草鱼出血病潜伏期和发展期的血液病理研究

草鱼种经人工感染呼肠孤病毒后进行了血液学和血液化学的检查。红血球、血浆总蛋白和尿素氮在感染4天的潜伏期鱼体内,发现显著的减少。当进入发展期(第8天),红血球、血红蛋白、血浆总蛋白和尿素氮的含量减少更明显。SLDH同工酶谱的相对活性在潜伏期和发展期病鱼的血清内出现紊乱现象,同时,在某些感染鱼的血清中,明显可见一条多出的区带。此病流行期间,早期的血液变化已经发生,某些生理变化已在红血球、血红蛋白、血浆总蛋白和尿素氮中得到反映,其含量的变化与人工感染组的结果相似。所测的血清钾含量明显增加;血清钙的含量明显减少。值得提出的是血红蛋白、红血球、血清钙和钾等被证实有早期变化。     

草鱼血液学的研究 Ⅰ.九项血液常数的周年变化

用741尾健康草鱼种作红细胞、血红蛋白、红细胞比积、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞沉降率、血浆总蛋白和血浆葡萄糖浓度等九项血液常数的测定。所得的年均值经变异系数分析,除红细胞沉降率和血浆葡萄糖浓度外,其余各项常数的可靠性基本一致。另从周年变动的规律分析,高值出现在冬夏季,低值出现的月份较为分散。水温仅对总蛋白含量的变动呈现显著的负相关(P<0.01)。而体重与血液常数存在着一定的相关因素,在10—90克之间的鱼种中,血红蛋白、红细胞比积、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量与体重呈现直线正相关;红细胞沉降率为负相关。     

五种鱼类标志对草鱼血液生化指标的影响

实验旨在研究鱼类标志对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)血液生化指标的影响。选用108尾体长(18.54±2.04 cm)、体重(109.04±36.36 g)的草鱼,设6个处理组,分别为超声波标志组、Passive Integrated Transponder(PIT)标志组、荧光标志组、切鳍标志组、T型标志组和对照组。每个处理组设置3个重复,每个重复6尾草鱼,并在标志后的1、7、15 d从每个重复组随机选2尾草鱼进行抽血检验。结果表明:超声波标志对草鱼血液生化指标的影响最大,标志后1 d草鱼血清球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶浓度显著性升高,氯离子浓度在标志后7及15 d也维持在较高水平,标志后15 d球蛋白浓度降低,但仍然显著性高于对照组;PIT标志、切鳍标志及T型标志对草鱼血液生化指标影响相对较小,PIT标志组草鱼在标志后7 d氯离子浓度显著性升高,15 d后恢复正常;切鳍标志组草鱼在标志后1 d甘油三酯浓度显著性下降,7 d后恢复正常;T型标志组草鱼在标志后1 d谷草转氨酶浓度显著性升高,7 d后恢复正常;荧光标志对草鱼血液生化指标影响最小,标志后所有生化指标与对照组均无显著性差异。荧光标志适用于大规模标志,标志后即可放流;PIT标志、切鳍标志和T型标志对草鱼的生理状况都产生一定的影响,建议在标志后至少暂养7 d再放流;超声波标志后草鱼至少暂养15 d,待其伤口愈合,消除标志对其产生的负面影响后再放流。     

草鱼出血病病原的研究

草鱼出血病是草鱼种的一种严重疾病,通常在水温25—30℃时发病,其症状表现为全身性组织器官充血。其病原悬液能通过赛氏滤器(Seitz,EKS石棉滤板),能在草鱼种体内及草鱼鳍单层细胞中传代繁殖,在草鱼肌肉单层细胞和性腺单层细胞中感染并出现细胞病变。病原悬液对脂溶剂乙醚敏感,耐热性强,对四环素类药物不敏感。试验结果,我们认为草鱼出血病的病原是病毒。     

草鱼胸腺组织学的研究

草鱼胸腺位于鳃腔背上角,紧贴在鳃腔膜之下,突起部分伸入到下颞凹,整个胸腺形态形似菱角。其组织结构可分为外区、中区和内区。中区和内区主要由淋巴细胞和网状上皮细胞构成,在组织结构上分别类似于高等脊椎动物胸腺的皮质和髓质区。胸腺淋巴细胞可分大、中、小三型,小淋巴细胞约占78％,中淋巴细胞约占15％,大淋巴细胞约占4％。在Ⅰ龄草鱼,每毫克胸腺约有3.6×106个胸腺淋巴细胞,Ⅱ龄草鱼约为2×106。Ⅰ至Ⅱ龄草鱼胸腺重量明显地随鱼龄增加,Ⅱ龄以上草鱼胸腺重量变化无规律,成鱼胸腺表现出明显的退化。草鱼胸腺除年龄性退化外,还存在环境因素引起的非年龄性退化。       

草鱼产卵类型的研究

本文是对已达性成熟年龄的池养和江河雌性草鱼产卵前后卵巢组织学结构的研究。实验结果证明草鱼是一次产卵类型。经人工催产后的雌性草鱼,由于亲鱼的成熟程度存在个体间的差异,有的全产,有的部分产。在湘江天然产卵场捕得的雌性草鱼,也有全产和部分产的。人工催产全产后的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ时相,部分产后的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ(Ⅳ+、Ⅳ++)时相,已达满熟阶段但未经人工催产的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ(Ⅳ+++)时相,以上都未发现有处于Ⅲ时相的卵母细胞。从江河天然产卵场捕得的全产、部分产和尚未产卵的雌性草鱼的卵巢组织学结构,与上述结果一致。证实由Ⅲ时相到Ⅳ时相是同步性的。5月全产后的雌性草鱼,其卵巢组织学结构在6-9月内处于第Ⅱ期,没有新的Ⅳ时相卵母细胞。因此,夏季全产后的雌性草鱼,不可能在当年夏季或秋季完成由Ⅱ-Ⅲ-Ⅳ时相的发育程序。草鱼的卵巢成熟系数在繁殖季节只出现一次高峰。       

草鱼产卵类型的研究

本文是对已达性成熟年龄的池养和江河雌性草鱼产卵前后卵巢组织学结构的研究。实验结果证明草鱼是一次产卵类型。经人工催产后的雌性草鱼,由于亲鱼的成熟程度存在个体间的差异,有的全产,有的部分产。在湘江天然产卵场捕得的雌性草鱼,也有全产和部分产的。人工催产全产后的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ时相,部分产后的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ(Ⅳ 、Ⅳ )时相,巳达满熟阶段但未经人工催产的卵巢组织学结构是Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ(Ⅳ )时相,以上都未发现有处于Ⅲ时相的卵母细胞。从江河天然产卵场捕得的全产、部分产和尚未产卵的雌性草鱼的卵巢组织学结构,与上述结果一致。证实由Ⅲ时相到Ⅳ时相是同步性的。5月全产后的雌性草鱼,其卵巢组织学结构在6—9月内处于第Ⅱ期,没有新的Ⅳ时相卵母细胞。因此,夏季全产后的雌性草鱼,不可能在当年夏季或秋季完成由Ⅱ—Ⅲ—Ⅳ时相的发育程序。草鱼的卵巢成熟系数在繁殖季节只出现一次高峰。     

草鱼出血病病原的研究

草鱼出血病是草鱼种的一种严重疾病,通常在水温25-30℃时发病,其症状表现为全身性组织器官充血。其病原悬液能通过赛氏滤器(Seitz,EKS石棉滤板),能在草鱼种体内及草鱼鳍单层细胞中传代繁殖,在草鱼肌肉单层细胞和性腺单层细胞中感染并出现细胞病变。病原悬液对脂溶剂乙醚敏感,耐热性强,对四环素类药物不敏感。试验结果,我们认为草鱼出血病的病原是病毒。     

草鱼肠道酸碱度的研究

胃肠道是一个复杂的消化系统, 每一部分都具有独特的生理特征。酸碱度(pH)是消化道重要的生理指标之一, 其对营养物质的消化、吸收和肠道微生物的生长等具有重要影响。为了研究草鱼在食物消化过程中, 肠道的酸碱度变化, 测定了草鱼肠道食物糜、肠液和黏膜的pH。结果显示, 随着食物的消化, 它们的pH都有下降的趋势。肠道食物糜pH在6.86±0.24到8.43±0.10之间, 肠液pH在7.14±0.22到8.63±0.02之间, 相同时间点相同肠段两者之间的pH差异很小, 并且在实验期间两者的pH变化趋势相同。黏膜pH在6.23±0.04到6.7±0.13之间, 为弱酸性。除了时间点12h外, 相同时间点和相同肠道部位黏膜的pH与食物糜、肠液的pH相比均有显著性差异(P<0.05)。分析发现草鱼摄食食物的pH与上述三相的pH之间均有显著性差异(P<0.05), 研究结果为草鱼消化生理及营养学研究提供了基础资料。     

性成熟草鱼卵巢发育的年周期变化

产卵前的卵巢同时含有大量4时相卵母细胞及少量2时相和3时相卵母细胞。产后2时相及3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞骤减,8月份4时相卵母细胞的数量又增多,约占卵巢体积的80％,及至11月份其数量又下降。自11月至翌年1月,卵巢中3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞则消失不见。至2月份,新的4时相卵母细胞又开始出现并逐渐增多。性成熟草鱼的卵巢以如此规律周而复始地产生成熟的卵子。卵巢中卵母细胞的发育是不同步的。但在产卵前有大量的3时相卵母细胞向4时相演化,同时有为数不少的发育中的2时相卵母细胞存在。产后卵巢中亦同时存在不同发育时期的卵母细胞。     

草鱼干扰素的免疫调节功能

首次对草鱼干扰素（grass carp interferon,GcIFN)的免疫调节功能进行研究,结果表胆,GcIFN对草鱼巨噬细胞（Wψ）具有显著的激活作用,它能提高Mψ内O^-2,H2O2和ACP的活性含量,促进Mψ的吞噬和杀菌作用,GcIFN对Mψ的激活效应随剂量的增加而增加,激活所需要的时间则随剂量的增加而减少,与调节Mψ的规律不同,GcIFN对草鱼淋巴细胞无直接的激活作用,但可以调节由PHA,ConA引起的T淋巴细胞转化以及由SPA,LPS引起的B淋巴细胞转化,GcIFN对淋巴细胞的调节作用具有正负两方面的效应,当GcIFN浓度为250－500U／ml和50－500U／ml时,分别对T,B淋巴细胞转化表现为促进作用,而当浓度提高至50000U/ml时,则对两种淋巴细胞的转化产生抑制作用。     

四种抗脂肪肝物质降低草鱼肝胰脏脂质积累的替代关系

采用１１种添加不同水平的蛋氨酸（Ｍｅｔ）,胆碱（Ｃｈ）甜菜碱（Ｂｅｔ）和大豆卵磷脂（Ｌｅｃ）的饲料饲养初始体重约１５ｇ的草鱼,研究了它们降低草鱼肝胰脏脂质积累的相互替代关系,１１种饲料中这四种物质的含量分别为（％）：（１）１．１Ｍｅｔ０．０８Ｃｈ,（２）１．１Ｍｅｔ０．３３Ｃｈ,（３）１．３Ｍｅｔ０．２３Ｃｈ,（４）１．５Ｍｅｔ０．１３Ｃｈ,（５）１．３Ｍｅｔ０．１３Ｃｈ,（６）１．３Ｍｅｔ０．１     

儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素分泌的影响

本文研究了儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素水平的影响。腹腔注射儿茶酚胺合成抑制剂α－甲基－对－酪氨酸（α－ＭＰＴ,５μｇ／ｇｂ·ｗ和５０μｇ／ｇｂ·ｗ）显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平,腹腔注射儿茶酚胺能神经毒素６－羟多巴胺（６－ＨＯＤＡ,５μｇ／ｇｂ·ｗ和５０μｇ／ｇｂ·ｗ）也显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平。阿卟吗啡（ＡＰＯ,７．１ｍｇ／Ｋｇｂ·ｗ和１２．５ｍｇ／Ｋｇｂ·ｗ）通过背大动脉插管注入草     

氧化鱼油对草鱼肠道黏膜抗氧化应激通路基因表达水平的影响

为了探讨氧化鱼油对草鱼肠道黏膜损伤后, 参与抗氧化应激的基因通路及其通路基因表达活性的变化,以草鱼为试验对象, 灌喂氧化鱼油7d后, 采集肠道黏膜组织并提取总RNA, 采用RNA-seq方法, 进行了氧化鱼油组和正常鱼油组草鱼肠道黏膜基因注释、IPA基因通路分析和基因表达活性差异分析。结果显示, 组织切片观察发现氧化鱼油导致草鱼肠道黏膜出现严重的损伤; 肠道黏膜中具有较为完整的Keap1-Nrf2-ARE基因调控通路。肠道黏膜在受到氧化鱼油的氧化损伤作用后, 激活了细胞的抗氧化损伤保护机制, 使NRF2介导的氧化应激反应通路基因差异表达显著性地上调, 并导致了下游的GSH/GSTs通路基因差异表达显著性上调, 促进了GSH的生物合成和GSTs的抗氧化作用; 导致Keap1-Nrf2-ARE信号通路下游的热休克蛋白和泛素-蛋白酶体通路基因差异表达显著性上调, 清除受损伤蛋白质, 保护细胞结构完整性。研究表明, 上述三类抗氧化应激通路构成了对肠道黏膜损伤细胞、损伤蛋白质的降解系统和清除系统, 显示其对肠道黏膜组织和黏膜细胞的保护、修复发挥了重要的作用。     

草鱼肾脏和脾脏血细胞发育过程的观察

鱼类肾脏、脾脏是机体造血的主要器官。印迹涂片显示:草鱼肾脏和脾脏内血细胞的发育过程大致经历了三个阶段,即原始阶段、幼稚阶段、成熟阶段。本文着重描述了各阶段细胞的形态特征井对草鱼血细胞的发育及命名等问题作了初步的探讨。       

二龄鲢和鳙血液的比较研究

以１１５尾二龄链和９１尾二龄鳙为材料,测定了血液中红细胞数,白细胞数、血红蛋白值、红细胞脆性植、比积及比重,红细胞沉降率,白细胞分数计数值及各型血细胞大小等正常值。结果显示：红细胞和白细胞值,比积值及淋巴细胞所占百分比值均是鲢高于鳙,而红细胞沉降率和中性粒细胞却是鳙高于链,在鲢上,其血液指标植也存在雌雄差异,上述血液指标值也存在周年变化。     

草鱼cadm2b基因的克隆及在成体组织中的表达分析

为研究CADMs（Cell adhesion molecules）在草鱼构建抵御病害感染的第一道防线中发挥的作用,用RT-PCR和RACE方法结合测序分析,在草鱼脑组织中检测到了该基因家族成员cadm2b基因的4条不同的cDNA全长序列。序列比对结果表明这4条全长cDNA在5'端的序列完全相同,在3'端的3个局部区域有不同片段的缺失。因此,可以确定这4条不同的mRNA是cadm2b的不同剪接体。这4条不同的剪接体被分别命名为cadm2b、cadm2bX2、cadm2bX3和cadm2bX6。cadm2b的cDNA序列全长1669 bp,开放阅读框（ORF）1203 bp,编码400个氨基酸。cadm2bX2的cDNA序列全长2783 bp,开放阅读框长1323 bp,编码440个氨基酸;cadm2bX3的cDNA序列全长2755 bp,开放阅读框1296 bp,编码431个氨基酸;cadm2bX6基因的cDNA序列全长2649 bp,开放阅读框1161 bp,编码386个氨基酸。根据碱基序列所进行的氨基酸序列和蛋白结构预测显示这4个CADM2b蛋白亚型都具有CADM家族保守的4个功能区,但其C端的蛋白结合位点存在差异。CADM2b具有近膜4.1蛋白结合位点和Ⅱ型PDZ蛋白结合位点,CADM2bX2、X3缺失了PDZ蛋白结合位点,而CADM2bX6则同时缺失4.1蛋白和PDZ蛋白的结合位点。实时定量RT-PCR检测结果显示cadm2b剪接突变体是该基因mRNA的主要形式。半定量RT-PCR和套式PCR实验检测结果表明cadm2b基因在草鱼成体脑中高水平表达,在肝、肾、心脏和肌肉组织中有微量表达。这种表达模式提示草鱼中CADM2b主要是由非免疫细胞,而不是由免疫肥大细胞合成分泌的细胞黏附因子,可能通过介导免疫肥大细胞与病原靶细胞的黏附而起非特异性抵御病害感染的作用。