毛栓菌胞外漆酶的纯化及部分性质研究

毛栓菌胞外漆酶经盐析、透析、sephadexG75和G2 5四步纯化 ,粗酶液被纯化了 39 1倍 ,比活力 12 152 ,回收率 4 5 3%。漆酶最适pH值为 4 0 ,最适反应温度为 30℃。K Cu 2 、Zn2 离子可激活漆酶 ,而Ag 、Fe3 离子可抑制漆酶的活性。漆酶的Km值为 1 81× 10 3mol/L。     

白腐菌产漆酶的纯化及部分酶学性质

对白腐菌W 1产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、分子筛和离子交换层析进行纯化 .用SDS PAGE证明该酶的分子量大约为 6 2 4kD .等电聚焦电泳显示该酶的等电点为 3 5 .酶反应的最适温度为 5 0℃ ,最适pH值为 4 5 .此酶氧化DMP的Km 值为 3 84× 10 -5mol L .金属离子对酶活的影响很大 ,其中K+ 、Mn2 + 、Ag+ 对酶活有促进作用 ,Fe2 + 、Fe3 + 、Hg2 + 、Co2 + 、Ba2 + 等对酶活有明显的抑制作用 .酶对部分染料也有一定的脱色效果     

灵芝EIM-40漆酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩、（NH4）2S04盐析、HiTrapphenyl（FF）疏水层析和QSepharose FastFlow离子交换层析对灵芝EIM-40发酵液进行分离纯化,获得纯化漆酶,纯化倍数为14．6,回收率为5．3％。SDS-PAGE银染的结果为单一条带,相对分子质量约为6．53×104。以愈创木酚和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）为催化底物进行酶学性质研究,最适pH分别为4．8和4．5,最适温度分别为55和50℃,2种底物在pH4．0。5．0范围内,温度低于50℃时,酶的稳定性都很好。以愈创木酚为底物,Km=645．0umol／L;以ABTS为底物,Km=22．2txmol／L。Cu2＋对该酶起激活作用,Fe2＋、Ca2＋、Ba2＋则完全抑制酶的活性。     

毛栓菌漆酶诱导及部分特性研究

研究了碳源、氮源、愈创木酚、香兰素及培养条件对漆酶分泌的影响 ;结果表明 ,麦草粉作碳源、(NH4 ) 2 SO4 作氮源有利于漆酶的分泌 ,适宜浓度的愈创木酚和香兰素等对漆酶的产生有一定的作用 ;pH在 3 0 - 8 0的范围内对漆酶的分泌影响差别不大 ,培养温度、接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响。漆酶最适pH值为 4 0 ,最适反应温度为 30℃ ,K+ 、Zn2 + 、Cu2 + 离子可激活漆酶 ;而Ag+ 、Fe3+ 、Cl- 离子可抑制漆酶活性。漆酶的Km值为 1 81× 10 - 3mol L。     

担子菌漆酶的分离纯化及其性质研究

采用硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl SepharoseTM6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的漆酶同工酶Lac1,纯化倍数为318.4,活力回收率为18.6％。用SDSPAGE测得该酶分子量为60.3kD,而经质谱分析为55.94kD。最适反应温度为65℃,最适反应pH值为2.2～2.8,酶的等电点pI（室温）为4.02,其N末端序列为AIGPVTDL,用硫酸酚法测得其含糖量为49.2％。25℃条件下,以ABTS(2,2'azinobis(3ethylbenzthiazoline6sulphonate)为底物的Km为17.5μmol/L。该酶在45℃,pH3.0～9.5较稳定。Cu^2＋对酶活有明显的促进作用,Fe^2＋完全抑制酶的活性,Mn^2＋和Ag^＋对酶活无明显影响。DTT（Dithiothreitol,二硫苏糖醇）和NaN3完全抑制酶的活性。Koshland试剂对漆酶的活力影响比较大,色氨酸可能是酶活力的必需基团。     

毛栓菌(Tramets trogii)液体培养产漆酶的研究

实验研究了碳源、氮源和综合因素对毛栓菌(Tramets trogii)液体培养产漆酶和生长情况的影响。碳源为玉米面、氮源为豆饼粉时,菌株的产漆酶酶活最高;碳源为可溶性淀粉,氮源为麦麸时,对菌株的生长有利;在液体条件下,菌株产漆酶的最佳培养基组成为玉米面3.5%,豆饼粉4.0%,KH2PO40.3%,MgSO40.15%,VB10.04%。     

多孔菌Polyporus W38漆酶的纯化及性质研究

对多孔菌 (PolyporusW 38)漆酶进行了硫酸铵盐析、半透膜透析、SephadexG75及SephadexG2 5柱层析纯化 ,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件。结果表明在该培养条件下 ,多孔菌第 9d达产酶高峰 ,峰值酶活为 412u/mL ,酶作用的最适pH值为 4.2 ,最适酶解温度为 2 5℃ ,Mg2 +,Mn2 +对漆酶有激活作用 ,而Ag+,Fe3 +和Cl-则能明显抑制漆酶活性。     

培养条件对毛栓菌漆酶分泌的影响

研究了碳源、氮源、愈创木酚、香兰素及培养条件对漆酶分泌的影响;结果表明,麦草粉作碳源、(NH_4)_2SO_4作氮源有利于漆酶的分泌,适宜浓度的愈创木酚和香兰素等对漆酶的产生有一定的作用;pH在3.0～8.0的范围内对漆酶的分泌影响差别不大,培养温度、接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响。     

丝孢菌Monodictys asperospera (Cooke & Massee) Ellis漆酶的分离纯化及其酶学性质

本研究首次发现Monodictyx asperospera(Cooke&Massee)Ellis具有较好的产漆酶能力.粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析及丙烯葡聚糖凝胶S-300层析纯化,纯化倍数为8.1,回收率为5.7%.漆酶分子量约为77kD,最适反应温度为55℃,最适反应pH6.0,以丁香醛连氮为底物时Km为0.163mm0l/L,Vmax为0.194 mmol(L·min),含糖量为18.14%,Cu2+对漆酶有明显抑制作用.     

白灵侧耳漆酶分离纯化及其酶学性质研究

为了探索白灵侧耳Pleurotus eryngii var.tuoliensis漆酶性质,以白灵侧耳菌株00485为试验材料,从发酵液中分离纯化得到胞外漆酶并对其酶学性质进行测定。纯化流程依次为DEAE-Cellulose阴离子交换层析,CM-Cellulose阳离子交换层析,SP-Sepharose强阳离子交换层析以及Superdex 75凝胶过滤层析,获得胞外白灵侧耳漆酶(Pn Lac)。SDS-PAGE检测结果表明Pn Lac为65k Da的单一蛋白。Pn Lac经过胰蛋白酶水解得到3种肽段,经过NBCI-BLAST后发现它们与糙皮侧耳、环柄韧伞、刺芹侧耳等的漆酶具有同源性。底物为2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)时该种漆酶的最适反应温度和p H分别为50℃和3.0,Ca2+和Hg2+能够抑制它的活性,相反地Cu2+和Mn2+能够提高它的活性,米氏常数Km和Vmax分别是0.17mmol/L和1.76OD/min/U。     

一株毛栓菌静置液体发酵产纤维素酶条件研究

考察一株新分离的毛栓菌静置产纤维素酶的条件,通过单因素试验和正交设计试验分别对培养基初始pH、培养基中的碳源、氮源及诱导物进行研究。利用DNS（3,5-二硝基水杨酸）法测定CMC-Na（羧甲基纤维素钠）纤维素酶活。结果表明：该毛栓菌静置发酵产纤维素酶的最适pH为5.0,最适碳源、氮源和诱导物分别是淀粉、酵母粉和干麸皮,且质量浓度分别为淀粉1%、酵母粉0.4%、干麸皮1.5%,在此条件下,进行静置发酵3d,可获得CMC-Na（羧甲基纤维素钠）纤维素酶活力最高为56.62U/mL。此研究开创了纤维素酶生产菌的新发现,与以往所报道的好氧产纤维素酶菌种黑曲霉、木霉等相比,具有发酵时间短、耗能小等优点,具有一定的潜在应用价值。     

高酶活菌株的筛选及漆酶特性

通过Bavendamn氏反应和液体发酵实验筛选出漆酶高产菌株 ,并对其产酶条件和酶活性进行了研究。结果表明 71株实验真菌中有 64株Bavendamn氏反应呈阳性 ,且阳性菌株都具有漆酶活性 ;不同菌株产酶培养基最适碳源、氮源不同 ,采绒革盖菌以淀粉为碳源、干酪素为氮源 ,毛栓菌以麦草粉为碳源、硫酸铵为氮源 ,有利于酶的分泌 ;不同来源漆酶性质不尽相同 ,采绒革盖菌漆酶最适酶解温度为 2 5℃ ,最适酶解pH值为4.6,毛栓菌则分别为 3 0℃和 pH 4.0 ;K+ ,Zn2 + 等对 2种漆酶均有激活作用 ,Ag+ 则能明显抑制漆酶活性。     

漆酶高产菌株的筛选及产酶条件研究

木质素是一种高度复杂的不定形的芳香族化合物 ,是仅次于纤维素的第二大再生有机资源 ,木质素的微生物降解及其有关酶类在制浆造纸工业和环境保护方面具有较大潜力。木质素的生物降解酶主要有木素过氧化物酶、漆酶、锰过氧化物酶和多酚氧化酶等。国外已有该方面的研究报道[5～ 7,9,10 ] ,但多集中在黄孢原毛平革菌 (Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ)木素过氧化物酶和锰过氧化物酶方面的研究 ;Ｓｌｏｍｃｚｙｎ ｓｋｉ等[8] 研究了Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ的漆酶特性 ;国内有关研究报道较少[3 ,4 ] ,筛选漆酶高…     

Laccase activity from the fungus Trametes hirsuta using an air-lift bioreactor

AIM: To produce high laccase activities from the white-rot fungus Trametes hirsuta in an in-house air-lift bioreactor (ALB). METHODS AND RESULTS: Trametes hirsuta was grown in a 6-l ALB. A fed-batch strategy with glycerol as an addition resulted in maximum laccase activity of 19,400 U l(-1), which was the highest reported from the fungus. CONCLUSION: The ALB configuration with additional glycerol resulted in high laccase activities. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: This study provides useful information on how to produce high concentrations of laccase.     

黑木耳漆酶纯化及部分漆酶特性的研究

黑木耳漆酶研究可为漆酶的进一步分离纯化、基因克隆表达和大规模生产应用奠定基础。对黑木耳"黑29"菌株漆酶粗酶液进行硫酸铵分级沉淀后,通过Native SDS-PAGE电泳检测,存在3种漆酶LacA、LacB、LacC,分子量分别为60,34,19 kD。经硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel柱层析技术分离得一纯化成分LacC,纯化倍数7.60,酶活性回收4.28%。对LacC的pH、温度、金属离子和Km值等部分酶学性质进行研究发现,该酶氧化ABTS的Km值为1.18×10-6mol/L,催化氧化底物ABTS的最适pH为3.8,在pH 3.0~4.6表现出较强的稳定性;最适反应温度为55℃,低于50℃时有较好的热稳定性;金属离子Ag+对漆酶有激活作用,而Fe3+、Mn2+、Co2+则有抑制作用。