Variation in N2 fixation,N and P contents of mycorrhizalVigna unguiculata in relation to the progressive development of extraradical hyphae ofGlomus mosseae

Summary Vigna unguiculata cv. 58–185 grown in a sterile Dek soil was inoculated withRhizobium sp. orRhizobium sp. plusGlomus mosseae. Response of the host plant to the treatments was estimated by periodic measurements of shoot and nodule dry weights, N₂ fixation (C₂H₂ reduction activity) and N and P contents up to the 50th day of the growth cycle. It was only 45 days after planting that shoot dry weight of dually inoculated plants differed significantly from that of plants inoculated withRhizobium sp. alone. Nodule dry weight and N₂ fixation of dually inoculated plants were significantly higher than those of plants inoculated withRhizobium sp. alone from day 20 after planting, but there was no significant difference in N content (%). During the first 20 days, shoot P content (%) of both sets of plants decreased progressively, P content of dually inoculated plants being lower than that of the others. Later, P content of dually inoculated plants increased rapidly whereas P content of the other plants remained constant. Increase in nodule dry weight, N₂ fixation and P content of dually inoculated plants corresponded to the onset of the development of the extra-radical hyphae ofGlomus mosseae. In the rhizosphere.

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Resumen Se cultivóVigna unguiculata cv. 58–185 en un suelo estéril tipo Dek, se inoculó conRhizobium sp. o conRhizobium sp. másGlomus mosseae. La respuesta de la planta huésped a los tratamientos se estudió midiendo periodicamente el peso seco de la parte aerea y de los nódulos, la fijación de N (actividad reductora de C₂H₂) y los contenidos de N y P hasta el 50° día del ciclo de crecimiento. La diferencia entre el peso seco de la parte aerea de las plantas con doble inoculación y aquellas inoculadas conRhizobium sp. unicamente, no fue significativa hasta 45 días despúés de la siembra. A los 20 días de la siembra tanto el peso seco de los nódulos como la fijación de nitrógeno de las plantas con doble inoculación eran significativamente superiores a los valores obtenidos para las plantas con soloRhizobium sp., aunque no se observaron diferencias en el contenido en N (%). Durante los primeros 20 días del ciclo el contenido en P (%) de ambos grupos de plantas disminuyó progresivamente, siendo los valores obtenidos por las plantas con doble inoculación inferiores a los de las demás. Más tarde el contenido en P de las plantas con doble inoculación aumentó rapidamente manteniéndose constante el de las demás. El incremento en el peso seco de los nódulos, en la fijación de N y en el contenido en P de las plantas con doble inoculación se correspondió con el inicio del desarrollo de las hifas extraradiculares deGlomus mosseae.

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Résumé On a inoculéV. unguiculata poussant dans un sol Dek stérile avecRhizobium etRhizobium plusGlomus mosseae. On a recherché la réponse de la plante-hôte à ces deux traitements en estimant périodiquement les poids des nodules et des parties aériennes de la plante, la fixation d'azote (activité réductrice de C₂H₂), les teneurs en N et P jusqu'au 50^e jour du cycle de végétation. C'est seulement au 45^e jour après la plantation que le poids sec des parties aériennes des plantes inoculées avec deux symbiotes (plantes doublement inoculées) diffère significativement de celui des plantes inoculées avec Rhizobium seul. Le poids sec des nodules et la fixation N₂ des plantes doublement inoculées sont significativement plus élevés que ceux des plantes inoculées avecRhizobium seul au 20^e jour après la plantation mais il n'y a pas de différence significative pour la teneur en N (%). Pendant les 20 premiers jours, la teneur en P (%) des parties aériennes des deux catégories de plantes décroit progressivement; la teneur en P des plantes doublement inoculées est plus faible que celle des plantes inoculées seulement avecRhizobium. Plus tard, la teneur en P des plantes doublement inoculées augmente rapidement tandis que celle des autres plantes reste constante. L'accroissement du poids sec des nodules, de la fixation d'azote et de la teneur en P observé chez les plantes doublement inoculées correspond au démarrage du développement des hyphes extra-radicales deGlomus mosseae dans la rhizosphère.

     

Rhizobium biomass production in batch and continuous culture with a malt-sprouts medium

Summary The growth of nine strains of four different species ofRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli andR. japonicum) was studied with media containing malt sprouts extract (MSE), in place of yeast extract (YE), as source of nitrogen and growth factors. The results obtained in batch cultures indicated that all the strains grew well in MSE medium. In the case of fast-growing strains the biomass increased with increase in the concentration of MSE in the medium, but with the slow-growing strains, likeR. japonicum, growth was inhibited completely by using a concentration of MSE (containing 3.75% w/v of solids) of 40% v/v. With all the strains the concentration of cells attained was greater than 5×10⁹ cells/ml, which clearly indicates that MSE is a suitable component of media, and one which can be used instead of YE. The results of continuous culture experiments showed that a high productivity of cells (15.3×10⁸ cells/ml/h) could be obtained using MSE medium.

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Producción de Rhizobium en cultivos batch y continuo sobre medio conteniendo extracto de raiz de malta

Resumen Se estudió el crecimiento de nueve cepas de cuatro especies diferentes deRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli y R. japonicum) en medios de cultivo conteniendo extracto de raíz de malta (ERM), en reemplazo de extracto de levaduras (EL), como fuente de nitrógeno y factores de crecimiento. Los resultados obtenidos en cultivos en batch indicaron que todas las cepas crecieron bien en los medios con ERM. En el caso de las cepas de crecimiento rápido la biomasa se incrementó con la concentración de ERM en el medio de cultivo, pero con las cepas de crecimiento lento(R. japonicum) el desarrollo celular se inhibió completamente para concentraciones de ERM (conteniendo 3,75% p/v de sólidos) de 40% v/v. Con todas las cepas empleadas la concentración celular alcanzada fue superior a 5×10⁹ cél/ml, lo que indica claramente que el ERM es un adecuado componente para los medios de cultivo que puede reemplazar al EL. Los resultados de los experimentos realizados en sistema continuo mostraron que se puede alcanzar una alta productividad (15,3×10⁸ cél/ml/h) utilizando un medio de cultivo suplementado con ERM.

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Production de Rhizobium en culture discontinue et continue sur milieu à base de germes de malt

Résumé La croissance de neuf souches appartenant à quatre éspèces différentes deRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli etR. japonicum) a été étudiée avec des milieux contenant, comme source d'azote et de facteurs de croissance, un extrait de germes de malt (MSE) au lieu d'extrait de levure (YE). Les résultats obtenus en culture discontinue (batch) montrent que toutes les souches poussent bien en milieu MSE. Dans la cas des souches à croissance rapide, la biomasse augmente proportionnellement à la concentration de MSE dans le milieu. Par contre, pour les souches à croissance lente, commeR. japonicum, la croissance est complètement inhibée lorsque la concentration en MSE (contenant 3.75% w/v de solides) atteint 40% (v/v). Avec toutes les souches, on obtient une concentration en cellules supérieure à 5×10⁹/ml, ce qui indique clairement que le MSE convient bien et peut être utilisé à la place de YE. Les expériences réalisées en culture continue montrent qu'on peut obtenir avec le milieu MSE une productivité en cellules très élevée (15.3×10⁸ cellules/ml/h.).

     

Production of ethanol by aZymomonas sp strain,free and immobilized in pectin

Summary AZymomonas sp strain, alcohol tolerant, isolated from spontaneously fermenting sugarcane juice, was tested for the production of ethanol in batch, free and immobilized in pectin. CaCl₂ was used during the preparation of the beads and also added to the fermentation medium to improve the stability of the beads. It was found that immmobilization, as well as CaCl₂ above 1 gl^–1 impaired fermentation to some extent. As theZymomonas-pectin beads maintained their fermentative capacity and mechanical stability during about 40 successive batch fermentations, this opens up the possibility of using them for the continuous production of ethanol. The role of free cells as well as the effect of the preincubation of the beads on fermentation are also discussed.

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Resumen Una cepa deZymomonas alcohol tolerante, aislada de jugo de caña de azúcar en fermentación espontánea, fue utilizada para ensayos de producción en lote de etanol, tanto libre como inmovilizada en pectina. En este último caso se utilizó CaCl₂ en la preparación de las perlas como así también como componente del medio de fermentación, con el objeto de aumentar la estabilidad de las perlas. Los resultados obtenidos indican que tanto la inmovilización como una concentración de Cl₂Ca en el medio superior a 1 g/l perjudicaron en cierto grado la fermentación. Las perlas deZymomonas-pectina mantuvieron la actividad fermentativa y estabílidad mecánica durante 40 fermentaciones en lote sucesivas, abriendo la posibilidad de su utilización en la producción continua de etanol. También se analiza la influencia sobre la fermentación de las células libres y de la preincubación de las perlas.

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Résumé Une souche deZymomonas sp., tolérante à l'éthanol, isolée d'un moût spontanné de canne à sucre, a été testée pour sa faculté de produire de l'éthanol en milieu non renouvelé, à l'état libre ou à l'état immobilisé dans la pectine. On s'est servi du CaCl₂ pour la préparation des billes. Le CaCl₂ a également été ajouté au milieu de fermentation pour améliorer la stabilité des billes. Tant l'immobilisation que la présence du CaCl₂ au delà de 1 g par litre inhibent la fermentation jusqu'à un certain point. Mais le fait que les billes deZymomonas dans le pectine conservaient leur capacité fermentative et leur stabilité mécanique pendant environ 40 fermentations successives en milieu non renouvelé, ouvre la possibilité de les utiliser néanmoins en production continue d'éthanol. On discute aussi le rôle dans la fermentation des cellules libres ainsi que l'effet de la préincubation des billes.

     

Marine phytoplankton collected at Wake Island

Sumario Fitoplancton marino recogido en las inmediaciones de Wake Island.Muestras de aqua embotellada fueron obtenidas en tres diferentes estaciones a to largo de la costa de Wake Island y en dos estaciones en la laguna situada dentro de los límites de diche archipiélago. Veintiseis diatomeas, cuatro pyrrophytos y dos cocolitoforos fueron identificados pero el conteo de fitoplancton fue bajo, oscilando entre 2840 y 6768 celulas por litro. Estas muestras contenían mayor cantidad ed fitoplancton que las obtenidas en la laguna Bikini (Johnson, 1954), situada a 630 kilómetros al Sur de Wake Island, pero contenian menor cantidad que las obtenidas en mar abierto en la zona ecuatorial del Pacifico (Rampi, 1952; Hasle, 1959).     

A comparative study by electron microscopy of the structures of effective and ineffective nodules ofTrifolium subterraneum induced byRhizobium trifolii andRhizobium leguminosarum

Summary Bacteroid formation and haemoglobin pigment were observed 3 days after the appearance of nodules formed by the effectiveRhizobium trifolii strain TA1 onTrifolium subterraneum. Effective nodules were large and cylindrical and evidence of bacteroid degeneration did not appear until about 21 days. Electron microscopy of ineffective nodules formed byRhizobium trifolii strain 6 showed limited meristematic activity and vascular development, and infection threads were sparse. Degeneration of plant cells and bacteria was visible by 3 days and mostly complete by 14 days. Both types of nodules occurred randomly over the root system. In contrast, the ineffective nodules formed byRhizobium leguminosarum strains onTrifolium subterraneum, occurred mainly at lateral root junctions with vascular connections to either the primary or lateral root depending on strain. Infection thread development was widespread and most cells were invaded. The released bacteria became pleomorphic and rounded, the nodules became cylindrical, enlarged slightly but remained white. Degeneration was apparent at 5 days and complete by 14 days in nodules formed by strain 1020A, but nodules formed by strain 1013 degenerated more slowly and degenerate cells sometimes showed secondary invasion by vegetative rhizobia.

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Estudio comparativo mediante microscopia electronica de las estructuras de nodulos eficaces e ineficaces de Trifolium subterraneum inducidos por Rhizobium trifolii y Rhizobium leguminosarum

Resumen Se observó la formación de bacteroides y de (leg)hemoglobina tres días después de laapparación de nódulos formados por la cepaeficaz TA1 deRhizobium trifolii enTrifolium subterraneum. Los nódulos eficaces eran grandes y cilíndricos. No hubo evidencia de degeneración de bacteroides hasta pasados 21 dias. El estudió al microscopio electrónico de nódulos no eficaces formados por la cepa 6 deR. trifolii mostro una actividad meristemática reducida al igual que el desarrollo vascular, siendo escasas la lineas de infección. La degeneración de las células de la planta y de las bacterias era observable a los 3 días y practicamente completa a los 14. Los nódulos formados por ambas cepas se distribuyen al azar en todo el sistema radicular, en cambio, los nódulos ineficaces formados enT. subterraneum porR. leguminosarum se encuentran principalmente en conexiones vasculares laterales con raíces primarias o secundarias, dependiendo de la cepa. La línea de infección en este caso está ampliamente desarrollada y la mayoría de las células estan invadidas. Las bacterias que han sido liberadas se vuelven esféricas y pleomórficas, los nódulos se vuelven cilíndricos y aumentan ligeramente de tamaño pero permanecen blancos. La degeneración de los nódulos formados por la cepa 1020A era aparente a los 5 días y completa a los 14. Sin embargo, los nódulos formados por la cepa 1013 degeneraron más lentamente y las células degeneradas mostraron una invasión secundaria porRhizobium vegetativos.

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Etude comparative en microscopie électronique de la structure des nodules efficaces et inefficaces de Trifolium subterraneum induits par Rhizobium trifolii et Rhizobium leguminosarum

Résumé La formation de bactéroides et la production de leg-hémoglobine ont été observées 3 jours après l'apparition des nodules formés surTrifolium subterraneum par la souche efficace TA1 deRhizobium trifolii. Les nodules efficaces sont larges et cylindriques, et les signes de la dégénérescence en bactéroides n'apparaissent pas avant 21 jours. La microscopie électronique des nodules inefficaces formés par la souche 6 deR. trifolii montre une activité méristématique et un développement vasculaire faibles, et les filaments d'infection sont rares. La dégénérescence des cellules végétales et des bactéries est visible au bout de 3 jours et presque complète en 14 jours. Les deux types de nodules sont répartis au hasard sur le système racinaire. Par contre, les nodules inefficaces formés par les souches deR. leguminosarum surT. subterraneum sont répartis préférentiellement sur les jonctions racinaires latérales, les connections vasculaires étant, suivant la souche, dirigées vers la racine primaire ou vers la racine latérale. Le développement des filaments d'infection est très répandu et la plupart des cellulessont envahies. Les bactéries relâchées deviennent pléomorphes et arrondies; les nodules deviennent cylindriques et légèrement renflés, mais restent incolores La dégénérescence est apparente après 5 jours et complète en 14 jours dans les nodules formés par la souche 1020A, mais ceux formés par la souche 1013 dégénèrent plus lentement et les cellules dégénérées présentent parfois une invasion secondaire par des rhizobiums végétatifs.

     

Inmunologia de las Candidiasis

Resumen Se presenta el estudio realizado en 70 casos de candidiasis con diversas localizaciones mediante pruebas de fijación de complemento, aglutinación, inmunodifusión e inmunoelectroforesis.Las pruebas de fijación de complemento e inmunodifusión presentaron títulos elevados sólo en aquellos enfermos que padecían candidiasis sistémicas, estas reacciones fueron sistemáticamente negativas en los casos de candidiasis superficiales.El anticuerpo específico presentó una movilidad electroforética semejante a la 1 g G. El antígeno más adecuado para las pruebas serológicas fue el sobrenadante de células deCandida albicans rotas en aparato Sorvall Ribi Cell fractionator.La prueba de aglutinación tiene menor valor pues se observaron escasas reacciones positivas en pacientes con candidiasis superficiales.La prueba cutánea fue positiva en la mayoría de los enfermos con candidiasis superficiales y broncopulmonares y, por el contrario, negativas en los casos examinados con septicemias y endocarditis.

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Summary Sera from 70 patients with candidiasis have been studied by means of agglutination, complement fixation, agar gel immunodiffusion tests and immunoelectrophoresis technic. High titers in complement fixation and immunodiffusion tests have been registered in patients with systemic candidiasis, while the serologic study in those patients with superficialCandida infections gave negative results.Electrophoretic motility similar to that of 1 g G was observed in the specific antibody in candidiasis.Disrupted cells ofCandida albicans with Sorwall Ribi Cell fractionator gave the best antigens. Agglutination test seems to be of little diagnostic value.Positive skin test has been obtained in the majority of patients with superficial and bronchopulmonary candidiasis, while in those patients with septicemia and endocarditis negative results have been registered.

     

Nodulation,vegetative growth,infestation with the spider miteTetranychus cucurbitacearum (Sayed) and seed yield of N-fertilized soybean plants in the Nile Delta

Summary A field experiment was conducted at Sakha Agricultural Research Station, Kafr El-Sheikh, A.R. Egypt, to study the effect of inoculation with the symbiotic N₂-fixerRhizobium japonicum on nodulation, vegetative growth and seed yield of soybeans cultivated in Nile Delta clay-loam alluvial soil, with N-fertilization rates of 48, 96, 144 or 192 kg N/ha. Special attention was given to infestation with the spider miteTetranychus cucurbitacearum (Sayed). Soybeans in noninoculated plots failed to nodulate. In the inoculated plots, nodule number and weight, plant dry weight and N-content, seed yield and N-content and weight/100 seeds responded to inoculation plus N-fertilization up to 96 kg N/ha added as one dose 30 days after planting. Inoculation at all levels of applied N gave higher yields than non-inoculation at corresponding N levels. Infestation with the spider miteTetranychus cucurbitacearum over a 10-week period was highest for inoculation with the symbiotic N₂-fixer and N-fertilization at 96 kg N/ha, the same treatment which gave the highest N-content in plant vegetative tissue.

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Resumen En la Estación de Investigación Agraria de Sakha, Kafr El-Sheik, A.R. Egipto, se estudió el efecto de la inoculación conRhizobium japonicum sobre la nodulación, el crecimiento vegetativo y el rendimiento en semillas, de plantas de soja, cultivadas en un suelo de aluvión, arcillo-limoso, del Delta del Nilo, con las siguientes dosis de abonado nitrogenado: 48, 96, 144 ó 192 kg N/ha. Se prestó especial atención a la infestación por el ácaroTetranychus cucurbitacearum (Sayed). Las plantas de soja de las parcelas no inoculadas no nodularon. En las parcelas inoculadas el número de nódulos y su peso, el peso seco y el contenido en nitrógeno de las plantas, la cosecha de semillas, el contenido en nitrógeno de estas y el peso de 100 semillas respondieron a la inoculación más la fertilización hasta la dosis de 96 kgN/ha añadidos de vez, 30 días después de la siembra. La inoculación incrementó la cosecha respecto al tratamiento no inoculado en todas las dosis de nitrógeno consideradas. La infestación por el ácaroTetranychus cucurbitacearum, observada durante un periodo de 10 semanas, fue máxima para el tratamiento inoculado con dosis de abonado de 96 KgN/ha, que fue así mismo el tratamiento que dió mayor contenido en N del tejido vegetativo de la planta.

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Résumé Une expérimentation sur le terrain a été conduite à la Station de Recherche en Agriculture de Sakha, Egypte, pour étudier l'effect de l'inoculation deRhizobium japonicum sur la nodulation, la croissance végétative et le rendement en graines du soja, cultivé dans un sol alluvial d'argile gras du Delta du Nil, avec un taux de fertilisation respectivement de 48, 96, 144 et 192 kg d'azote par hectare. Une attention particulière a été réservée à l'invasion par la mite araignéeTetranychus cucurbitacearum (Sayed). Les sojas de parcelles non-inoculées n'ont pas développés de nodules. Dans les parcelles inoculées, le nombre et le poids des nodules, le poids sec de la plante et sa teneur en azote, le rendement en graines ainsi que le poids et la teneur en azote par 100 graines ont répondu à l'inoculation plus la fertilisation azotée jusqu'à 96 kg d'azote par hectare et ajouté une dose unique 30 jours après la plantation. L'inoculation à tous les niveaux d'ajouts d'azote a produit des rendements plus élevés que la non-inoculation pour les mêmes taux d'ajout d'azote. L'invasion par la mite araignéeTetranychus cucurbitacearum pendant une période de 10 semaines a été la plus élevée dans le cas de l'inoculation avec le fixateur symbiotique d'azote et la fertilisation azotée à 96 kg par hectare, c'est-à-dire le même traitement que celui qui a résulté en la teneur la plus élevée en azote dans le tissus végétatif végétal.

     

Rapid method for isolation and purification of protoplasts from epidermal tissue ofVicia faba L. leaves

Summary A method has been developed for isolating and purifying epidermal and guard cell protoplasts (ECPs and GCPs) from leaves ofVicia faba L. This method has three essential characteristics: 1) requires only small quantities of initial plant tissue; 2) is rapid, being based on a two-step enzymatic digestion and purification by discontinuous density gradient centrifugation using Percoll, and 3) gives a high viability of purified protoplasts. The procedure yielded about 6% ECPs and 10% GCPs on the basis of their occurrence on epidermal foliar tissue, the final suspension of protoplasts being 100% pure. Cell viability was assessed by the ability of each protoplast type to accumulate neutral red in their vacuoles. Values of 90% and 95% were obtained for ECPs and GCPs respectively. The complete lack of cell wall after enzymatic treatment was checked at the light microscope level by the absence of Calcofluor fluorescent staining of cellulosic material. Representative counts for purified ECPs and GCPs obtained at the interfaces of 20/30% and 40/80% Percoll gradients were 1.32×10⁵ and 3.7×10⁵ elements/ml, which represents a yield of 930 and 2,200 protoplasts/cm² of epidermal tissue respectively. The integrity of the plasma membrane and organelles after the isolation procedures was confirmed by transmission electron microscopy and by the ability of protoplasts to exclude Evans blue.

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Resumen Se ha desarrollado un método para el aislamiento y purifición de protoplastos de células epidérmicas y células guardianas (PCEs PCGs) de hojas deVicia faba L. Este método posee tres características esenciales: 1) solamente requiere pequeñas cantidades de tejido vegetal inicial; 2) rapidez, en base a una digestión enzimática de sólo dos etapas y centrifugación en gradiente discontinuo de Percoll, y 3) la elevada viabilidad de los protoplastos purificados. Este método permitió obtener ca. 6% de PCEs y 10% de PCGs sobre la base de su ocurrencia en el tejido epidérmico foliar, con una pureza del 100% para las suspensiones finales de protoplastos. Se determinó la viabilidad de cada tipo celular por su habilidad de acumular rojo neutro en sus vacuolas, obteniéndose valores de 90% y 95% para PCEs y PCGs respectivamente. Se determinó la ausencia total de pared celular después del tratamiento enzimático mediante microscopía de fluorescencia con Calcofluor, específico para sustancias celulósicas. El recuento de PCEs y PCGs purificados — obtenidos en las interfases 20/30% y 40/80% del gradiente de Percoll — fue de 1,32×10⁵ y 3,7×10⁵ elementos/ml, lo cual representó un rendimiento de 930 y 2200 protoplastosi cm² de tejido epidérmico respectivamente. La integridad de la membrana plasmática y de las organelas fue confirmada por microscopía electrónica de transmisión y por la habilidad de los protoplastos de excluir azul de Evans.

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Résumé Une méthode a été développée pour l'isolement et la purification de proto-plastes épidermiques (ECPs) et de cellules de garde (GCPs) de feuilles deVicia faba L. Cette méthode présente trois caractéristiques essentielles: 1) Elle ne requiert que de petites quantités du tissu végétal originel; 2) elle est rapide, car elle se base sur une digestion enzymatique en deux étapes et une purification dans un gradient discontinu de densité utilisant le Percoll, et 3) elle fournit une forte proportion de protoplastes prufiés bien vivants. La procédure fournit environ 6% d'ECPs et 10% de GCPs sur la base de leur présence dans le tissue foliaire épidermique et d'une suspension pure à 100% de protoplastes. La viabilité des cellules a été testée par la capacité de chaque type de protoplaste d'accumuler de rouge neutre dans ses vacuoles. On a obtenu des valeurs de 90% et de 95% respectivement pour les ECPs et les GCPs. L'absence totale de paroi cellulaire après le traitement enzymatique a été vérifiée au microscope optique par l'absence de fluorescence après coloration du matériel cellulosique par le calcofluor. Des comptages typiques pour les ECPs et les GCPs purifiés obtenus aux interfaces 20/30% et 40/80% des gradients de Percoll ont donné 1.32×10⁵ et 3.7×10⁵ éléments/ml, ce qui représente des rendements respectifs de 930 et de 2200 protoplastes par cm² de tissue épidermique. L'intégrité de la membrane plasmique et des organites après les procédures d'isolement a été confirmée par microscopie électronique à transmission et par la papacité de protoplastes d'exclure le bleu d'Evans.

     

Cassava starch fermentation pattern ofRhizopus oligosporus

Summary Rhizopus oligosporus UQM 145F was grown on cassava starch medium without a preliminary treatment of starch. The fermentation pattern ofR. oligosporus is shown to be influenced significantly by the medium composition, pH of the growth culture and the size of the spore inoculum. By varying the carbon, nitrogen and mineral salt concentrations, it was found that either glucose accumulated due to excess hydrolysis of starch or single cell protein production became dominant. In the case of the carbon source, increases in the concentration of starch led to higher biomass values, but lower rates of protein production. These observations led to a new formulated medium, resulting in an 82.9% cassava starch utilization and a true protein yield of 5.32 g/100 g initial substrate. The response ofR. oligosporus to inorganic compounds such as (NH₄)₂SO₄, urea, NaCl and MgSO₄ indicates an interesting fermentation control system.

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Resumen Rhizopus oligosporus UQM 145F se hizo crecer en un medio a base de almidón de casava sin que hubiera pasado por un tratamiento previo con almidón. Se demostró que el patrón de fermentación seguido porRh.oligosporus estaba significativamente influenciado por: la composición del medio, su pH y el tamaño del inóculo. Al variar las concentraciones de carbono, nitrógeno y sales minerales se observó que predominaba la acumulación de glucosa o bien la producción de proteínas unicelulares. Un incremento en la fuente de carbono aumentó la biomasa pero disminuyó el ritmo de producción de proteínas. Estas observaciones permitieron elaborar un nuevo medio de cultivo que resultó en la utilización del 82.9% del almidón de casava con un rendimiento en proteínas de 5.32 g/100 g de sustrato inicial. La respuesta deRh. oligosporus a compuestos inorgánicos como sulfato amónico, urea, cloruro sódico y sulfato magnésico indican la existencia de un sistema de control de la fermentación muy interesante.

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Résumé On a fait croîtreRhizopus oligosporus UQM 145 F sur un milieu à base d'amidon de manioc sans traitement préalable de l'amidon. Le profil de fermentation parR. oligosporus apparaît être influencé de manière significative par la composition du milieu, le pH de la culture en croissance et la taille de l'inoculum de spores. En variant les concentrations en carbone, en azote et en sels minéraux, on remarque la prédominance tantôt de la protéine unicellulaire, tantôt de l'accumulation de glucose. Un accroissement en concentration conduit à des valeurs plus élevées de la biomasse mais en une moindre production de protéines. Ces observations ont abouti à une nouvelle formulation du milieu avec pour résultat une utilisation à 82.9% de l'amidon de manioc et un rendement vrai en protéines de 5.32 g/100 g de substrat initial. La réponse deR. oligosporus aux composés inorganiques comme le sulfate d'ammonium, l'uréi, le chlorure de sodium et le sulfate de magnésium sont indicateurs d'un système très intéressant de contrôle de la fermentation.

     

Studies on optimal conditions for polysaccharide production byPorphyridium cruentum

Summary Exocellular polysaccharide production byPorphyridium cruentum was studied in fed-batch cultures. Growth of the culture was characterized by a brief log phase, followed by a lineartype phase. The duration and the slope of the latter phase are largely dependent on culture conditions. The presence of polysaccharide in the culture medium was observed as soon as the log phase was over but the quantity did not become significant until the end of growth. Polysaccharide production depended on the cell number and the specific productivity. The cell number was affected mainly by the initial nitrogen and phosphorus concentrations and the specific productivity by the aeration and agitation systems. Other environmental conditions had no significant effect on polysaccharide production. Under photoperiodic illumination the oscillations in cell volume observed after the log phase may indicate a synchronization of polysaccharide synthesis and/or excretion with the light period and the solubilization with the dark period.

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Estudios sobre las condiciones óptimas de crecimiento para la produccióin de polisaccáridos por Porphyridium cruentum

Resumen La producción de polisaccáridos exocelulares porPorphiridium cruentum se estudió en cultivos fed-batch. El crecimiento del cultivo se caracterizó por una breve fase log seguida por una fase de tipo linear. La duración y la pendiente de esta última fase son en gran parte dependientes de las condiciones de cultivo. La presencia de polisaccáridos se observó tan pronto como se hubo terminado la fase log, sin embargo cantidades significativas de éstos no se obtuvieron hasta el final del crecimiento. La producción de polisaccáridos dependió del número de células y de la producción específica. El número de células se vió afectado principalmente por la concentración inicial de fósforo y de nitrógeno. La productividad específica lo fue por los sistemas de aeración y de agitación. No se observó que otras condiciones del medio tuvieran efecto significativo alguno sobre la producción de polisaccáridos.

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Etudes sur les conditions optimales de croissance pour la production de polysaccharides par Porphyridium cruentum

Résumé La production de polysaccharide parPorphyridium cruentum a été étudiée au cours de cultures fed-batch. La croissance d'une culture est caractérisée par une courte phase log suivie d'une phase de type linéaire. La durée et la pente de cette dernière phase dépendant beaucoup des conditions de culture. La présence de polysaccharide dans le milieu de culture a été observée dès la fin de la phase log mais elle ne devient importante qu'à la fin de la croissance. La production de polysaccharide parait être fonction du nombre de cellules et de la productivité spécifique: le nombre de cellules est essentiellement affecté par les concentrations en nitrates et phosphates du milieu de culture, la productivité spécifique par les systèmes d'aération et d'agitation. Les autres conditions testées n'ont pas eu d'influence significative sur la production de polysaccharide.

     

Local heat in the treatment of sporotrichosis

Summary After making some considerations concerning the therapeutic methods used in the treatment of sporotrichosis, the case of a 45 years old woman with numerous tumor-like dermoepidermic lesions with lymphangitic dissemination of sporotrichosis of the left leg is presented. Treatment by immersing the affected limb in a waterbath at 45° C for 30 minutes 4 times daily was performed. After the third day of treatment the lesions began to improve, and the number of colonies in the cultures decreased. After the 21th day of treatment cultures from the lesions were consistently negative. After 8 weeks of treatment the patient was discharged and a year later there have been no recurrences. The effect of temperature on this organism and the distribution of lesions in patients in the tropics are discussed.

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Resumen Después de hacer algunas consideraciones sobre los procedimientos terapéuticos utilizados en la esporotricosis, se presenta un caso de esporotricosis, con gran número de lesiones tumorales dermoepidérmicas y diseminación linfática, localizada en la pierna izquierda de una mujer de 45 años de edad.El tratamiento de esta paciente por medio de inmersión del miembro afectado en un baño de agua a 45° C durante 30 minutos 4 veces al día, determinó que desde el tercer día comenzaron a mejorar las lesiones y a disminuir el número de colonias en los cultivos tomados de las mismas. A partir del 21° día de tratamiento los cultivos sembrados con material de las lesiones fueron siempre negativos. Se consideró terminado el tratamiento al cabo de 8 semanas. Un año más tarde no se había presentado recidiva.Se hacen algunas consideraciones sobre los mecanismos de acción de los yoduros y el calor en la esporotricosis y del calor en otras enfermedades cutáneas producidas por protozoarios o por virus. Se señala el hecho de que en zonas tropicales como Centro América no se conocen casos de esporotricosis visceral u ósea.

     

Studies on N2-fixing bacteria associated with the salt-tolerant grass,Leptochloa fusca (L.) Kunth

Summary N₂-fixing bacteria were isolated from the rhizosphere of naturally grown salt tolerant grass (Leptochloa fusca). A broad spectrum of diazotrophs was found to be associated with the roots ofL. fusca. the systematic position of the three isolates, NIAB-1, C-2 and Iso-2 was determined by morphological, biochemical and mol % (G+C) DNA contents. Two isolates were identified asKlebsiella pneumoniae (NIAB-1) andBeijerinckia sp. (Iso-2).¹⁵N enrichment studies confirmed the nitrogen fixing ability of the isolates. The effects of different levels of combined nitrogen (NO ₃ ^– & NH ₄ ⁺ ), pH (5.5–9.0) and salt (NaCl) on nitrogenase activity of the isolates were determined at various time intervals. All isolates exhibited nitrogenase activity even in the presence of 5 mmol/l NO ₃ ^– or NH ₄ ⁺ in a semi-solid medium after 24 h of growth. Maximum nitrogenase activity was observed at alkaline pH and all isolates were able to tolerate up to 3% NaCl in the medium.

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Resumen Se han aíslado bacterias fijadoras de N₂ en la rizosfera del hábitat natural de la graminea halófilaLeptochloa fusca. Un amplio espectro de diazotrofos se encontró asociado con las raíces deL. fusca. La posición sistemática de tres aíslados: NIAB-1, C-2 y Iso-2 se determinó utilizando sus características morfológicas, bioquímicas y el % (G+C) molar del ADN. El aíslado NIAB-1 se identificó comoKlebsiella pneumoniae y el aíslado Iso-2 comoBeijerinckia. sp. Estudios mediante¹⁵N confirmaron la habilidad fijadora de N₂ de los aíslados. Se determinaron periodicamente los efectos de distintos niveles de nitrógeno combinado (NO₃ ^– y NH₄ ⁺), pH (5.5–9.0) y sal (NaCl) en la actividad nitrogenásica de los aíslados. Todas las cepas aísladas mostraron actividad nitrogenásica incluso en presencia de 5mmol/l de NO₃ ^– y NH₄ ⁺ en un medio semisólido desqués de 24 h. de crecimiento. La actividad nitrogenásica máxima se observó a pH alcalino y todos loa aíslados eran capaces de tolerar hasta 3% de NaCl en el medio.

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Résumé Des bactéries fixatrices de l'azote ont été isolées à partir de la rhizosphère de l'herbe halotoléranteLeptochloa fusca développée dans les conditions naturelles. Il a été constaté qu'un large spectre de diazotrophes est associé aux racines de la plante. La position taxonomique de 3 souches isolées, NIAB-1, C-2 et Iso-2, a été déterminée par des critères morphologiques et biochimiques et par le pourcentage de (G+C) de l'ADN. Deux souches on été identifiées commeKlebsiella pneumoniae (NIAB-1) etBeijerinckia sp. (Iso-2). Les études d'enrichissement en¹⁵N ont confirmé l'aptitude des souches à fixer l'azote. les effets de différents niveaux d'azote combiné (NO₃ ^– et NH₄ ⁺), de pH (5.5–9.0) et de sel (NaCl) sur l'activité nitrogénasique des souches ont été déterminés à divers intervalles de temps. Toutes les souches présentent une activité nitrogènase après 24 h de croissance en milieu semi-solide, et cela même en présence de 5 mmol/l de NO₃ ^– ou NH₄ ⁺. L'activité nitrogènase maximum est observée à pH alcalin, et toutes les souches tolèrent jusqu'à 3% de NaCl dans le milieu.

     

Effect ofRhizobium inoculation and the application of phosphate on the growth,yield and nitrogen fixation of soybeans

Summary Application of phosphate at 60, 90 and 120 kg P ha^–1 to the Bragg variety of soybeans inoculated with a mixture of three strains ofRhizobium japonicum (TAL 102 + TAL 377 + TAL 379) and grown in silty loam soil in a pot experiments, significantly improved the number of nodules per plant and increased production of shoots and roots by 65, 36 and 17%, the yield of pods by 38, 12 and 3% and N₂-fixing capacity by 57, 29 and 20%, respectively. Rhizobium inoculation alone with the test strains caused a positive but poor nodulation of the crop and increased its dry-matter production of shoots and roots by 22%, pods yield by 7% and N₂-fixing capacity by 6%. Soybean plants from uninoculated treatments were without nodules indicating that indigenous rhizobia associated with this crop are absent in the test soil. Phosphate concentration in the total dry matter of mature crop exhibited an increasing tendency as a result of all the applied levels of phosphorus.

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Resumen La adición de fosfato (60, 90, y 120Kg P ha^–1) a plantas de soja de la variedad Bragg inoculadas con una mezcla de tres cepas deRhizobium japonicum (TAL 102 + TAL 377 + TAL 379) cultivada en contenedores en un suelo arcillo-limoso, mejoró significativamente el número de nódulos por planta, aumentó la producción de tallos y raíces en un 65, 36 y 17%, el rendimiento de la cosecha en un 38, 12 y 3%, y la capacidad fijadora de N₂ en un 57, 29 y 20% respectivamente. La sola inoculación con las cepas deRhizobium ya mencionadas produjo una nodulación positiva aunque pobre del cultivo, incremetando la producción de tallos y raíces en un 22%, el rendimiento de la cosecha en un 7% y la capacidad fijadora de nitrógeno en un 6%. Las plantas de soja de los tratamientos no inoculados no tenían nódulos lo que indica que no habían rizobios específicos para esta planta en el suelo ensayado. La concentración de fosfato en la materia seca de las plantas maduras mostraba una tendencia a incrementarse como resultado de la aplicación de los distintos niveles de fosfato.

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Résumé L'application du phosphate à raison de 60, 90 et 120 kg en phosphore par hectare à la variété Bragg de soja inoculée avec un mélange de 3 souches deRhizobium japonicum (TAL 102, TAL 377 et TAL 379) et cultivée sur un sol gras limoneux dans des expériences en jarre de croissance, a augmenté de manière significative le nombre de nodules par plant et a augmenté la production des pousses et racines respectivement de 65, 36 et 17%, le rendement des cosses respectivement de 38, 12 et 3% ainsi que la capacité de fixer l'azote, respectivement de 57, 29 et 20%. L'inoculation seule avec les souches testées de Rhizobium a causé une nodulation positive mais faible de la plante, et a augmenté la production en matière sèche des racines et pousses de 22%, le rendement en cosses de 7% et la capacité de fixer l'azote de 6%. Les plants de soja dans les expériences sans inoculation ne présentaient pas de nodules, indiquant par là que les rhizobia endogènes associés avec cette plante étaient absents dans le sol expérimental. La concentation en phosphate dans la matière sèche totale de la plante mûre a marqué une tendance à l'augmentation comme suite aux applications du phosphore à tous les niveaux.

     

Survival ofRhizobium trifolii in soil following inoculation of arrowleaf clover

Summary Arrowleaf clover (Trifolium vesiculosum Savi) is an annual forage legume that is sown in south-eastern USA when temperature and moisture conditions may not be suitable for survival of inoculant rhizobia. Survival of two antibiotic-resistant strains of rhizobia on seed or quartz particles was evaluated under controlled conditions in the laboratory. At 30°C and 75% r.h., lime coating of inoculated seed, soil pH (4.2 and 6.7), and surface or subsurface sowing of inoculated seed did not significantly (P = 0.05) affect the survival of either rhizobial strain. The use of gum arabic as an inoculant adhesive resulted in better rhizobial survival than sucrose or water, but even with gum arabic treatment the population of strain 162Y10 declined fromc. 10,000/seed to less than ten/seed in six days. Survival of strain 162Y15 appeared better andc. 200 rhizobia/seed survived for six days. When inoculated seed were incubated at 45°C, soil pH, method of sowing, lime coating of the seed, and r.h. (75% and 100%) did not influence rhizobial survival. The gum arabic adhesive enhanced survival over the use of sucrose but survival was still poor. No viable rhizobia were detected after two days of incubation. High r.h. (100%) and 30°C favoured survival and growth of both rhizobial strains when inoculated onto quartz particles placed on, or mixed into, soil at pH 4.2. Coating inoculated quartz particles with lime increased the growth of rhizobia under these conditions, but sucrose and gum arabic were equally effective as inoculant adhesives.

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Resumen Supervivencia de Rhizobium trifoliien el suelo después de la inoculación de trébol El trébol en punta de flecha arrowleaf (Trifolium vesiculosum Savi) es una leguminosa de forraje anual que se siembra en el S.E. de EUA en un periodo en el cual las condiciones de humedad y temperatura no suelen ser las adecuadas para la supervivencia de inóculo deRhizobium. La supervivencia en semillas o partículas de cuarzo de dos cepas deRhizobium resistentes a antibiôticos se evaluó bajo condiciones controladas en laboratorio. A 30°C y 75% de humedad relativa, ni el recubrimiento con cal de la semilla inoculada, ni la profundidad de la siembra (en superficie o no) ni el pH del suelo (4.2 y 6.7) alteraron significativamente la supervivencia de las dos cepas estudiadas. El uso de goma arábiga como adhesivo para el inóculo comparado con el uso de sucrosa o agua mejoró la supervivencia delRhizobium. Sin embargo incluso con el tratamiento con goma arábiga la población de la cepa 162Y10 declinó desde 10000/semilla hasta valores inferiores a 10/semilla en seis días. La cepa 162Y15 pareció tener mejor supervivencia y 200Rhizobium por semilla sobrevivieron a los seis días. Cuando las semillas inoculadas se incubaron a 45°C, el pH del suelo, el encalado de la semilla y la humedad relativa (75 y 100%) no influenciaron la supervivencia deRhizobium. El uso de goma arábiga mejoró relativamente la supervivencia aunque esta fue pobre de todos modos. No se detectaronRhizobium viables después de un periodo de incubación de dos días. Una elevada humedad relativa (100%) y una temperatura de 30°C favorecieron la supervivencia de ambas cepas cuando estas se inocularon en particulas de cuarzo, las cuales se situaron o, alternativamente, se mezclaron con suelo a pH 4.2. El recubrimiento con cal de las particulas de cuarzo inoculadas favoreció el crecimiento deRhizobium annque tanto sucrosa como goma arábiga fueron igualmente efectivos como adhesivos para el inóculo.

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Résumé Survie dans le sol de Rhizobium trifoliiaprès inoculation de trèfle sagittaire Le trèfle sagittaire (Trifolium vesiculosum Savi) est une légumineuse annuelle fourragère cultivée dans le Sud-Est des USA à une période de l'année où les conditions de température et d'humidité peuvent ne pas convenir à la survie de rhizobiums inoculés. La survie de deux souches de rhizobiums résistants aux antibiotiques sur des graines ou sur des particules de quartz a été evaluóe au laboratoire, dans des conditions contrôlées. A 30°C et r.h. 75%, l'enrobage dans la chaux des graines inoculées, le pH du sol (4, 2 et 6, 7) et le semis, soit en surface, soit recouvert, ne modifient pas significativement (P = 0,05) la survie des deux souches de rhizobiums. L'emploi de gomme arabique comme adhésif de l'inoculum assure une meilleure survie des rhizobiums que le saccharose ou l'eau. Mais, même avec la gomme arabique, la population de la souche 162Y10 décroit en six jours de 10,000 à moins de dix cellules par graine. La survie de la souche 162Y15 semble meilleure: 200 cellules survivantes par graine au bout de six jours. Lorsque les graines inoculées sont incubées à 45°C, le pH du sol, la méthode de semis, l'enrobage de la graine dans la chaux et le r.h. (75 et 100%) n'ont pas d'influence sur la survie des rhizobiums. La gomme arabique améliore la survie mieux que le saccharose, mais trés faiblement. Après deux jours d'incubation, on ne trouve plus de rhizobiums viables. Un r.h. élevé (100%) et une température de 30°C améliorent la survie et la croissance des deux souches de rhizobiums lorsque celles-ci sont inoculées sur des particules de quartz ou mélangées au sol à pH 4, 2. L'enrobage par la chaux des particules de quartz inoculées accroit la survie des rhizobiums dans ces conditions, mais le saccharose et la gomme arabique sont aussi efficaces somme agents d'adhésion de l'inoculum.

     

Application of immunoprecipitation techniques to the diagnosis of cutaneous and extracutaneous forms of sporotrichosis

Sporotrichosis is a mycosis which in our country has been described as only producing cutaneous and subcutaneous infections; in other countries it has been reported as causing pulmonary, bone, joint and meningeal infections.Possibly the systemic form also occurs in Venezuela since, along with the causative agent, all other factors considered as predisposing to systemic infection exist here.Through immunodiffusion (ID) and immunoelectrophoresis (IEP) and using a filamentous form metabolic antigen from Sporothrix schenckii, we were able to demonstrate precipitating antibodies against this fungus both in patients with cutaneous sporotrichosis, diagnosed by culture of the infecting agent, and in patients with pulmonary lesions. The IEP test showed the presence of an anodic arc which we have called the S arc, which could be one of the specific antigens of S. schenckii.

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Resumen En Venezuela, el diagnóstico de la esporotricosis solo se plantea ante lesiones cutáneas y subcutáneas, sin embargo, no deja de llamar la atención que siendo esta micosis la más frecuente en nuestro medio y existiendo concomitantemente en la población todos los factores predisponentes para que el S. schenckii invada órganos internos, estas localizaciones no han sido descritas.La incorporación del antígeno del S. schenckii para detectar anticuerpos circulantes en la ID en nuestros estudios serológicos de rutina, nos permitió observar la presencia de bandas de precipitación contra este antígeno en sueros de pacientes con lesiones pulmonares, igualmente fueron detectados anticuerpos en pacientes con esporotricosis cutáneas diagnosticadas por cultivo.El estudio de la estructura antigénica de este hongo, puso de manifiesto la presencia de un arco de localización anódica, que podría ser producido por uno de los antígenos específicos de este hongo; este arco que denominamos S fue visualizado en todos los casos positivos de esporotricosis cutáneas, al ser estudiados sus sueros en la IEF.Los estudios realizados en sueros de pacientes con lesiones pulmonares pusieron de manifiesto anticuerpos precipitantes en la ID e IEF, con las caractéristicas de evidenciar más de una línea de precipitación en la ID y un arco S más largo en la IEF, pudiendo ser esto originado por mayor producción de anticuerpos circulantes. Se plantea la necesidad de obtener el cultivo del S. schenckii de las posibles lesiones extracutáneas de esta micosis.

     

Release of genetically engineered micro-organisms into the environment

Summary Genetically engineered micro-organisms (GEM) at present are the subject of much public attention. They are being considered for biological control, frost protection of plants, and other applications. There is a need to test such organisms before release to the environment. Examples of GEM includePseudomonas fluorescens into which have been cloned -toxin genes ofBacillus thuringiensis, ice-minus bacteria, and other organisms modified by addition, rearrangement and/or deletion of genetic material. Prior to release, the survival, fate, and effects of GEM in the environment must be established. Because organisms, once released, cannot be recalled or always controlled, it is imperative that a full understanding of the risks be known. Predictive ecology must include the new sub-discipline of molecular microbial ecology, if the need for information prior to release of GEM is to be met. One of the most important aspects of deliberate release which must be considered is the ability to detect and monitor GEM in the environment. It has been discovered that micro-organisms can undergo dormancy, i.e. enter a viable but non-recoverable stage in the natural environment. New techniques have been developed, employing immunofluorescent/epifluorescent microscopy, coupled with 5S rRNA sequencing, which allow accurate non-genetic detection of GEM. These techniques have been employed in aquatic systems. Charateristics of GEM important in release to the environment include ability to colonize surfaces, transfer genetic material and persist in specific environments. Clearly, the effects of GEM on the environment cannot be precisely predicted, unless the organisms have been so debilitated that they cannot persist in any natural habitat and cannot exchange genetic material with any other organism. It must be recognized that micro-organisms are extremely diverse and versatile. Uniformly applied, standard regulations governing deliberate release of GEM to the environment cannot be applied in the same way as for regulation of chemicals or medical devices. Case-by-case regulation appears to be the best approach for the immediate future. The implications of each organism, in terms of its own biology, will have to be considered.

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Resumen En el campo de la biotecnología, en rápida expansión, causa preocupación la liberación deliberada al medio ambiente de microorganismos manipulados genéticamente. Se estan llevando a cabo estudios para determinar el destino y el efecto de tales microorganismos en el medio ambiente y especialmente su impacto ambiental. Estos estudios indican que la detección directa de dichos microorganismos, no cultivables pero que permanecen viables en un entorno natural, se puede realizar empleando microscopía de inmunofluorescencia/epifluorescencia junto con secuencias 5S rARN utilizadas como etiquetas, lo que proporciona un sistema eficaz para rastrear estos organismos en muestras del medio ambiente. La utilización de microcosmos y los estudios realizados hasta el momento indican que, efectivamente, los microorganismos sufren una transformación que los mantiene viables aunque no recuperables, en un estado similar a la dormancia, por lo que se requieren métodos de detección directa para controlar la liberación al medio ambiente de microorganismos producidos mediante ingeniería genética. Este fenómeno ocurre también frecuentemente en otros microorganismos liberados al ambiente, entre ellos posibles patógenos. Los estudios realizados sobreVibrio cholerae proporcionan un ejemplo interesante tanto de los métodos empleados como de los resultados obtenidos. Las conclusiones obtenidas indican que el organismo esta ampliamente distribuido en el entorno natural, pero que solo puede ser detectado mediante microscopía directa debido al estado viable, aunque no vultivable, en que se mantiene en el ambiente. Ensayos en animales muentran que se pueden recolectar células deV. cholerae a partir de muestras del medio ambiente y recuperarse como células viables despues de haber sido inyectadas en el íleo de conejos, habiendose demostrado una respuesta ileal positiva para aquellas cepas que son enterotóxicas. Obviamente las ideas actuales acerca de la persistencia y función de los microorganismos en el ambiente necesitaran ser modificadas a medida que se vayan desarrollando nuevos métodos y nuevos conceptos en ecología microbiana.

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Résumé Le développement rapide de la biotechnologie a fait naître des préoccupations concernant le relâchement délibéré dans l'environment de micro-organismes génétiquement manipulés. Des études sont en cours pour déterminer le sort et les effects de ces micro-organismes dans la nature. Les travaux entrepris montrent que la microscopie d'immuno-fluorescence et d'épifluorescence, associée à la détérmination de séquences-marqueurs de r-ARN 5S, permet de détecter des micro-organismes non-cultivables, mais demeurés viables dans les milieux naturels. Les études déjà réalisées sur divers microcosmes indiquent que des micro-organismes peuvent effectivement se trouver dans un état viable, mais non-cultivable, qui ressemble à une dormance, ce qui exige, pour contrôler le relâchement dans la nature d'organismes génétiquement manipulés, l'emploi de méthodes de détection directe. Ce phénomène se produit fréquemment aussi dans le cas de beaucoup d'autres organismes, y compris des pathogènes potentiels, qui sont relâchés dans l'environnement. Des études réalisées avecVibrio cholereae fournissent un exemple de méthodes utiles et de résultats intéressants. Il résulte de ces études queV. cholereae est largement distribué dans l'environnement naturel et ne peut souvent y être détecté que par microscopie directe, à cause de l'état viable, mais non-cultivable, sous lequel il se maintient dans la nature. Les études sur l'animal montrent qu'on peut collecter à partir d'échantillons de milieu naturel des cellules deV. cholereae viables mais noncultivables, après avoir donné, dans le cas des souches entéro-toxigènes, une réponse intestinale positive. Il est clair que les idées courantes sur la persistance et la fonction des micro-organismes dans l'environnement demandent à être modifiées en fonction de l'émergence de nouvelles méthodes et de nouveaux concepts en écologie microbienne.

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Invited paper presented at the VII International Conference on the Global Impacts of Applied Microbiology, Helsinki: 12–16.8.1985. Session 4     

Report on the use of biomethanation in Argentina

Summary Biomethanation in Argentina is considered for the treatment of agro-industrial wastes, to reduce pollution and costs of wastewater treatment, and for the treatment of animal manure in locations far away from the energy-distribution systems. For the treatment of stillage the Upflow Anaerobic Sludge Blanket (UASB) reactor has been retained on the basis of the results obtained in a 100-litre semi-pilot-plant reactor. A 30-m³ UASB pilot plant is to be built in a leading distillery. The expected production of a full-scale plant would cover, 65 to 70% of the energy needs of the distillery. In biomethanation of manure, the only farms that could profit from biogas technology are the milking farms located far away from the electricity distribution system where the manure collected during the milking time could produce the energy needed to cool the milk from 22°C to 4°C.

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Resumen En Argentina se usa la biometanación para el tratamiento de residuos agro-industriales, para reducir los niveles de polución y el coste de tratamiento de aguas residules y para el tratamiento de estiercol animal en lugares lejanos de la red de distribución energética. Debido a los resultados obtenidos en un reactor semi-piloto de 100 litros se sigue utilizando el UASB para el tratamiento de los desechos de destileria. Se va a construir una planta piloto UASB en una de las destilerias más importantes. Las expectativas de producción cubren du un 65% a un 70% de las necesidades energéticas de la destileria. En relación con la biometanación de estiercol las únicas explotaciones agrarias que podrían beneficiarse de la tecnología del biogas son las granjas lecheras localizadas lejos de la red de distribución electrica donde el estiercol recogido durante el tiempo de ordeñe podría producir la energía necesaria para enfriar la leche de 22°C a 4°C.

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Résumé En Argentine la biométhanisation est essentiellement prise en compte d'une part pour le traitement des eaux résiduaries des agro-industries, pour réduire la pollution et le coût de traitement des ces déchets, et d'autre part pour le traitement de lisiers animaux dans des régions éloignées du réseau de distribution d'énergie. En ce qui concerne le traitement des eaux résiduaires, le procédé Upflow Anaerobic Sludge Blanket (UASB) a été retenu sur base des résultats obtenus dans un digesteur pilote de 100 1. Une installation pilote de 30 m³ sera construite dans une distillerie importante susceptible de couvrir 65 à 75% de ses besoins énergétiques avec la production attendue d'une installtion de taille réelle. En ce qui concerne la biométhanisation de lisier, les seules exploitations qui tireraient profit de la technologie sont les élevages laitiers situés loin du réseau de distribution d'électricité, où le lisier récolté pendant la traite pourrait produire l'énergie suffisant au refroidissement du lait.

     

Isolation and reversion of protoplasts ofPleurotus sajor-caju

Summary The conditions for protoplast isolation and reversion inPleuro tus sajor-caju were determined. Spherical, osmotically sensitive protoplasts were released from the mycelia through the action of Novozym 234 and cellulase CP in a suitable osmotic solution. A maximum protoplast yield was obtained from young mycelia at an early exponential growth phase by the use of 0.6 mol/l MgSC₄ in a 0.01 mol/l phosphate buffer at pH 5.0. Mannitol appeared to be more suitable forPleurotus protoplast reversion. Two patterns of morphological development of the protoplasts were observed in the osmotic liquid medium. The reversion frequency was, however, low at 4–5%. There appeared to be no significant difference in the reversion frequencies of the protoplasts grown on the complete medium and on the minimal medium.

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Resumen Aislamiento y reversión de protoplastos en Pleurotus sajor-caju Se determinaron las condiciones para el aislamiento y reversión de protoplastos enPleurotus sajor-caju. Protoplastos esféricos y osmóticamente sensibles se obtuvieron a partir de micelio mediante la action de Novozym 234 y celulasa CP en un medio osmótico adecuado. El máximo numéro de protoplastos fueron obtenidos a partir de miclio joven en la primera parte de la fase exponencial de crecimiento utilizando 0.6 mol/l MgSO en un tampón fosfato (0.01 mol/l) a pH 5.0. Manitol parece ser adecuado para la reversion dePleurotus. Se observaron dos patrones de desarrollo morfológico de los protoplastos en el medio osmótico líquido. La frecuencia de reversion fue, sin embargo, baja (4–5%). No se observaron diferencias significativas entre los protoplastos obtenidos en el medio completo y los que lo fueron en un medio mínimo.

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Résumé Isolement et réversion des protoplastes de Pleurotus sajor-caju Les conditions pour l'isolement de protoplastes dePleurotus sajor-caju et pour leur réversion ont été déterminées. Des protoplastes sphériques et osmotiquement sensibles ont été préparés à partir du mycélium par action de Novozym 234 et de cellulase CP en milieu osmotiquement approprié. Le rendement maximum en protoplastes est obtenu à partir du mycélium jeune, en phase exponentielle précoce, dans un tampon phosphates 0,01 M à pH 5,0, contenant MgSO₄ 0,6 M. Pour la réversion des protoplastes, l'agent le plus favorable est le manitol. Deux modes de développement morphologique des protoplastes en milieu osmotique ont été constatés. Toutefois, la fréquence de réversion est faible (4 à 5%). Il ne semble pas que la fréquence de réversion soit significativement différente lorsque les protoplastes sont cultivés en milieu complet ou en milieu minimal.

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This work is part of the first author's PhD thesis submitted to the Department of Biology of the Chinese University of Hong Kong.     

Cytogenetics of autotetraploid sugar beet (Beta vulgaris L.)

Summary Autotetraploid and diploid varieties of sugar beet were investigated for morphology, plant development, root and seed yield. The results obtained from the tetraploid varieties were evaluated according to the number of euploid and aneuploid plants found in each variety. Aneuploid plants often are characterized by delayed growth and poor root or seed yield, which reflects in the average yield of the tetraploid variety. Eutetraploid plants will compete successfully with their diploid counterparts. Until chromosomal stability of euploid plants will be found, aneuploid plants can be eliminated by mechanical selection only, which has to be repeated in each generation. A mechanical selection for euploidy will not only lower the amount of aneuploids in the tetraploid varieties, but also among the triploid hybrid seeds.

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Zusammenfassung Autotetraploide und diploide Zuckerrübensorten wurden auf Morphologie, Wachstum sowie Rüben-und Samenertrag untersucht. Die Ergebnisse der tetraploiden Sorten wurden gemäß den in ihnen gefundenen Anteilen von euploiden und aneuploiden Pflanzen ausgewertet. Aneuploide Pflanzen sind oft durch verlangsamtes Wachstum und schlechten Rüben- oder Samenertrag gekennzeichnet, was sich im Durchschnittsertrag der tetraploiden Sorten widerspiegelt. Eutetraploide Pflanzen können erfolgreich mit den entsprechenden diploiden konkurrieren. Ehe nicht chromosomal stabile eutetraploide Pflanzen gefunden werden, können Aneuploide nur durch mechanische Selektion ausgelesen werden. Diese muß in jeder Generation wiederholt werden. Eine mechanische Selektion auf Aneuploide wird die Anzahl der Aneuploiden nicht nur in den tetraploiden Sorten herabsetzen, sondern auch unter den triploiden Hybridsamen.

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Resumen Se investigó variedades autotetraploides y diploides de remolacha azucarera en relación con la morfología, el desarrollo y el rendimiento en raíz y semilla. Los resultados obtenidos de la variedad tetraploide se evaluaron de acuerdo con el número de plantas euploides y aneuploides halladas. Las plantas aneuploides se caracterizan frecuentemente por un crecimiento retardado y una producción pobre en raíz o semilla, propiedades que se reflejan en el rendimiento medio de las variedades tetraploides. Las plantas eutetraploides pueden competir con éxito con sus correspondientes diploides. Mientras no se alcance la estabilidad cromosómica de las plantas euploides, las aneuploides pueden únicamente eliminarse por medio de una selección mecánica, selección que debe repetirse en cada generación. Una selección mecánica para euploidía no sólo rebajará la proporción de aneuploides en las variedades tetraploides sino tambien dentro de las semillas híbridas triploides.

     

La inmunofluorescencia indirecta en el diagnostico serologico de las candidiasis sistemicas

Resumen Estudiamos la presencia de anticuerpos contraCandida albicans, mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta, este trabajo pretende completar un estudio anterior, presentado por uno de nosotros, en el que demostramos el valor de las pruebas de fijación de complemento e inmunodifusión en gel de agar para el diagnóstico de las septicemias y endocarditis moniliásicas.El antígeno empleado fué una suspension de células deCandida albicans cepa 3043 del Centro de Micología.La antiglobulina humana unida a isotiocianato de fluoresceina provenía del Instituto Pasteur de París.Se estudiaron los sueros de 100 dadores de un banco de sangre, 51 dieron reacciones positivas y 49 negativas, los títulos de los sueros positivos fueron: 1/10 22 sueros, 1/20 13, 1/40 8, 1/80 4, y 1/160 3.Se examinaron 35 sueros de pacientes portadores de candidiasis superficiales, de los cuales 33 fueron positivos con títulos que variaron de 1/10 a 1/320.Estudiamos los sueros de 10 pacientes que padecían septicemias y endocarditis porCandida con hemocultivos positivos, todos dieren reacciones fuertemente positivas con títulos que oscilaron entre 1/2560 y 1/20480. La prueba de inmunofluorescencia indirecta fué igualmente positiva, con títulos moderadamente elevados en dos pacientes portadores de moniliasis broncopulmonar y en uno con una endoftalmitis porCandida.

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The results of complement fixation tests and immunodiffusion agar gel tests in the serological studies of cases ofCandida septicaemia andCandida endocarditis were published in a previous paper. The results of the indirect immunofluorescence technic applied to the diagnosis of candidiasis are here reported. 51 positive results with titers ranging from 1/10 to 1/160 were obtained from sera of 100 persons without clinical manifestations of candidiasis. 33 positive results with titers ranging from 1/10 to 1/320 were registered from sera of 35 patients with superficialCandida infections. Sera from 10 patients withCandida septicaemia andCandida endocarditis gave strong positive reactions with titers ranging from 1/2.560 to 1/20.480. Positive results with fairly high titers were obtained in cases of bronchopulmonary candidiasis and in one case of candida endophthalmitis.