免疫预防阻断乙型肝炎病毒母婴传播效果的观察

阻断乙型肝炎病毒(HBV)母婴传播是控制乙型肝炎的重大问题。为探讨免疫预防对阻断HBV母婴传播的效果及影响因素,对667例HBV表面抗原(HBsAg)阳性孕妇及其婴儿进行研究。这些孕妇按HBVe抗原(HBeAg)和HBVDNA检测结果,分为HBeAg阳性组及阴性组、DNA阳性组及阴性组;按是否于孕晚期注射乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG),分为注射组及未注射组。婴儿于出生24h内均肌内注射HBIG100IU,并按0、1、6方案注射10μg重组酵母HBV疫苗;8～12月龄后随访婴儿,并进行HBV标志物(HBV-M)检测。667个婴儿中,20例感染HBV,免疫阻断失败率为3.0%。孕妇HBeAg阳性组免疫阻断失败率为8.7%,阴性组为0.2%,两组差异显著(P<0.001);两组婴儿对疫苗免疫应答率分别为83.0%和83.1%,无显著差异(P=0.988)。孕妇DNA阳性组免疫阻断失败率为8.1%,HBVDNA均≥6log10copies/ml。孕期注射与未注射HBIG组婴儿免疫阻断失败率分别为3.7%和2.7%,无显著差异(P=0.479);两组婴儿对疫苗免疫应答率分别为84.4%和82.4%,无显著差异(P=0.519)。孕妇HBeAg阳性注射HBIG组与未注射组的免疫阻断失败率分别为8.4%和8.9%,无显著差异(P=0.892)。孕妇HBeAg阴性注射与未注射HBIG组的免疫阻断失败率分别为0.0%和0.3%,也无显著差异(P=0.538)。11例免疫阻断失败的婴儿中,10例出生时血清HBsAg已为阳性;8～12个月后随访,HBsAg仍持续阳性,提示为宫内感染。本研究证实,孕期注射HBIG未能提高婴儿对HBV疫苗加HBIG的免疫阻断效果。宫内感染可能是疫苗加HBIG免疫阻断失败的主要原因。采用降低孕妇血清HBVDNA的措施,如对孕妇进行抗HBV治疗,也许能降低HBV宫内感染率。     

不同剂量乙肝疫苗阻断乙型肝炎病毒母婴传播的远期效果观察

本文对出生后接种不同剂量乙肝血源疫苗的２７２名婴儿进行了３－５年的效果随访观察。结果表明,接种３、４、５年后,抗－ＨＢｓ阳性率仍分别保持在９０．５％、８２．３％和７３．２％,ＨＢｓＡｇ阳性率分别为２．８％、３．１％和４．２％。３年后抗－ＨＢｓ阳性率逐年下降,Ｐ／Ｎ值＞５０者以接种后３年为多,＜５０者以５年为多,３年后也呈下降趋势。随访结果说明,接种１０μｇ×４、５μｇ×４及２．５μｇ×４剂量的乙肝疫苗具有阻断母婴乙肝病毒传播的效果。鉴于Ｐ／Ｎ值及抗－ＨＢｓ阳性率在接种后３年开始下降,建议接种后３年应进行一次加强接种。     

转基因细胞分泌乙型肝炎重组疫苗在儿童中的免疫原性初步研究

本文报告用转基因细胞B43分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白经纯化制成的87-4批重组疫苗进行临床接种观察的结果,同时用8723-1批血源疫苗作对照。疫苗接种采用0、1、2月各接种1针的方案。重组疫苗共接种111名8～13岁儿童,分为20μg、10μg及5μg 3组,血源疫苗分为20μg、10μg 2组。所有儿童接种前检查乙型肝炎病毒表面抗原、抗体及核心抗体均阴性.20μg组1针后1个月,重组疫苗阳转率60.5％,血源疫苗为31％;2针后1个月,两种疫苗的阳转率分别为100％和72.4％;血源疫苗3针后1个月阳转率也仅79.3％。3针后1个月两种疫苗的抗体几何平均滴度(GMT)分别为492.7和207.4mIU。但重组疫苗6个月后血清抗体的GMT为628mIU。10μg组1针后1个月的阳转率重组疫苗为21.7％,血源疫苗为20.9％;2针后1个月分别为87％及62.8％;3针后1个月分别为100％及81.4％。抗体GMT分别为163.7和129.6mIU.5μg组的重组疫苗免疫后6个月100％阳转,其GMT为56mIU。结论认为无论从阳转率或几何平均滴度分析判断,重组疫苗均优于血源疫苗。     

乙型肝炎血源疫苗不同免疫剂量阻断新生儿母婴传播的效果观察

用乙型肝炎血源疫苗,按0、1、6程序,分5种不同剂量免疫HBsAg和HBeAg均阳性(双阳性)母亲和仅HBsAg阳性母亲的新生儿,井于首针后8～12个月采血,用放射免疫(RIA)法检测他们的HBsAg和抗-HBs、抗-HBc,以比较不同剂量乙肝疫苗阻断母婴传播的效果。结果,10μg×3组对双阳性和仅HBsAg阳性母亲的新生儿的保护率,分别是42.9％和53.5％;20μ×3组为67.4％和69.7％;30μg、10μg、10μg组为75.6％和79.8％,30.20、20μg(含30、30、10μg)组为80.2％和81.5％;30μg×3组为82.3％和83.7％。随疫苗剂量增加保护率逐渐增加,抗-HBs阳转率也是如此。     

乙型肝炎疫苗和乙型肝炎母婴传播的免疫阻断

乙型肝炎疫苗和高价抗乙肝免疫球蛋白(HBIG)均已研制成功,并开始大量生产使用,这是近年预防医学和生物制品研究的两项重大突破;它使人类在征服全球性重大传染病方面又迈出了历史性的一步。近十年来的研究已完全确认,上述两大制品在预防高危人群乙肝感染和阻断暴露后人群(如乙肝带毒母亲的婴儿)的乙肝带毒,卓有成效。这两大生物制品的有计划大量生产和正确使用,将会根本改变乙肝的流行状况,使控制和甚至消灭乙肝成为可能。现就国内外乙肝疫苗,高价乙肝免疫球蛋白的研究、生产和应用现状及乙肝母婴传播的免疫阻断等有关问题,作一简要介绍。     

乙型肝炎病毒携带孕妇母婴阻断的优化管理

我国是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染的高流行区,HBV感染的育龄期女性是HBV传播的主要传染源,其中大多数育龄期的乙肝女性为乙型肝炎病毒携带状态,因此,乙型肝炎病毒携带孕妇的HBV母婴阻断成了临床愈发关注的问题。实践中,即使HBsAg阳性的孕妇分娩的新生儿接种乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白,仍有5%-10%的新生儿感染HBV,尤其母亲为HBe Ag阳性、高病毒载量者。因此,美国肝病研究学会(AASLD)、欧洲肝病学会(EASL)和英国国立优质卫生和保健研究所(NICE)指南推荐高病毒载量的孕妇在妊娠晚期口服抗病毒药物拉米夫定、替诺福韦、替比夫定进行母婴阻断,减少新生儿感染HBV的机率,但目前乙型肝炎病毒携带孕妇阻断HBV母婴传播的临床管理和预防策略尚未达成共识,尤其是母乳喂养和分娩方式等问题仍存在争议,本文谨从HBsAg筛查、垂直传播的危险因素、阻断方法、分娩方式、母乳喂养等方面进行综述,探讨如何优化管理乙型肝炎病毒携带孕妇,并对未来HBV母婴阻断的研究进行展望。     

应用乙型肝炎疫苗阻断围产期乙型肝炎病毒的母婴传播

993名HBsAg携带者母亲所生新生儿,以768名新生儿为试验组,226名新生儿为对照组,试验组分别注射HBsAg血源性氢氧化铝佐剂疫苗,乙型肝炎高价免疫球蛋白(HBlg)或疫苗加HBIg,对照组注射安慰剂,所用疫苗为国产81-2、82-1-2、83-1和美国NIHA9,观察表明,出生后六个月,试验组各批疫苗的保护率为60～93％,以83-1批为最高;疫苗加HBIg的保护效果与疫苗相似,HBIg组亦有70％的保护效果,以上结果证明单独应用HBsAg疫苗阻断母婴传播的效果是理想的。     

CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响

为了研究CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗(简称乙肝疫苗)免疫效果的影响,以乙肝疫苗加Al(OH)3、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH)3与CpG3三种配伍方式,通过腹腔、皮下或肌内3种不同途径免疫Balb/c小鼠,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果.同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放6个月再免疫小鼠,观察CpG的稳定性.结果表明:①3种免疫途径中以肌内注射效果最好,这在使用CpG的实验组尤为明显,在该组肌内免疫的ED50比腹腔的低了10倍,而诱发的抗体滴度提高了3倍;②疫苗与CpG、Al(OH)3联合使用的免疫效果最好,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗+Al(OH)3提高4倍,比疫苗+CpG提高7倍;③疫苗+Al(OH)3免疫时,表现为IgG1抗体亚型占优势,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高,以IgG2a最显著;④疫苗与CpG混合后4℃保存半年,不影响其活性.     

乙型肝炎病毒表面抗原基因在中国地鼠卵巢细胞中的高效表达及纯化抗原免疫原性的研究

本文报告了两个拷贝的adr亚型HBs基因的pSV2质粒组建,其中一个拷贝只含S基因,受SV40早期启动子的直接控制,另一个拷贝连接于pSV2质粒dhfr基因下游,含有前S和S基因及其本身的启动子,用此重组质粒转化CHO-dhfr~-细胞,经选择,获得了高效表达HBsAg的CHO-32-C23及CHO-Ⅱ-5细胞系,最佳培养条件及HBsAg分泌动态的研究结果表明,CHO-Ⅱ-5系细胞分泌HBsAg的最佳条件是37℃培养,培养基中加2％小牛血清,每日收换液;用5％小牛血清,每48小时收换液则次之,但较实用,转瓶培养产量约2.μg/ml,将CHO-32-C23细胞系产生的液体初步纯化,在聚丙烯酰胺凝胶上显示23k和27k蛋白带,用其免疫NIH小鼠,EDSO为0.119μg,对照血源菌ED_(50)为0.083μg,二者的免疫原性近似。     

乙型肝炎病毒胎内及围产期传播的研究

对78名HBsAg携带者母亲的新生儿系列血清,用ELISA检测抗-HBc·IgM,有5名出生后48小时血清阳性滴度在1:1,000以上,占6％。有3名母血HBeAg阳性的新生儿,其脐血、出生后48小时足跟血及以后的连续血清标本HBsAg均阳性,且滴度趋于升高。母血抗-HBc·IgM均阴性。认为前者可能为HBV眙内感染,后者为母血通过胎盘溃面直接进入胎儿血循环所致。     

少年儿童接种乙型肝炎血源疫苗的效果评价

5～15岁的HBV易感儿童,按0、1、6月程序接种10μg×3乙型肝炎血源疫苗(北京生研所批号8615-1A、8722-2)。接种后1～2年他们的抗-HBs阳转率为～92％,无一例HBsAg阳转;未接种疫苗的对照组儿童,抗-HBs阳转率仅2.08％～2.60％,HBsAg阳转率分别为3.23％和2.08％。流行病学保护效果良好。易感少年儿童接种乙型肝炎血源疫苗将加快控制乙型肝炎的进程。     

CHO细胞重组乙型肝炎疫苗的免疫原性及保存稳定性的研究

将9批CHOC28细胞重组乙肝疫苗（简称CHO苗）与同期生产的48批血源性化学灭活疫苗（简称血源苗）,检定所CHO参比苗、血源参比苗、酵母重组苗和巴士德CHO苗按10μg／ml同等剂量进行免疫原性的比较。产生小民免疫后50％阳转的最小抗原至平均值分别是0.10μg、0．17μg、0．18μg、0．35μg、0.79μg和0．18μg,CHO苗与血源苗的免疫原性水平均较高,但前者优势明显,而酵母重组苗的EDO结果最差。武汉所CHO苗在4～8℃保存2年后ED50均值仍是0．14μg,有效抗原性基本不变,CHO参比苗2年后ED50为0．35μg,仍具有高效免疫活性;血源参比苗稳定性效果一年半的ED5O为1.20;稳定性最差的是该批酵母重组苗,在1年内ED50位降至稀释度4以下（大于2．5μg）。上述结果表明CHO细胞重组苗在长期保存稳定性方面质量可靠,同类苗中武汉所疫苗占一定的优势。     

乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白基因在中国地鼠卵巢细胞中的高效表达及其产物活性的初步检测

构建了pSV2DHWS2S质粒,使dhfr扩增基因及乙型肝炎病毒的Pre-S_2+S基因分别在两个SV40早期启动子的调控之下。此质粒转化到CHO-dhfr~-细胞,经克隆、加氨甲喋呤(MTX)筛选、扩增,建立了3个高效分泌HBsAg中蛋白及主蛋白的克隆细胞系。检测了其中的M6细胞系生物学特性。结果表明,免疫电镜下可观察到22nm的颗粒;该细胞用转瓶连续培养60天,每2天收、换液1次,每升HBsAg平均产量为2.9mg。经初步纯化,在SDS-PAGE中显示23k、27k主蛋白带及33k、36k中蛋白带。主蛋白及中蛋白的反相血凝(RPHA)滴度分别为64和128;中蛋白的ELISA滴度为320。部分品系小鼠免疫后能产生滴度为8的抗Pre-S_2抗体。3只家免中仅有1只在免疫后第1、2周可测出Pre-S_2抗体,而3只兔的S抗体滴度都较高,持续时间也较长。     

新生儿接种10μg3针乙型肝炎血源疫苗5年内的免疫效果观察

1986～1958年,对广东3个城市1～5岁儿童乙型肝炎病毒(HBV)感染做横断面调查的基础上,给新生儿普种乙型肝炎血源疫苗。出生后24小时内接种1针,1、6个月接种第、3针,每针10μg,共接种1万余名。免疫后抽查HBsAg阳性母亲新生儿血380人份,HBsAg阴性母亲新生儿血1466人份。同时采集同期出生的未免疫的新生儿血116份作为内对照。以放射免疫法(RIA)检测HBV指在。结果,新生儿免疫后1～5年,标化抗-HBs阳转率为67.3％～79.1％。免疫后1～5年HBsAg阳性率与免前HBsAg阳性率比较,其保护率为65.8％～92.1％;与平行内对照的HBsAg阳性率比较,保护率为58.6％～88.1％。且发现HBsAg阳性母亲的新生儿,随免疫年限延长,HBsAg阳性率有降低趋向。