胃癌相关miRNA表达的表观遗传学调控机制

胃癌是人类最常见的肿瘤之一,其发病机制尚不完全清楚.微小RNA(microRNA,miRNA)是一组最近发现的长度为22个核苷酸左右的非编码RNA,具有负性调控基因表达的功能.本文对miRNA在胃癌发生中的作用及其表达调控机制进行综述.不断有文献显示,miRNA在多种肿瘤(包括胃癌)的发生过程中发挥着重要作用.作者和其他研究人员发现,miRNA的表达异常(如:miR-421和miR-21的上调或/和miR-31和miR-218的下调等)与胃癌的发生相关,提示miRNA是胃癌发生的重要因素.目前,miRNA表达的分子机制尚未完全明了.最近研究较清楚地显示,miRNA的表达受到DNA甲基化和组蛋白修饰等机制的调控.这说明,胃癌相关miRNA的表达水平受到表观遗传机制的调控。     

miR-373与肿瘤相关作用的研究进展

miRNA是一类非编码小RNA,经转录后调节靶基因的表达,影响细胞的功能。异常表达的miRNA可引起包括癌症在内的各种疾病的发生发展。miR-373通过参与病毒感染和炎症反应、细胞的增殖和凋亡、迁移和侵袭以及作为生物标志物评估临床肿瘤特征在肿瘤中发挥作用。miR-373在许多肿瘤中表达异常:一方面,其受上游调控因子作用表达异常,影响肿瘤细胞的功能;另一方面,异常表达的miR-373通过调控下游靶基因介导信号通路影响肿瘤细胞的功能。故miR-373可作为肿瘤早期诊断、基因治疗靶点或是临床预后监测指标。该文就miR-373在肿瘤中的功能作用和调节机制的相关研究进展作一综述。     

人卵巢癌OVCAR3细胞FOXM1相关差异miRNA表达谱分析鉴定

为探究人卵巢癌OVCAR3细胞FOXM1基因敲减前后miRNA表达差异,并建立FOXM1相关miRNA差异表达谱,我们应用感染复数为20的靶向FOXM1 shRNA慢病毒颗粒及阴性对照慢病毒感染人卵巢癌OVCAR3细胞96 h,此后提取并鉴定细胞总RNA,纯化分离miRNA,应用高通量miRNA芯片技术分析2组miRNA的表达差异,并对5倍以上差异表达的miRNA进行RT-PCR验证。通过实验我们共发现34个miRNA发生表达变化,其中上调超过5倍的miRNA 4个:miR-327、miR-505、miR-1297、miR-122;下调超过5倍3个:miR-21、miR-409-3p、miR-200a,其中miR-122、miR-1297、miR-21、miR-200a等4个miRNA经RT-PCR验证为真实差异表达。这表明我们成功建立人卵巢癌OVCAR3细胞FOXM1相关miRNA差异表达谱,所筛选出的差异表达miRNA可能与FOXM1具有密切调控关系。     

microRNA在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌是预后很差的恶性肿瘤,其分子机制的研究是治愈胰腺癌的希望.microRNA(miRNA)是一类小分子非编码RNA,通过降解或抑制靶基因mRNA的翻译调节靶基因的功能.近年来,研究发现miRNA在胰腺癌中异常表达,有上调,也有下调.虽然很多miRNA异常表达的机制尚不清楚,但启动子CpG甲基化与在胰腺癌中某些miRNA的下调有关.研究发现miRNA表达谱可用于胰腺癌和单个miRNA表达如miR-21、miR-34、miR-10a、miR-155、miR-196a及miR-200和let-7家族成员等可作为肿瘤标志物用于胰腺癌与正常胰腺、慢性胰腺炎、胰腺内分泌肿瘤等的诊断和鉴别诊断,预测胰腺癌的预后等.研究发现miRNA在胰腺癌中上调或下调参与胰腺癌的增殖、凋亡、侵袭、转移以及对化疗药物的耐药.研究发现miR-34、miR-200c等与胰腺癌干细胞的自我更新有关.这些miRNA研究将为胰腺癌的早期诊断、分子靶向治疗打下坚实的基础.     

高通量miRNA活性谱检测发现BHK21细胞中miR-206高活性

用我们建立的活细胞miRNA活性谱检测技术测定BHK21、HEK293和Vero三种肾来源细胞系中58种miRNA活性谱,发现miR-206在BHK21细胞中具有特征性高活性.鉴于miR-206是典型的横纹肌特征性miRNA,进一步以小鼠成肌细胞C2Cl2及人胚肾细胞HEK293为对照,检测了BHK21细胞中miR-206的活性及表达水平.之后,用马血清诱导培养BHK21细胞,检测诱导前后BHK21细胞中骨骼肌肌球蛋白重链(Slow skeletal myosin heavy chain,MHC)表达情况,miR-206活性和表达水平以及受miR-206负调控的Connexin43(Cx43)的表达水平.结果发现,miR-206在BHK21细胞中活性和表达水平都明显高于C2C12细胞;马血清诱导后,BHK21细胞中MHC表达水平升高,miR-206活性和表达水平都升高,而Cx43表达水平下降.结果提示BHK21细胞具有成肌细胞特性.本研究首次发现BHK21细胞中miR-206的高活性,从miRNA角度证实了BHK21细胞来源于肾间质细胞,而不是肾实质细胞.研究结果还提示BHK21细胞有可能作为一种体外模型用于miR-206的功能研究.     

microRNA－21在肿瘤中异常表达的意义

microRNA（miRNA）是由18～26个核苷酸组成的内源性非编码的单链RNA分子,其通过与mRNA的结合来抑制其翻译过程从而调节相应基因的表达,在人体一系列生物学过程发挥着作用。miR-21在众多肿瘤组织中表达上调,临床试验证实miR-21的表达水平与肿瘤的临床分期,转移,预后存在密切联系,因此miR－21成为了癌症基因治疗的新靶点。     

miR-21及其在肝脏疾病中的研究进展

微小RNA(micro RNA, miRNA)是约22个核苷酸的RNA,其通过结合信使RNA(messenger RNA, mRNA),在转录后水平调节基因表达。因此, miRNA的失调广泛地影响着细胞过程,包括细胞增殖和分化。miR-21在几乎所有类型的癌症中上调,且促进癌细胞增殖,迁移和存活,因此被归类为致癌性miRNA(oncogenes miRNA, onco-miR)。miR-21在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)和肝纤维化的发生中都发挥着重要作用。该文就miR-21在肝脏疾病中的最新进展作一总结,以期更好应用于临床诊断和治疗。     

miR-124在抑郁症中的作用机制

抑郁症是世界范围内最常见的精神疾病之一,发病机制复杂,研究仍处于探索阶段。微RNA（miRNA）作为表观遗传机制的重要调控因子,在抑郁症的发生发展中起着重要作用。miR-124是神经系统中表达最丰富的miRNA之一,参与了神经元分化、小胶质细胞激活等生物事件。近年研究表明,miR-124在抑郁症患者和动物模型中表达异常,并参与了病理生理机制。然而,miR-124的表达异常情况及其相关机制的研究结果是较复杂的、甚至矛盾的。故本文对此进行梳理,总结了miR-124在抑郁症中的研究进展。     

含p53保守结合位点的microRNA表达载体的构建及应用

目的:构建含p53保守结合位点的microRNA(miRNA)表达载体,促进相关miRNA在具有野生型p53蛋白细胞中的高效表达。方法:改构miRNA表达载体pCMV-miR,在其多克隆位点前插入p53保守结合位点,分别将miR-138、miR-34a和miR-21前体序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改构的载体pCMV/p53-miR,将构建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21表达载体转染具有野生型p53的HeLa细胞和不表达p53的H1299细胞,分析p53对上述miRNA表达调控的影响。结果:转染改构的miRNA表达载体后,HeLa细胞中miR-138、miR-34a和miR-21的表达水平明显提高,它们对应的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的表达同时被显著下调。结论:在p53转录调控作用下,具有p53保守结合位点的miRNA表达载体能够更加有效地提高miRNA的表达水平;构建的载体不但可用于促进相关miRNA的表达,也能用于miRNA是否受p53调控的检测。     

MiR-206在骨骼肌发育中的功能

微RNA(microRNA,miRNA)是一类在分子进化中十分保守的非编码RNA,长度约22个核苷酸,一般情况下它在转录后水平抑制基因表达。miRNA在细胞增殖、分化、凋亡等诸多生理过程中发挥着重要作用。有些miRNA具有组织特异性表达,其中miR-206是目前发现的唯一在骨骼肌中特异表达的miRNA,它在调节骨骼肌发生过程中扮演重要角色。miR-206表达异常与一些肌肉相关疾病如肌肉营养不良、肌萎缩性侧索硬化症等有关。此外,在Texel羊中,myostatin基因的一个点突变就产生了一个miR-206和miR-1的靶点,抑制了myostain基因的表达,从而产生了双肌表型。因此,miR-206有可能成为治疗肌肉相关疾病和畜禽改良育种的重要候选分子。     

MicroRNA与变应性鼻炎

在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发病的免疫细胞分化及免疫应答过程中,micro RNA(miRNA)发挥着非常重要的调控作用。本文旨在对AR中miRNA研究进行回顾,以期为AR的有效治疗提供新的视角。首先,变应性鼻炎患者鼻粘膜中miR-7和miRPlus-E1194等差异表达。其次,在T辅助细胞发育、分化与活化过程中,miR-181a、miR-155、miR-21、miR-1、miR-31、miR-223、miR-139-3p、miR-126、Let-7家族成员会发生显著上调或下降,而且某些miRNA的相关作用靶点也得到验证。再次,嗜酸粒细胞定向分化祖细胞向成熟嗜酸粒细胞的分化过程中,miR-21和miR-223都有所上调。最后,在肥大细胞激活和脱颗粒过程中,miR-221和miR-222以及其他miRNA显著上调。以上miRNA参与了T辅助细胞分化与活化、嗜酸粒细胞发育、肥大细胞脱颗粒等AR病理进程的各个环节,而且,miRNA还会参与前期的抗原提呈等环节。可见miRNA对AR调控呈现出复杂性和多重性。     

大鼠心肌梗塞后心室重构中miRNA的差异表达

目的：筛选大鼠急性心梗后的心室重构过程中差异表达的微小RNA（microRNA,miRNA）,为miRNA调控心室重构的机制研究提供靶标。方法：20只成年雄性Wistar大鼠,分组如下：心肌梗死组（MI组,n=10）和假手术组（Sham组,n=10）。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支构建急性心梗模型建模。4周后对大鼠进行超声心动图检查和梗死边缘区心肌HE染色观察心室重构程度。利用miRNA芯片对心梗边缘区的miRNA进行差异表达检测,采用实时定量PCR验证芯片结果的可靠性。结果：心脏超声显示MI组大鼠左室重构明显,心梗边缘区心肌HE染色可见细胞间质大量胶原纤维沉积。miRNA芯片结果显示15个miRNA在心梗4周后呈差异表达,其中11个miRNA（miR-21、miR-23a、miR-125b、miR-132、miR-146b、miR-181b、miR-199a、miR-320、miR-324、miR-328和miR-499）表达上调,4个miRNA（miR-29、miR-30c、miR-133a和miR-208）表达下调。实时定量PCR验证结果与芯片结果一致。结论：这些差异表达的miRNA可能与心梗后心室重构相关,进一步深入研究特定miRNA的调控机制有望为基因治疗提供新靶点。     

miR-106a在肿瘤中的研究进展

miR-106a是一种致瘤性的miRNA,在多种肿瘤中表达发生变化并与肿瘤耐药性密切相关。miR-106a通过调控多种靶基因,在细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移和自噬等过程中发挥重要作用。结合临床诊断和预后检测结果,miR-106a很可能成为肿瘤标记物。本文对miR-106a在不同肿瘤中的研究进展进行综述。     

大鼠心肌梗塞后心室重构中miRNA 的差异表达

目的：筛选大鼠急性心梗后的心室重构过程中差异表达的微小RNA(microRNA, miRNA),为miRNA 调控心室重构的机制 研究提供靶标。方法：20 只成年雄性Wistar 大鼠,分组如下：心肌梗死组(MI组,n=10)和假手术组(Sham 组,n=10)。通过结扎大鼠 左冠状动脉前降支构建急性心梗模型建模。4 周后对大鼠进行超声心动图检查和梗死边缘区心肌HE 染色观察心室重构程度。利 用miRNA芯片对心梗边缘区的miRNA进行差异表达检测,采用实时定量PCR验证芯片结果的可靠性。结果：心脏超声显示MI 组大鼠左室重构明显,心梗边缘区心肌HE染色可见细胞间质大量胶原纤维沉积。miRNA 芯片结果显示15 个miRNA在心梗4 周后呈差异表达,其中11 个miRNA(miR-21、miR-23a、miR-125b、miR-132、miR-146b、miR-181b、miR-199a、miR-320、miR-324、 miR-328 和miR-499)表达上调,4 个miRNA(miR-29、miR-30c、miR-133a 和miR-208)表达下调。实时定量PCR 验证结果与芯片结 果一致。结论：这些差异表达的miRNA 可能与心梗后心室重构相关,进一步深入研究特定miRNA 的调控机制有望为基因治疗提 供新靶点。     

miR-290家簇在小鼠胚胎干细胞中的表达与调控功能

微RNA（microRNA,miRNA）是一类约22nt的非编码小分子RNA,主要在转录后水平负调控基因表达,其在生物发商、疾病、肿瘤中行使着重要调控作用。胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官。研究和利用ESC是当前生物工程领域的热点之一。近年来,越来越多的研究表明,miRNA在ESC的自我更新、分化、命运决定等方面行使着重要的调控作用。其中,miR-290家簇是在鼠科动物ESC中特异且高表达的miRNA。本文综述了miR-290家簇在ESC中的表达、功能及其分子调控网络方面的研究进展。     

大鼠肝纤维化相关microRNA及其候选靶基因的筛选

microRNAs (miRNAs)是一类功能性非编码RNA,在多种生物过程中具有重要作用.然而,miRNA的表达模式、调控网络以及参与肝纤维化的miRNA仍有待阐明.为了探讨与肝纤维化相关的miRNA及其靶基因的功能,为临床肝纤维化治疗提供理论依据,本研究前期已采用胆管结扎法(BDL)建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型.从大鼠肝脏中提取总RNA,应用基因芯片技术对胆汁淤积性肝纤维化肝组织中miRNA和mRNA表达谱进行综合分析;结合生物信息方法分析在胆汁淤积性肝纤维化中差异表达miRNA可能的靶基因;实时荧光定量PCR技术检测TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平.结果 表明,与正常肝组织相比,纤维化肝组织中有48个差异表达miRNA (FC＞2,P＜0.05),其中36个上调,12个下调;筛选出18个预测靶基因参与与纤维化相关的生物过程;TGF-β1处理LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平显著下调(P＜0.05).本研究筛选的差异表达miRNAs通过调节靶基因的表达在肝纤维化中可能发挥重要作用,将为miRNA在肝纤维化中的作用提供新的见解.     

MiR-132抑制肿瘤转移

肿瘤转移是造成癌症难以根治的重要原因之一.近年来越来越多的研究发现,miRNA在肿瘤转移过程中发挥了直接或间接的作用.本研究的目标是找到一种特异性的肿瘤转移相关miRNA,能够作为抑制肿瘤转移的潜在靶标.miR-132是一类与炎症、血管生长、中枢神经系统相关的miRNA,至今还没有研究证明其与肿瘤转移相关.为了验证miR-132与肿瘤迁移的相关性,本研究将miR-132转染入高迁移乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中,检测细胞迁移率的变化.实验发现miR-132能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移.为了进一步揭示miR-132抑制细胞迁移的可能机制,本研究通过生物信息学手段寻找并鉴定了3种可能与肿瘤转移相关的miR-132的靶基因,它们分别是CHIP(STUB1)、G3BP1、G3BP2.分别比对MCF7与MDA-MB-231细胞,及转染miR-132和对照组MDA-MB-231细胞中以上3种基因的表达差异,我们发现G3BP1、G3BP2可能参与miR-132对肿瘤转移的调控.本研究首次报道miR-132与肿瘤转移的关系,并揭示了miR-132调节肿瘤转移的可能机制,说明了miR-132具有作为特异性抑制肿瘤转移靶标的潜力,为抑制肿瘤转移提供一个新的靶点.     

微小RNA-1调解乙型肝炎病毒复制和肝细胞分化

微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一种高度保守的非编码小RNA,参与调节各种细胞过程。病毒可以利用细胞中的miRNA增加其在宿主细胞中的复制。迄今为止,miRNA在乙型肝炎病毒(HBV)复制过程中的作用还知之甚少。该研究中,大量miRNA拟态随着HBV复制被转染入肝癌细胞系。该研究注意到MicroRNA-1(miR-1)转染后导致HBV复制明显增加,并伴随HBV转录上调、抗原表达及子代分泌。然而,生物信息学和荧光素酶报告分析显示,miR-1可能不是直接以HBV基因组为靶点,而是通过调控宿     

microRNA21对人骨髓增生异常综合征细胞株增殖和凋亡的影响

目的:研究micro RNA21(miR-21)对人骨髓增生异常综合征转白血病细胞株SKM-1增殖和凋亡的影响。方法:通过构建携带miR-21基因重组慢病毒干扰载体感染SKM-1细胞株,下调miR-21的表达,荧光显微镜下观察感染效率。体外设LV-miR-21干扰组(LV-miR-21-si RNA组)、阴性对照组(negative control组)和空白对照组(normal组)三组。然后采用q RT-PCR的方法检测各组细胞miR-21的相对表达量,通过CCK8法检测细胞增殖情况,Hoest 33258分析各组细胞的凋亡情况,并运用western blot检测凋亡通路中cleaved-caspase-3、Bax关键因子的表达。结果:通过慢病毒介导的miR-21-si RNA下调miR-21的表达后,q RT-PCR检测结果显示LV-miR-21-si RNA组中miR-21的表达量较negative control组、normal组表达量明显降低(P0.05);CCK8结果显示LV-miR-21-si RNA组细胞增殖能力与negative control组、normal组比较明显下降(P0.05),Hoechst 33258结果显示LV-miR-21-si RNA组细胞较negative control组、normal组凋亡增加(P0.05);western blot证实cleaved-caspase-3、Bax在LV-miR-21-si RNA组中的表达明显升高(P0.05)。结论:miR-21在骨髓增生异常综合征转白血病细胞株SKM-1中高表达,通过下调miR-21的表达可以抑制SKM-1细胞增殖,促进其凋亡;miR-21可能在骨髓增生异常综合征向急性髓系白血病转化进程中起重要作用。     

用生物传感器方法测定正常小鼠肝脏中miR-21活性

目的:建立生物传感器检测小鼠肝脏中microRNA (miRNA)活性的方法,测定miR-21在正常小鼠肝脏中的活性。方法:首先,分子克隆方法构建检测miRNA活性的通用型质粒传感器Dsensor。将各种miRNA的互补序列插入Dsensor中构建成相应miRNA活性检测传感器。用水动力法将检测miR-21的Dsensor注射至正常小鼠体内,以miR-122 Dsensor为阳性对照,miR-206 Dsensor为阴性对照,以不插入任何miRNA互补序列的Dsensor为空白对照。不同时间点尾静脉采血测定Gluc表达,处死小鼠测定肝脏中Fluc表达,比较计算得出miRNA活性。最后,用QRT-PCR法测定小鼠肝脏组织中miR-21、miR-122和miR-206表达水平。结果:用RIF(Relative inhibiting fold)值表示miRNA活性,miR-21、miR-122和miR-206活性分别为80.03±21.25,29.90±5.90和0.92±0.29,表明小鼠正常肝脏中miR-21的负调控活性明显高于miR-122。然而,QRT-PCR法测定结果显示,miR-21的表达水平明显低于miR-122,而miR-206几乎没有表达。从miR-21与miR-122的活性与表达水平比较发现,miR-21的表达水平并没有真实反映其活性。结论:成功建立了一种小鼠肝脏中miRNA活性检测方法;首次发现小鼠正常肝脏中miR-21活性水平比miR-122更高,而表达水平却明显低于miR-122。提示miR-21对于维持肝脏的正常生理功能的重要作用,值得进一步研究其调控的靶基因和机理。