双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代NIH动物法.将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关系图并计算出疫苗效力值E-NIH.结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M-NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2.41～5.85之间,而相应的M-NIH值在5.11～10.19之间.从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的.     

Sabin-IPV抗原性及免疫原性分析

目的比较3个不同厂家的Sabin-IPV抗原性及免疫原性特点。方法采用ELISA方法,利用血清型和抗原位点特异性的单克隆抗体检测Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗D抗原含量,分析疫苗相对D抗原含量和单克隆抗体的相对反应性,评估疫苗抗原性;利用大鼠体内效力试验分析Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗的免疫原性,评估疫苗效力。结果与英国国家c IPV标准品Pu91相比,3个厂家的Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗相对D抗原含量存在差异,其中C厂家的相对D抗原含量最高;3个厂家的血清Ⅰ型Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗抗原性差异无统计学意义;血清Ⅱ型中,除B厂家的Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗的抗原位点1的抗原性较弱以外,A、C其2个厂家的Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗抗原性差异无统计学意义;血清Ⅲ型中,3个厂家的Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗与抗原性差异有统计学意义。接种Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗的大鼠血清对Sabin株及Salk株病毒具有良好中和效力。结论除血清Ⅲ型外,血清Ⅰ型和Ⅱ型Sabin株脊髓灰质炎病毒疫苗的抗原性与疫苗免疫原性一致。ELISA检测疫苗抗原性的方法有望替代疫苗动物体内效力评价试验。     

流行性感冒裂解疫苗的研制

作为换代产品,流行性感冒裂解疫苗的研制已取得突破性进展,根据WHO有关规程的规定和大量的试验研究结果。完整建立了该疫苗的生产工艺和生产质量控制系统,完成了“流行性感冒裂解疫苗制造及检定规程”等规定性文件的起草和审核工作,以中试规模连续生产了三批疫苗并全部自检合格,通过疫苗稳定性试验,效力试验,异常毒性试验及过敏性试验等观察。进一步肯定了疫苗的质量。     

双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫 苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代 NIH动物法。将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹 心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关 系图并计算出疫苗效力值E-NIH。结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M- NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2．41～5．85之间,而相应的M-NIH值在5．11～ 10．19之间。从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、 成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的。     

肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗（Ⅱ型）性的研究

采用空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测疫苗效力的方法,对肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗（Ⅱ型）进行了系统地稳定性试验研究。结果表明,疫苗置３７Ｃ３天,室温３周,２～８℃保存一年、一年关、两年和两年半。效力试验检测结果均达到合格标准,证明疫苗稳定性良好。     

肠道病毒EV71疫苗效力国家参考品的协作标定

目的建立肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)疫苗效力参考品,用于EV71疫苗效力的小鼠ED50检测质量控制。方法选取经Ⅲ期临床试验验证具有良好保护效果的一批EV71疫苗作为候选参考品,采用EV71小鼠ED50检测方法,对候选参考品进行效力的协作标定及适用性研究。结果候选参考品在各实验室的ED50均值分别为9.5~51.0 U,CV为3.8%~18.7%;5个实验室总均值为23.5 U,CV为60.9%。各实验室检测结果均符合正态分布;3个EV71灭活疫苗与参考品均表现出了良好的剂量效应关系,中和抗体阳转率均随疫苗稀释度的增加而降低,下降曲线形态相近。当以候选参考品为标准,3个灭活疫苗的体内效价比均值分别为2.7倍、0.8倍和0.9倍;CV分别为5.5%、27.5%和11.2%。结论建立的EV71疫苗效力国家参考品(320 U/0.5 m L),可用于EV71疫苗效力的小鼠ED_(50)检测质量控制。     

肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗(Ⅱ型)稳定性的研究

采用空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）检测疫苗效力的方法,对肾综合征出血热地鼠肾细胞灭活疫苗（Ⅱ型）进行了系统地稳定性试验研究。结果表明,疫苗置３７℃３ 天,室温３ 周,２～８℃保存一年、一年半、两年和两年半。效力试验检测结果均达到合格标准,证明疫苗稳定性良好。     

戊型肝炎疫苗上市后质量控制

目的对中国独创的基因重组戊型肝炎(hepatitis E,HE)疫苗Hecolin~?上市后质量的一致性进行评价。方法比较了Hecolin~?批签发疫苗与III期临床试验疫苗的效力试验检测结果,进而通过趋势分析评价Hecolin~?疫苗上市5年来的批间质量一致性。结果批签发疫苗与Ⅲ期临床试验疫苗的体内效力试验结果一致。批签发疫苗体内效力、铝含量、硫柳汞含量、p H等关键指标,中国食品药品检定研究院与企业的趋势分析结果均显示具有较好的一致性。结论趋势分析结果表明,上市后Hecolin~?疫苗批间质量一致性较好,质量稳定。     

无细胞百日咳疫苗的质量控制及其标准化

无细胞百日咳疫苗在全世界范围内已逐渐用于婴幼儿的计划免疫和加强注射中,但到目前为止没有完全令人满意的效力试验方法。小鼠保护试验不适合对无细胞百日咳疫苗进行效力评估,免疫原性试验在衡量制品一致性方面是有用的,但与临床保护之间缺乏相关性,最近建立的气雾攻击主动保护试验为功能性效力试验开创了美好的前景。用生物学结合物理化学方法对疫苗抗原含量,纯度,安全性和免疫原性的研究,对新开发的尚无有效效力试验方法的同类疫苗质量控制及标准化问题提供了指导。     

每次稀释后减少试验动物数量对人用狂犬病疫苗效力评价的影响

正狂犬病疫苗质控中最重要的参数是效力,效力参数是通过接种大量试验动物小鼠后检测得到的。因为目前全世界进行动物实验时普遍遵循"3Rs"原则[Reduction (减少) Replacement (替代) Refinement(优化)],所以有必要制定一个替代方法在保证疫苗具有生产持续性的同时还可以减少实验动物的用量。因此,本研究观察了在NIH实验中减少小鼠用量对疫苗效力评价的影响。     

评价肺炎支原体疫苗效力的仓鼠攻击试验

<正> 在1964-1976年间,许多实验室研制了一系列的福尔马林灭活的肺炎支原体疫苗并进行了效力试验。有些疫苗是在众多的部队新兵中进行了现场试验,有些则给少数志愿受试者接种,然后用强毒株进行攻击试验。利用接种过疫苗者中支原体肺炎自然发病率的降低和感染过支原体人群中病情的减轻来进行评价,结果表明,这些疫苗的保护效力是很低的。当将疫苗加入明矾佐剂增强其抗原性或简单地增加疫苗剂量时,能提高用     

狂犬病疫苗的效力测定及参考标准品的发展

<正>与其他疫苗不同,狂犬病疫苗兼有治疗和预防双重作用,加之发生狂犬病后几乎无一能存活,因此对狂犬病疫苗的效力测定是十分重要的。早在巴斯德时代,人们就认识到应该检测狂犬病疫苗的免疫效力,虽然做了大量工作,但由于实验的困难,长期以来一直未予实施。     

流行病学在疫苗政策中的作用

在预防接种计划发展的全过程中,流行病学方法的运用都是重要的。薪疫苗获准之前,必须精心设计临床试验,确定其安全与效力。之后,为了阐明适宜的疫苗发送策略,需要对疾病进行流行病学评价。一旦疫苗投入常规使用,疫苗及预防接种计划都需继续评价;还应建立监测计划,以便发观疫苗安全与效力的变化,检测目标人群的覆盖率。任何重要改变,都应有专门研究进一步评价。疫苗获准之后,疫苗及预防接种计划的评价,在英国的疫苗政策形成中仍起重要作用。     

黏膜抗体在疫苗免疫效力评价中的前景

简单介绍目前疫苗效力检验的方法、黏膜抗体的功能及其在实验室疫苗效果效力评价中的应用,提出了黏膜抗体作为疫苗免疫效力试验的替代指标或免疫监测的主要抗体的建议。     

HBsAg生化性状对乙型肝炎疫苗效力影响的研究

比较研究了重组酵母HBsAg P24亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。分别用HPLC及SDS－PAGE法检测重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P24亚基在还原条件下降解和P24亚基间二硫键桥联程度,并检测乙型肝炎疫苗小鼠体内效力（ED50值）和体外相对效力（RP）,分析HBsAg的P24亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度对乙型肝炎疫苗效力的影响。结果表明HBsAgP24亚基还原条件下降解成分Sub-P24的相对含量在5．2％－31％间,P24亚基间二硫键桥联型HBsAg颗粒相对含量在41．9％－71．8％范围内与疫苗的实验室效力无关。所生产重组酵母乙型肝炎疫苗HBsAg的P24亚基间二硫键结合及其还原条件下降解程度不影响乙型肝炎疫苗实验室效力。     

ELISA检测奶牛乳房炎疫苗效果方法的建立

建立一种检测抗乳房炎疫苗抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于免疫后具有保护性效果的抗体水平。通过对细胞抗原制备、最佳抗原包被浓度的确定、抗原包被和封闭最佳条件确定、酶标抗体的最佳工作浓度及作用时间等反应体系的筛选和确定,建立了检测抗乳房炎疫苗抗体的间接ELISA方法。结果表明,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)抗原最佳包被质量浓度分别为5 mg.L-1、10 mg.L-1、10 mg.L-1;包被条件为4℃过夜;用2%人血白蛋白作为封闭剂最佳封闭条件是37℃封闭30 min;酶标抗体最佳作用时间为30 min。结论攻毒试验表明,疫苗免疫后,血清中抗体滴度达到或超过免疫前2倍时,奶牛即具有较好的乳腺保护效力。这一指标可作为疫苗效力检验的标准。     

MUTZ-3树突细胞对B型流感嗜血杆菌结合疫苗组分的应答

<正>对于疫苗注册和批签发而言,疫苗效力测定应该是指令性进行的,由于体内效力测定受到各种各样因素的限制,因此有必要采用相关的体外替代效力测定。这些替代试验应当最好包括来源于目标(人类)种系的细胞,针对人体体内发生的因免疫接种导致的一系列免疫应答是不可能通过使用单一细胞类型就可测定出来的,即使树突细胞能成为一种     

粗制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

分别用Sepharose 4B、Sephacryl-200HR和Sepharose6-Fast flow柱色谱进行地鼠肾细胞狂犬疫苗浓缩原液纯化试验,试制精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗。对疫苗的残余牛血清含量、效力、收获率和安全性进行检测,优化和建立了精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺。     

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

分别用Srpharose4B、Sephacryl-200HR和Sepharose6-Fastflow柱色谱进行地鼠肾细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化试验,试制精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗.对疫苗的残余牛血清含量、效力、收获率和安全性进行检测,优化和建立了精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺.