中国鄂温克、鄂伦春、达斡尔族永生细胞系的建立与保存

本采用ＥＢＶ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ）上清液转化Ｂ淋巴细胞,并加入环胞霉素Ａ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）抑制Ｔ淋巴细胞,成功地对中国东北地区鄂温克族、鄂伦春族及达斡尔族的部分个体建立了永生细胞系,其中鄂温克族４９株,鄂伦春族４０株,达斡尔族５１例,总计１４０株。永久保存我国特有民族的基因组,为分析其遗传学差异奠定了基础。     

中国鄂温克、鄂伦春、达斡尔族永生细胞系的建立与保存

本文采用EBV（Epstein?Barr Virus）上清液转化B淋巴细胞,并加入环胞霉素A（Cyclosporine A）抑制T淋巴细胞,成功地对中国东北地区鄂温克族、鄂伦春族及达斡尔族的部分个体建立了永生细胞系,其中鄂温克族49株,鄂伦春族40株,达斡尔族51株,总计140株。永久保存我国特有民族的基因组,为分析其遗传学差异奠定了基础。 Abstract：The immortal lymphoblastoid cell lines were established by EBV transformation of B cells and addition of cyclosporin A to inhabit the activity of T cells.In the present study ,140 immortal cell lines of the Ewenki,the Oroqen and the Daur ethnic groups in the Northeast China were established .This is an important part of the research of human genome diversity for the exploration of the origin and progression of different ethnic groups ,and also provide enough research materials for further studies.     

47例染色体异常患者永生淋巴细胞株的建立

采用4种不同的血细胞/EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）比率系列转染冻存血方法建立永生淋巴细胞株,建株成功率达97.87%,并成功地对47例染色体异常患者建立了永生淋巴细胞株,为今后不断进行的深入研究奠定了基础。     

转基因诱导永生化鸡细胞系的建立

传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒载体转染转录调控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重编程鸡成纤维细胞,并稳定培养至100代,获得永生化的细胞,而后逐步去除细胞因子、血清等添加物,优化细胞系培养体系,并对细胞驯化实现悬浮生长,以获得单位体积最大密度的细胞。研究结果表明:通过转基因将NANOG,LIN28和C-MYC 3个因子整合入细胞中表达,细胞系对碱性磷酸酶染色呈阳性反应,端粒逆转录酶(cTERT)基因在细胞系中显著上调,并稳定培养至100代,使得这些细胞具有自我更新特性和永生化的潜能。确定了培养基中的血清替代物KSR浓度为20%,并撤除了培养基中bFGF等生长因子,为细胞大规模培养应用提供了可能。永生细胞实现悬浮生长,细胞生长倍增时间为21.71 h,最大密度为1.3×106 cells/m L。因此,我们通过重编程技术建立了一株稳定的永生化细胞系,并且使它能在低浓度KSR中悬浮培养,这为疫苗制备等研究和生产提供科学依据。     

非综合征耳聋大家系永生细胞系的建立及几种EB病毒转化外周血淋巴细胞建系方法的探讨

永久保存珍贵的家系材料,是对该家系进行深入研究的基础,为此采用EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）转化淋巴细胞的方法对中国江苏淮阴地区非综合征耳聋大家系行建系工作。该家系患者呈典型的母系遗传特征,且研究发现患者中均具有线粒体DNA 12s RNA A1555G突变,是迄今世界上最大的非综合征耳聋家系之一,在该家系的建系过程中 使用了4种不同的方法。建系结果分别为：微量全血法1株,冻存全血法1株,冻存白细胞法14株及环孢霉素A（CyA）法36株,共计52株。本文就建系工作及这四种转化方法作一简单探讨。     

人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能

研究人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个T细胞系(5个CD4 T细胞系,1个CD8 T细胞系)细胞,液氮中冻存32~54个月后复苏,台盼蓝染色法检测复苏后T细胞系细胞的存活率,用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测复苏后T细胞系细胞的功能。结果显示,6个T细胞系细胞液氮冻存解冻后细胞的存活率为24.7%~93.5%,过夜培养后细胞的存活率为2.5%~72.2%。CD8 T细胞系细胞的存活率高于CD4 T细胞系细胞。6个复苏后的T细胞系细胞在PHA诱导后均能分泌IFN-γ。人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存复苏后能够保持较好的存活率和功能。     

牙鲆、鲈鱼和真鲷的四个永生性细胞系建立

牙鲆、鲈鱼和真鲷的四个永生性细胞系建立童裳亮李宏＊＊苗宏志（青岛海洋大学生命学院,青岛２６６００３）牙鲆（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓ）、鲈鱼（Ｌａｔｅ－ｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）和真鲷（Ｐａｇｒｏｓｏｍｕｓｍａｊｏｒ）是我国沿海广为养殖的优良鱼种。近几年来,由于养殖面积扩大和养殖密度提高,病害不断发生。为了给这些鱼的病毒性传染病和立克次氏体病的检疫和研究提供宿主细胞...     

带有L6565小鼠白血病病毒的细胞系的建立

用L6565小鼠的胸腺、脾脏、肝脏和肾脏组织,以及外周血的无细胞提取液,分别感染NIH3T3细胞,经逆转录酶活性测定,挑选出两株感染了L6565白血病病毒的细胞,并证实L6565白血病病毒感染小鼠后主要分布于血液和淋巴系统。电镜下可观察到细胞内含有A型和C型病毒颗粒,细胞的倍增时间分别为18和16小时。细胞的XC合胞试验为阳性,在光镜下未观察到细胞的形态发生转化。收集细胞内和释放到细胞培养液中的病毒并注入新生小鼠皮下,两个月左右做血象和组织病理检查,存活小鼠全部发生了淋巴细胞型白血病。     

人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系BUPH∶OVCA-3的建立及其生物学特性

介绍人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系的建立 ,研究其生物学特性 .以卵巢浆液性乳头状囊腺癌的腹水细胞为材料 ,进行体外培养 .将永生化基因———SV4 0T抗原基因转染第 2代细胞 ,得到永生化细胞系 .通过光学显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等 ,研究其生物学特性 ,并与其来源细胞的生物学特性进行比较 .建立了一株人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,命名为BUPH∶OVCA 3,现已传至 6 0余代 .其生物学特性为 ,细胞生长旺盛 ;具有人体恶性细胞的核型特征 ;细胞恶性度较低 ,不具有集落形成能力及裸鼠接种致瘤性 ;除较未永生化细胞生长速率增快 ,饱和密度增加外 ,仍保留上皮细胞的分化表型 .结果表明 ,BUPH∶OVCA 3为一株恶性度较低的人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,保留其来源细胞的生物学特性 ,可作为研究恶性度较低的卵巢上皮癌的体外模型     

卵巢组织冻存与移植生育力保存的应用现状与研究进展

年龄增长、疾病以及抗肿瘤治疗等均可能会造成女性生育力的下降甚至丧失。随着诊疗技术的发展,癌症死亡率逐渐下降,因此患者的生育力保存需求较前增加。胚胎冻存、卵母细胞冻存和卵巢组织冻存是目前常用的女性生育力保存方式。卵巢组织冻存与移植至今仅有20余年历史,现已成为临床上具备医学指征的生育力保存方式,有助于重建患者的内分泌和生育功能,已有超200多例患者通过此技术成功完成生育。为提高冻存卵巢组织再移植的安全性,现有研究将卵母细胞体外成熟技术、人工卵巢技术与之相结合,避免携癌风险高的冻存卵巢组织移植后的癌症复发风险。较多的研究均已证实了卵巢组织冻存与移植技术的有效性和安全性。尽管卵巢组织冻存与移植技术得到了快速发展,但是该技术仍面临如何通过减少卵泡储备损失进而延长卵巢组织移植后有效性等挑战,尚需要更多的基础和临床研究促进卵巢组织冻存和移植技术的进步与发展。     

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid cell lines (LCL) in vitro. Since LCL are latently infected with EBV, they provide a model system to investigate EBV latency and virus-driven B cell proliferation and tumorigenesis¹. LCL have been used to present antigens in a variety of immunologic assays^{2, 3}. In addition, LCL can be used to generate human monoclonal antibodies^{4, 5} and provide a potentially unlimited source when access to primary biologic materials is limited^{6, 7}.A variety of methods have been described to generate LCL. Earlier methods have included the use of mitogens such as phytohemagglutinin, lipopolysaccharide⁸, and pokeweed mitogen⁹ to increase the efficiency of EBV-mediated immortalization. More recently, others have used immunosuppressive agents such as cyclosporin A to inhibit T cell-mediated killing of infected B cells^{7, 10-12}.The considerable length of time from EBV infection to establishment of cell lines drives the requirement for quicker and more reliable methods for EBV-driven B cell growth transformation. Using a combination of high titer EBV and an immunosuppressive agent, we are able to consistently infect, transform, and generate LCL from B cells in peripheral blood. This method uses a small amount of peripheral blood mononuclear cells that are infected in vitroclusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23 with EBV in the presence of FK506, a T cell immunosuppressant. Traditionally, outgrowth of proliferating B cells is monitored by visualization of microscopic clusters of cells about a week after infection with EBV. Clumps of LCL can be seen by the naked eye after several weeks. We describe an assay to determine early if EBV-mediated growth transformation is successful even before microscopic clusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23^hiCD58⁺ cells observed as early as three days post-infection indicates a successful outcome.     

新疆4个民族STR基因座遗传多态性研究

对新疆维吾尔放族,锡伯族,乌孜别克族,柯尔克孜族4个民族的400份样本和40个家系进行STR基因扫描,基因分型和遗传结构分析。获得了4个民族STR遗传特征及遗传方式等的科学数据。结果为9个STR基因座上维吾尔族有66种STR等位基因,148种基因型;锡伯族有72种STR等位基因,163种基因型;乌孜别克族有65种TSR等位基因,168种基因型;柯尔克孜族有71种STR等位基因,191种基因型,用新疆4个民族的数据和汉族人群,美国高加索人群,美国黑人相比较发现,中国民族遗传特征数据之间差异不显著,而和国外民族相比差异显著,进一步证明中华民族是一个不可分割的大家庭。     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞（PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B—LCL)。然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)S基因的重组痘苗病毒感染B—LCL,应用问接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达。结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B—LCL。成功转化后的B—LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团。汉滩病毒S基因在B—LCL中能有效表达核衣壳蛋白。含S基因的重组痘苗病毒感染的B—LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞。     

两个可进入种系的ES细胞系的建立

从１２９／ｔｅｒ小鼠中建立了９个ＥＳ细胞系,它们在核型、生长速度、体内外分化能力等方面显示了各自不同的特点。通过囊胚显微注射法,将ＥＳ细胞注入Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ胚胎中,制作了嵌合体,并通过对嵌合体后代毛色的观察,判断了嵌合体生殖细胞的组成。结果表明,ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１、ＭＥＳＰＵ２２都具有很强的种系嵌合能力。比较这两个细胞系与其他细胞系,证明一个好的ＥＳ细胞系必须具备核型正常、生长速度快、体外     

稳定表达人SidT2基因细胞系的建立及其dsRNA转运功能的研究

目的:构建稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,探讨SidT2基因过表达与细胞转运双链RNA(dsRNA)能力的关系。方法:根据人SidT2基因序列设计引物,克隆其编码区序列,经双酶切后与pEGFP-N3载体连接,构建其真核表达载体,分别瞬时转染BHK及MDCK细胞,并使用G418筛选稳定表达细胞系;在此基础上,体外转录合成绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA,以GFP基因为报告基因,进一步分析过表达人SidT2基因对BHK及MDCK细胞转运dsRNA能力的影响。结果:经基因克隆、酶切、连接后,构建了人SidT2基因真核表达载体pEGFP-SidT2;经瞬时转染及G418筛选,获得稳定过表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,实时荧光定量RT-PCR分析表明,其SidT2基因转录水平分别提高71、64.5倍;稳定表达SidT2基因后,在培养液中添加GFP dsRNA,GFP荧光强度较对照细胞分别降低88.1%、73.7%,表明稳定表达SidT2基因的BHK、MDCK细胞转运dsRNA的能力显著增强。结论:构建了稳定表达人SidT2基因的BHK及MDCK细胞系,SidT2基因过表达可显著提高外源性dsRNA的转运能力。     

福建汉族8个红细胞血型系统的分布

对福建汉族人群红细胞血型系统的19个抗原进行了调查。各系统的调查人数与基因频率为:ABO:216人,p=0.1936、q=0.1766,r=0.6298;Lewis:214人,Le(a+)17人,表现型频率=7.94％;P:215人,n=0.1427;Diego:215人,Di(?)=0.2830;MNSs:用抗M、抗N血清调查了324人,对其中150人又用S和s抗血清进行了调查,m=0.5695、n=0.4305、单倍型频率MS=0.0200、NS=0.0139,Ms=0.5500、Ns=0.4161;Dhffy:214人,发现Fy(a-)3例;Fy(?)=0.8817;Kidd:215人,未发现JK(a-b=)型,JK(?)=0.4767;Rh:214人,发现1例CCdee型,d=0.0686,单倍型频率r(?)=0.0686、R~1=0.6352、R~2=0.1970、R~0=0.0605、R~2=0.0388。