右美托咪定通过调节MALAT1/miR-126-5p/HMGB1轴减轻肝缺血/再灌注损伤

本文旨在探究右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)在肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia/reperfusion injury, HIRI)过程中的作用及其机制.将人正常肝细胞(HL-7702细胞)在低氧条件下培养24 h,再在复氧条件下培养12h,用实时定量PCR(quantitativ...     

Kupffer细胞在肝移植后缺血再灌注损伤的作用及研究现状

缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)是肝脏手术过程中常见的并发症之一,也是肝移植后肝脏主要发生的病理生理过程。肝移植后IRI主要包括肝脏局部缺血性损伤和炎症介导的再灌注损伤两个相互关联的过程。缺氧以及再灌注过程中缺少生物刺激因子使得再灌注组织缺乏氧供被认为是这两个不同阶段主要损伤机制,并相互促进缺血及再灌注损伤的发展。Kupffer细胞(kupffer cells,KCs)是肝脏常驻巨噬细胞,被认为在缺血期由病原体相关分子受体激活的,通过不同的信号传导通路产生氧化应激和促炎因子如肿瘤坏死因α、白介素1β,白介素12等发挥作用。KCs是调节肝脏缺血再灌注损伤机制中固有免疫和适应性免疫交叉作用网络的关键因素。     

坏死性凋亡在脑缺血/再灌注损伤中的研究进展

脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤涉及多种病理生理机制,但无论涉及何种机制,大多数受损脑细胞的最终命运都是死亡。然而细胞存在多种死亡模式,其中坏死性凋亡是一种新的程序性细胞死亡方式,参与脑I/R损伤。此次我们以坏死性凋亡为切入点,就近些年来坏死性凋亡及其在脑I/R损伤中的研究进展展开综述。     

NLRP3炎性体与中性粒细胞在心肌缺血/再灌注损伤中的交流

炎性体是识别危险模式或病原模式的信号平台,炎性体主要分为2大类:点头样受体(NLR)家族和PYHIN家族。炎性体与多种疾病有关,包括各种感染性疾病、炎症性疾病以及缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)等。炎性体与心肌缺血再灌注损伤是目前的研究热点之一。中性粒细胞作为数量最多的骨髓源性细胞,在无菌性炎症及固有免疫传导通路中发挥着重要作用。在缺血再灌注损伤过程中,死亡的心肌细胞释放大量促炎介质,导致炎性体的活化以及中性粒细胞的聚集。我们综述了NLRP3炎症小体在心肌缺血再灌注损伤中的作用,以及在此病理生理过程中NLRP3与中性粒细胞间的信息交流。     

人脐带间充质干细胞来源的外泌体减轻肝脏缺血再灌注损伤及机制的初步研究

目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体(huc MSCs-exo)对肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是否具有保护作用及可能的作用机制。方法利用贴壁法提取原代人脐带间充质干细胞(huc MSCs),超速离心方法提取细胞培养上清中的外泌体,分别进行鉴定;在体外实验中利用L02细胞缺氧复氧损伤模型探究huc MSCs-exo对细胞凋亡蛋白表达水平的影响;在体内实验中建立C57BL/6小鼠70﹪HIRI模型,72只小鼠随机分成四组,分别为Sham组(n=18)、IRI组(n=18)、PBS组(n=18)和exo组(n=18)。术后第6 h(n=6)、12 h(n=6)及24 h(n=6)通过检测血清AST及ALT水平、进行肝脏HE染色及CASPASE-3免疫组化实验,进一步探究huc MSCs-exo对HIRI的作用,多组组间比较采用方差分析。结果首先成功分离提取原代huc MSCs及huc MSCs-exo并进行鉴定;在体外,通过Western Blot实验证明huc MSCs-exo可降低L02细胞缺氧复氧(1﹪O2缺氧6 h,复氧2 h)损伤后细胞凋亡蛋白cleaved-CASPASE-3及cleaved-PARP表达水平;在体内,huc MSCs-exo处理后血清转氨酶水平较IRI组有所降低,这种差异在再灌注12 h的AST[(2895.0±998.6)U/L vs(971.8±797.8)U/L,t=4.010,P=0.004]及再灌注24 h的AST[(1926.0±377.2)U/L vs(597.2±524.8)U/L,t=5.231,P=0.000]、ALT[(2074.0±750.3)U/L vs(555.3±493.8)U/L,t=4.379,P=0.002]中具有统计学意义,肝脏HE染色及肝组织CASPASE-3免疫组化结果同样提示huc MSCs-exo可减轻C57BL/6小鼠70﹪HIRI。结论 Huc MSCs-exo可通过抗凋亡机制减轻HIRI,这为临床缓解HIRI提供新的治疗方向,其具机制有待进行更深入的研究。     

白藜芦醇对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

探讨白藜芦醇对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,IRI)的保护作用及作用机制。通过血管夹夹闭左侧肾蒂,并去除右肾的方法构建大鼠IRI模型。将大鼠随机分为假手术组(Sham)、肾脏缺血/再灌注损伤组(IRI)和白藜芦醇低中高剂量组(RSV)。利用ELISA检测各组血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(Creatinine,Cr);HE染色检测肾脏病理形态;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;免疫印迹检测沉默信息调节因子1(SIRT1)、p53、乙酰化p53(Acetyl 53)、B细胞淋巴因子2(BCL-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA-α)表达以及细胞色素C迁徙。结果显示白藜芦醇预处理可增加SIRT1和BCL-2表达,减少BUN、Cr、Acetyl 53、PUMA-α、Bax和TUNEL的表达。此外,白藜芦醇还可减少肾脏病理形态改变和细胞色素C迁徙,但对p53表达无影响。提示白藜芦醇预处理可通过抗凋亡作用减轻肾脏缺血再灌注损伤,其作用机制可能与激活SIRT1抑制p53乙酰化相关。     

sRAGE抑制缺血/再灌注引起的心肌细胞自噬

可溶性晚期糖基化终末产物受体（soluble receptor for advanced glycation end products,sRAGE）作为内源性保护物质,能够拮抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R）损伤发生,重要机制是减轻心肌细胞凋亡。而近年来随着细胞死亡研究的深入,细胞自噬被认为是一种新的细胞程序性死亡。sRAGE是否可以抑制缺血/再灌引起的心肌细胞自噬尚未见报道。本文研究证明,sRAGE可抑制缺血/再灌注引起的心肌细胞自噬。以心肌细胞缺氧/复氧模拟心肌细胞缺血/再灌注模型,蛋白质印迹检测自噬门户蛋白beclin-1的表达,激光共聚焦显微镜检测自噬小体及自噬溶酶体的形成。心肌再灌注期间,心肌细胞自噬小体增加,而自噬溶酶体下降。细胞内自噬小体堆积,说明心肌细胞缺血/再灌注使自噬小体与溶酶体结合受损,清除发生障碍。与缺血/再灌注（I/R）组比较,缺血/再灌+sRAGE（I/R+sRAGE）组的自噬流减弱。此外,自噬门户蛋白beclin-1也表达下降。以上结果从细胞形态学和蛋白水平两方面说明,sRAGE抑制了I/R引起的心肌细胞自噬。换言之,sRAGE可以直接作用于心肌细胞拮抗缺血/再灌注损伤,其保护性作用可能与抑制心肌细胞自噬有关。     

褪黑素与缺血再灌注损伤

褪黑素(melatonin,MT)具有强效抗氧化作用,在肠、肝脏、心脏、脑等器官的缺血再灌注损伤实验中具有清除自由基、保护线粒体、抗细胞凋亡等保护性作用。本文综合褪黑素应用于缺血再灌注损伤的动物实验的近几年相关文献,总结并分析褪黑素在缺血再灌注损伤动物实验中的保护作用及其相关机制。     

左旋精氨酸在冠脉搭桥术中心肌保护作用研究进展

冠状动脉搭桥术(Coronary artery bypass grafting,CABG)中发生心肌缺血再灌注损伤是难以避免的,而冠状动脉内皮损伤导致一氧化氮(nitrogen monoxidum NO)合成及释放减少是导致心肌缺血/再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury MI/RI)的重要因素。本文通过对左旋精氨酸(left-arginine,L-Arg)与NO、MI/RI之间的联系、L-Arg对MI/RI的保护作用及其机制、L-Arg-NO的心肌保护作用与剂量之间关系以及L-Arg在CABG中的临床应用等方面的研究进行综述,阐明提供外源性L-Arg通过L-Arg-NO通路促进体内NO的合成及释放,探讨左旋精氨酸在冠脉搭桥术中心肌保护作用的可行性。     

再灌注损伤诱导成年心肌细胞凋亡及Rb1对其抑制作用

曾认为末期已分化成熟的心肌细胞不发生细胞凋亡 ,但近来研究发现 ,某些因素可以诱导成年心肌细胞凋亡 ,并且许多心脏疾病的发病过程中有细胞凋亡参与。本实验采用定性定量方法 ,观察了缺血—再灌注损伤诱发心肌细胞凋亡的情况 ,以及人参皂甙单体Ｒｂ1对细胞凋亡的抑制作用1　材料与方法(1)再灌注损伤动物模型的建立　选用健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重 2 0 0～ 30 0ｇ ,雌雄不拘。用结扎左冠状动脉主干方法建立缺血 再灌注模型。动物分组 :缺血 再灌注组 (ｎ =2 2 ) ,缺血 45ｍｉｎ后再灌注 4ｈ ;假手术组 (ｎ =2 2 ) ,只在冠状动脉下穿…     

miR-92a对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗细胞凋亡作用

为了探讨miR-92a与缺血再灌注损伤肝细胞的相关性,以及miR-92a表达改变对抗细胞凋亡的影响,本研究建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,随机将21只大鼠分为7组,每组3只,分别为A:假手术(Sham)组;B:缺血(Model)组(3个时间点,每个时间点3只:6 h,12 h,24 h);C:缺血再灌注(IR)组(3个时间点,每个时间点3只:6 h,12 h,24 h)。缺氧模型建立,分为Control组和IR组。缺氧/复氧模型建立,分为Control组、Mimic组、Inhibitor组。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-92a、MAP2K4 (MKK4)和MAPK8(JNK1)表达,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Bcl-2、active Caspase-3、pJNK1的表达。CCK-8试剂盒检测细胞活性变化情况。研究结果表明,IR处理后大鼠肝组织损伤增加,缺血12 h时损伤最重,同时Bcl-2、active Caspase-3、pJNK1和MKK4表达增加,缺血引起细胞凋亡;IR处理后,大鼠肝组织miR-92a表达水平上升,均显著高于其它组(p0.05)。过表达miR-92a能降低active Caspase-3、IL-1β和IL-18的表达。抑制miR-92a表达,Bcl-2、active Caspase-3、pJNK1、IL-1β和IL-18表达会显著上升,同时诱导细胞凋亡。大鼠肝脏miR-92a的表达能抵抗大鼠肝缺血再灌注引起的细胞损伤和凋亡,与miR-92a调控抗凋亡蛋白、细胞炎症因子的表达及促进细胞增生作用机制有关。     

MiR-145在低氧诱导的心肌细胞中的表达及其作用研究

目的:探讨Mi R-145在低氧诱导的心肌细胞凋亡模型中的表达及其意义。方法:在正常和低氧条件下,采用RT-qPCR检测乳大鼠原代心肌细胞mi R-145的表达,进一步采用mi R-145抑制剂和拟似物处理心肌细胞,将细胞置于37℃密闭的缺氧盒中(95%N2和5%CO_2)培养,采用Caspase-3活性分析和TUNEL检测心肌细胞凋亡情况。通过结扎SD大鼠冠状动脉左前降支(LAD)建立心肌缺血再灌注(I/R)模型,了解mi R-145在缺血再灌注损伤中的作用。结果:mi R-145过表达可抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡。转染mi R-145抑制剂后,细胞对缺氧更敏感。缺血0.5h、1h和3h的心肌组织中mi R-145的表达明显低于周围非缺血心肌组织。缺氧3h、6h、12h时mi R-145水平明显下调。在缺血再灌注损伤模型中,mimic组Mi R-145表达明显高于对照组,而凋亡细胞(%)和梗死面积危险区(%)明显低于对照组。结论:Mi R-145可以抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡,减小缺血再灌注损伤导致的心肌梗死面积。     

锌对缺血／再灌注肝脏自由基含量和细胞凋亡的影响

目的：观察补锌对缺血再灌注（HIR）大鼠肝脏自由基含量及细胞凋亡的影响。探讨补锌保护肝损伤的机制。方法：用荧光分光光度法测定血清MDA含量;用电子自旋共振法测定肝脏自由基浓度;用流式细胞术检测肝细胞凋亡。结果：HIR组大鼠血清MDA水平和肝自由基产生均增加,补锌后降低;肝脏缺血再灌注后肝细胞凋亡率达到57.72%,补锌后降低40.85%。结论：减少自由基产生和抑制细胞凋亡是锌保护肝缺血再灌注损伤的重要机制。     

SIRT6在缺血再灌注损伤中的作用机制及研究进展

缺血性损伤后恢复血液供应会导致缺血再灌注（ischemia reperfusion, IR）损伤,这会导致组织损伤进一步加剧。IR损伤伴随着一系列机制,包括谷氨酸兴奋性毒性、钙超载、氧化应激、炎症和细胞凋亡,最终导致细胞死亡。IR损伤过程均由Sirtuins家族调控,在Sirtuins家族中,特异性定位于细胞核中的SIRT6可以促进对DNA损伤和氧化应激的抵抗,抑制基因组的不稳定性,在代谢稳态中发挥作用,同时SIRT6在人重要脏器中处于高度表达状态。但SIRT6在IR损伤中研究较少,结合国内外最新的研究进展,对SIRT6在IR损伤中的作用进行了回顾性的总结和分析,希望对国内外学者对于SIRT6在IR损伤中的研究提供一些参考依据。     

UCF-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注后JNK和ERK活性的影响

目的:探讨UCF-101对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内c-Jun氨基末端激酶(JNK)和胞外信号调节酶(ERK)活性的影响,进一步探讨UCF-101对局灶性脑缺血再灌注损伤脑保护作用的机制。方法:采用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组,缺血再灌注组,UCF组,应用TTC检测大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,Western blot检测ERK和JNK的活性。结果:UCF-101可下调脑缺血再灌注大鼠脑组织JNK蛋白的活性,上调ERK蛋白的活性,并降低梗死体积、坏死和凋亡细胞数。结论:UCF-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,抑制JNK凋亡通路、促进ERK生存通路,从而减轻细胞凋亡是其脑保护机制之一。     

RAGE与肝缺血再灌注损伤间的关系

晚期糖化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是一种单穿膜受体,同时也是一种多配体受体,属于免疫球蛋白超家族的成员。其配体包括高速泳动族框1蛋白质(high mobility group box 1,HMGB1)、晚期糖化终末产物(advanced glycation end product,AGE)、S100/钙粒蛋白(calgranulin)及β淀粉样肽等。在肝脏中,RAGE主要表达于巨噬细胞与树突状细胞上。RAGE一旦被激活,就会通过一系列的信号传导,诱导这些细胞释放出多种促炎症的物质,并引起中性粒细胞沉积,产生瀑布式的炎症反应链。肝脏的缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤作用机制繁多。其中RAGE作为一个关键的调节点,各种外来和内在的因素都可以通过作用于RAGE从而影响炎症反应。现就肝脏I/R损伤与RAGE之间关系做一综述。     

姜黄素对自发性高血压大鼠海马缺血/再灌注损伤神经元凋亡核通路的影响

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡c-Jun氨基末端激酶(JNK)核通路的变化特点,以及姜黄素对其保护作用可能机制。方法:雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)和SHR,随机分为5组:WKY假手术组(W-Sham组)、缺血/再灌注组(W-I/R组)和SHR假手术组(S-Sham组)、缺血/再灌注组(S-I/R组)、姜黄素100mg/kg预处理组(S-Cur组),上述5个实验组按再灌注时间又分为再灌注2h、6h、1d、3d、7d5个亚组(n=6)。采用四动脉结扎法制备脑缺血/再灌注模型,以TUNEL法检测海马CA1区的细胞凋亡,免疫组化法分析海马CA1区c-jun、c-fos的动态变化。结果:S-Sham组大鼠海马CA1区TUNEL细胞数量和c-jun、c-fos表达高于W-Sham组(P0.05),S-I/R组TUNEL细胞数量和c-jun、c-fos表达高于S-Sham组及W-I/R组(P0.05);S-Cur组TUNEL细胞数量和c-jun、c-fos表达较S-I/R组明显降低(P0.05)。结论:缺血/再灌注更易导致SHR海马神经元凋亡。姜黄素可抑制SHR脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡,其作用机制可能与抑制c-jun、c-fos蛋白的表达有关。     

Losartan和人参对实验性大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的比较研究

目的　研究Losartan和人参对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响 ,比较Losartan和人参对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ,采用末端标记原位细胞凋亡法检测心肌细胞凋亡 ,并利用光学显微镜进行细胞计数。结果　单纯缺血 再灌注组心肌细胞凋亡数较假手术组明显增多(37 5± 9 2 2 /视野vs 0 18± 0 0 91/视野 ,P <0 0 5 ) ,Losartan组和人参组心肌细胞凋亡数分别为 6 5 0± 3 5 9/视野和 8 74± 3 5 1/视野 ,较单纯缺血 再灌注组明显减少 (P <0 0 5 ) ,Losartan和人参两组间无明显区别 (P >0 0 5 )。结论　缺血再灌注可引起明显的心肌细胞凋亡 ,Losartan和人参对缺血再灌注心肌损伤具有相似的保护作用 ,均可明显减少缺血再灌注心肌细胞凋亡。     

MicroRNA对缺血再灌注损伤的调控作用

MicroRNA(miRNA)是一类小的(~20个核苷酸)、非编码的单链RNA分子,能够负调控基因表达,涉及多种信号途径和病理生理过程。缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)指组织器官缺血后重新获得血液的再灌注过程,灌注后组织、器官功能不能恢复,造成功能障碍和结构损伤的现象。IRI是影响多个组织与器官复杂的、系统的生理病理过程,并能够产生很多不可逆的损伤,导致级联的多器官功能障碍。现已发现多种miRNA在组织器官IRI中发生明显的变化,表明miRNA能够直接或者间接影响组织器官IRI。本文综述了miRNA的靶基因以及在心、脑、肝和肾IRI中的调控作用。miRNA不仅参与了器官IR损伤的病理生理过程,而且作为IR损伤的特定标志物在临床诊断和干预治疗中具有广阔的前景。     

腺苷和乙酰胆碱后适应诱导的心肌保护作用

近年来缺血后适应的提出成为抗再灌注损伤的里程碑,其良好的临床可控性和可靠的保护效应引起人们广泛关注。缺血后适应即在心肌长时间缺血后再灌注之前,进行数次短暂的再灌注,缺血的循环处理,诱导产生心肌保护效应,其循环次数和间隔时间存在种属差异。研究证实后适应不仅限制急性期梗死面积,还可以减轻长期损伤,其是否与保护血管内皮、抑制中性粒细胞介导的氧化损伤相关还存在争议。上调再灌注损伤补救激酶（reperfusion injury salvageHnase,RISK）通路是后适应保护的重要机制之一,即激活磷脂酰肌醇一3激酶（phosphatidy linositol3-kinase,P13K）-Akt途径和,或细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulatedkinase,ERK）途径,抑制线粒体通透性转换孔的开放,减少细胞凋亡和坏死。但是这两条途径的地位和关系还有待于进一步研究。为了更加适用于临床,研究者将机械调控转变为药物干预,观察药物能否模拟缺血后适应发挥保护作用,即药物后适应。腺苷是研究最广泛,也是最有希望成为临床正式用药的一种药物。我们实验室首先提出了乙酰胆碱可以模拟缺血后适应,通过线粒体ATP敏感钾通道发挥心肌保护效应。本文着重阐述缺血后适应保护缺血,再灌注损伤的效应和信号转导通路,尤其是腺苷和乙酰胆碱模拟药物后适应的可能机制和临床应用。