     

戊型肝炎病毒抗体(抗-HEV)酶联免疫试剂盒的研制及其应用

应用合成ＨＥＶ多肽作为包被抗原,按间接ＥＬＩＳＡ法,研制成ＨＥＶ抗体检测试剂盒,并用于检测标本１０５４份,其中献血员样品２００份,阳性率为１％;体检样品５０２份,阳性率为１．５９％;医院病人样品３５２份,阳性率为１０．８％。     

酶联免疫破伤风抗体定量试剂的研制及应用

制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定。以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统。定量反应曲线显示,抗体浓度在10~120m IU/m l之间,相关系数r=0.9993。精密度(CV)≤7%。实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01 IU/m l)的比例只占12.2%。经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01 IU/m l,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%。结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究

【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为IgG1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04?25.00 μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04 μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03 μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%?120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。     

兔出血症抗体间接ELISA检测试剂盒的研制与初步应用

目的建立检测兔病毒性出血症(RHD)血清抗体的间接ELISA方法并组装成试剂盒,进行初步应用。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯RHDV病毒粒子作为包被抗原,优化反应条件和筛选试剂,建立间接ELISA检测方法,组装试剂盒并对其总体性能进行评价。结果试剂盒敏感性为血凝抑制试验的4~32倍,重复性和特异性良好,保质期为4℃3个月。对105份兔血清进行随机检测,与血凝抑制试验的复核率为95%。结论本试剂盒可以在检测和科研中初步应用。     

家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素（PRN）蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

目的表达支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列（AY376325）设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21（DE3）为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在E.coliBL21（DE3）中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。