细胞培养中支原体污染的检测

本文介绍以应用指示细胞培养物的DNA荧光染色为主,辅之以微生物培养(支原体营养肉汤和琼脂培养)的方法作为细胞培养中的支原体污染的检测系统。用该系统检测了45个细胞系,支原体等微生物污染达66.6％,其中确证支原体污染率为31％。     

PCR技术在支原体检测中的应用

一、前言 支原体(Mycoplasma)是界于细菌和病毒之间的原核微生物,分类学上是一个独立的纲——柔膜体纲( Mollicute)。 1989年Nocard与Roux从牛的胸膜肺炎病灶中首先分离到,以后又从病人、家畜标本中查出。迄今发现的支原体有100多种,确定对人致病的有五种。肺炎支原体(M.pneu-moniae)能引起人的原发性非典型性肺炎;解脲脲原体( Ureaplasma urealyticum)能引起非淋菌性尿道炎、绒毛膜羊膜炎、早产及低体重新生儿,人型支原体(M.hominis)主要引起肾孟肾     

HeLa细胞和HBK细胞实验交叉污染消涨规律的探讨

本文用抗蹭丝蛋白的免疫荧光染色和细胞在不同条件下的生长曲线测定,对ＨｅＬａ细胞和ＢＨＫ－２１细胞实验交叉污染系统中两种细胞的消涨规律进行了初步探讨。结果表明：当ＢＨＫ－２１细胞实验污染ＨｅＬａ细胞后,其消涨趋势总是ＢＨＫ－２１细胞高,其次是ＨｅＬａ的生长速率明显比ＢＨＫ－２１细胞高,其次是ＨｅＬａ细胞可能分泌某种抑制ＢＨＫ－２１细胞生长的因子,而两种细胞的营养竞争可能对ＢＨＫ－２１细胞的被淘汰不是     

细胞培养的支原体污染

<正>运用细胞培养进行病毒繁殖时,支原体污染是经常遇到的而且是非常严重的问题之一。这些污染对培养细胞产生各种各样的恶果:改变各种代谢活动致使不能进行培养细胞的正常生化研究;细胞生长速度减缓,迫使二倍体细胞系过早衰老,染色体发生畸变,并引起细胞形态的永久改变。事实表明:支原体污染虽会降低细胞培养中病毒的合成,但有时也能促进病毒的繁殖,这可能是支原体对干扰素产生的抑制。     

支原体污染研究的新进展

支原体污染细胞培养物是个极普遍的世界性问题,在十几年前就曾引起我国细胞培养工作者的广泛重视。它不仅引起细胞生物学性状的多种改变,影响细胞生物学的研究工作,而且也将导致用细胞基质制备的多种生物制品报废,造成巨大的人力物力浪费。多年来从事细胞生物学研究以及生物制品学工作的科学家们一直致力于检测细胞培养物中支原体方法的研     

细胞培养中支原体污染的检测和去除

细胞培养中支原体污染是一个长期困扰实验室工作人员的难题。近年来,检测方法不断完善,核酸杂交,多聚酶链反应等新的方法已建立起来,对于支原体污染的去除主要是应用抗生素,可选用一些新的更为有效的药物。     

Mycoplasma术语是支原体还是枝原体？

在医学微生物学中出现的Mycoplasma多译为“支原体”,但从其词义而言,将其译为“枝原体”更为合适,这种没有细胞壁,能形成丝状和分枝状的原核细胞微生物,正像Mycobacterium应译为“分枝杆菌属”那样,而不译成“分支杆菌属”。中科院微生物所王祈楷研究员长期从事Mycoplasma的研究,认为它的中文确切定名为一枝原体更适中,尽管“支”与“枝”读音相同,但从其内含而言,用“枝原体属”术语更为恰当,因此,在“中国大百科全书生物学卷”（第一版）以及即将出版的“中国大百科全书”（第二版）中的Mycoplasma均采用“枝原体属”术语名称。山东大学韩贻仁教授也认为Mycoplasma译为“枝原体属”更为恰当,从术语定名而言,最好遵守“一物一名”的原则,避免一物多名。     

细胞培养中支原体污染的检测和去除

细胞培养过程中的支原体污染相当普遍。如何快速,简便地检测支原体,并且采取有效措施去除支原体一直是细胞工作者们亟待解决的难题。支原体检测方法有培养法,ＤＮＡ荧光染色法,单克隆抗体免疫荧光法。生化法,ＤＮＡ探针杂交法,ＰＣＲ法,支原体去除方法有药物法。免疫法,稀释法,加热法。本文就近年来有关支原体的检测及去除作一综述。     

用PCR及RFLP方法分析支原体与植原体的同源性

将猪鼻支原体和泡桐丛枝病植原体的16S rDNA进行PCR扩增,分别得到一条1 kb左右的扩增片段。PCR扩增产物用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、SalⅠ和SmaⅠ进行RFLP(限制性片段长度多态性)分析,发现用RFLP分析猪鼻支原体和泡桐丛枝病植原体16S rDNA序列同源性的相关系数为0.72。     

用Ciprofloxacin去除传代细胞株中的支原体污染的研究

在应用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中,支原体污染仍是一个非常棘手的问题。对Ｖｅｒｏ和ＳＰ２／０－Ａｇ１４等细胞,应用Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ,１０μｇ／ｍｌ处理１４天,支原体检测全部转阴,经４个月的培养、传代、冻存、复苏,每次支原体检测均保持阴性。对去除了支原体的Ｖｅｒｏ和ＩＳＣ－１１６细胞株,测试了其生长特征和功能,均未见受影响。     

固定化酶母的污染处理

本文报道了在固定化酶母细胞研究与分批式生产中试中所出现的杂菌污染情况及其相应的处理措施。结果表明，采用抗生素等药品对于细菌性杂菌污染去除效果明显。     

用PCR检测细胞培养中支原体污染

细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题.为了扩增6种支原体(精氨酸支原体,口腔支原体,人型支原体,猪鼻支原体,发酵支原体及莱氏支原体)核糖体RNA操纵子的16s和23s DNA间区,设计了三个通用PCR引物(F1,F2及R1).当以6种支原体DNA为模板时,引物F1和R1产生340到468bp的片段,引物F2和R1产生145到211bp的片段,当用Hela细胞或E.coli DNA作为模板,用引物F1和R1时,在电泳中未观察到特定区带.此法最小能检出8.5fg精氨酸支原体DNA,相当于13个精氨酸支原体.这说明,当这些支原体污染细胞培养时,能用PCR法检测出来.     

从传代细胞株中去除支原体污染的研究

用抗菌药物从传代细胞株中去除支原体污染的试验结果表明,卡那霉素和庆大霉素对支原体均无明显的杀灭作用。用lOμg／ml的Tiamutin处理支原体的效果较好。采用单克隆细胞稀释、选择法与Tiamutin(10μg／ml)处理相结合,经电镜观察可去除细胞中支原体的污染。检查支原体的方法是否特异、敏感、快速是对试验结果正确判断的一个重要的关键。为了防止支原体的污染,除了加强对原材料(包括小牛血清、培养液等)的检查以及把住严格的无菌操作条件外,必要时可在培养基中加入10μg／ml的Tiamutin。     

基于线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ基因序列的细胞种属鉴别及细胞交叉污染分析

目的建立一种快速、简便、敏感和特异的基于线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,CoI)基因序列的细胞基质检测方法,用于细胞种属鉴别和不同种属间的细胞交叉污染分析。方法①提取非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、狗肾细胞(MDCK细胞)和牛肾细胞(MDBK细胞)基因组DNA,以PCR扩增相应细胞的线粒体CoI基因保守区的基因条码序列,将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测其基因片段的大小,并与文献报道的来源于ATCC相应细胞系线粒体CoI基因保守区的基因条码序列片段大小进行对比,以确定细胞的种属类别;②用Vero细胞、MDCK细胞和MDBK细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物分别与相应细胞和其他不同种属的细胞的基因组DNA进行PCR扩增,检测方法的特异性;用不同浓度的细胞基因组DNA与相应细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物进行PCR扩增,检测方法的灵敏度;③以不同种属细胞的线粒体CoI基因保守区的基因的特异性引物分别与多种细胞混合液提取的细胞基因组DNA进行PCR扩增,检测细胞间的交叉污染。结果 Vero细胞、MDCK细胞及MDBK细胞线粒体CoI基因保守序列中的基因条码序列片段大小,与来源于ATCC相应细胞系线粒体CoI基因保守序列中的基因条码序列片段大小相符。该方法具备较好的特异性,检测灵敏度为1.0 ng/μL,不同种属间细胞的交叉污染可被检出。结论该方法可有效地判断细胞的种属来源,亦可用于不同种属间细胞交叉污染的分析。