SIS聚合物在生物技术中的应用

ＳＩＳ聚合物可随环境参数的变化发生可逆转化，因此可被用于酶与蛋白质的亲和沉淀或逆固定化，这对于简化蛋白南的分离纯化程度、和提高固定化酶的利用率有重要的意义。本文就近十年来在这一领域的研究作一综述报道。     

固定化村草杆菌色氨酰—tRNA合成酶

为研究ｔＲＮＡ＾Ｔｒｐ与色氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＴｒｐＲＳ）的相互识别及其结构、功能关系,纯化了枯草杆菌ＴｒｐＲＳ并用溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ将ＴｒｐＲＳ固定化,固定化ＴｒｐＲＳ的蛋白质回收率为为９５．５％,活力回收率为３１．３％。研究了固定化ＴｒｐＲＳ的酶学性质。其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相ＴｒｐＲＳ有了较大的提高,最适温度、最适ｐＨ均有一定程度的增大,工作稳定性良好。以固定化Ｔ     

固定化枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶(英文)

为研究ｔＲＮＡＴｒｐ 与色氨酰ｔＲＮＡ合成酶（ＴｒｐＲＳ） 的相互识别及其结构、功能关系, 纯化了枯草杆菌ＴｒｐＲＳ并用溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ 将ＴｒｐＲＳ固定化, 固定化ＴｒｐＲＳ的蛋白质回收率为９５ ．５ ％ , 活力回收率为３１．３％ 。研究了固定化ＴｒｐＲＳ的酶学性质, 其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相ＴｒｐＲＳ有了较大的提高, 最适温度、最适ｐＨ 均有一定程度的增大, 工作稳定性良好。以固定化ＴｒｐＲＳ为亲和层析介质, 对含有２０ 个核苷酸随机序列、长度为５６ 个核苷酸的单链ＲＮＡ 随机库进行了３ 轮筛选,ＲＮＡ 群体亲和固定化ＴｒｐＲＳ的比例从４ ．３ ％ 上升至１４ ．７ ％ 。筛选得到了与ｔＲＮＡＴｒｐ 氨基酸接受茎类似的ＲＮＡ二级结构。实验结果表明固定化ＴｒｐＲＳ可以作为ＳＥＬＥＸ 亲和层析介质, 进行模拟ｔＲＮＡＴｒｐ 分子的ＲＮＡ 随机库的ＳＥＬＥＸ 筛选。     

固定化细胞在有机相中的催化反应

１引言近年来固定化细胞（主要是微生物细胞）在有机相中的催化反应已有不少报导,与固定化酶在有机介质催化反应相比,具有一定的优点［１,２］：（１）减少了酶的分离、纯化过程。（２）微生物细胞含有一系列量少且在纯或半纯状态下不稳定的酶,许多生物转化过程可在酶...     

温和气单孢菌YH311硫酸软骨素裂解酶的分离纯化与固定化

通过硫酸铵沉淀、QAESephadex-A50柱层析及Sephadex-G150凝胶过滤等纯化步骤,对源自温和气单孢菌YH311的ChSase进行了分离纯化。结果表明,ChSase经上述纯化步骤后被纯化了55倍,其最终纯度可达95%以上,比活为31.86u/mg。经SDSPAGE及IFE测定可知该酶的分子量约为80kD,等电点为4.3～4.8。将纯化后的ChSase用海藻酸钠或纤维素固定化后,ChSase的热稳定性及贮存稳定性均可得到大幅度的提高：固定化酶用80℃水浴处理120min或于4℃冰箱放置30d后仍可保留50%以上的相对活力;但固定化酶的收率较低,仅为18.56%和18.86%。     

青霉素酰化酶的研究进展

青霉素酰化酶（penicillin acylase)是合成半合成青霉素的重要酶。近年来,对该酶的结构,分离纯化方法,稳定性,固定化及介质工程等方面进行了大量的研究。本文综述了以上研究的进展。     

链霉菌Strz-6木聚糖酶的纯化和固定化研究

链霉菌胞外木聚糖酶经过盐析、离子交换和分子筛层析纯化,粗酶液被纯化了32.5倍,比活力达498u/mg,活力回收46.6%。纯化后的酶固定在戊二醛交联的壳聚糖上,酶活回收率为42.8%。固定化酶的最适pH为6.0,最适温度为60℃,且固定化酶在65~75℃活力都较高。该酶的耐热性比较强,固定化酶热稳定性优于原酶;以木聚糖为底物,固定化酶的表观米氏常数为0.93×10-2g/L。     

头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化

本文构建了利用trp启动子表达头孢菌素脱乙酰酶(CAH)的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐(装液量2L)中发酵28 h,发酵液OD_(600)达到27,产酶313 kU/L发酵液,粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70%。发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫酸铵分级沉淀分离纯化和超滤除盐浓缩两步操作,纯化倍数为1.44,总酶活回收率56%,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯化后蛋白没有明显杂蛋白条带出现。纯化后的CAH共价结合固定在环氧基载体LX-1000EP(c)上,通过对固定化条件的优化最终得到固定化酶比活443 U/g。该固定化酶重复催化50 mL 5%7-ACA底物100次后,酶活没有降低。     

生物酶法制备D-对羟基苯甘氨酸的研究

生物酶法生产D-对羟基苯甘氨酸具有良好的应用前景。通过介绍生物酶法生产D-对羟基苯甘氨酸的研究现状,从酶的分离纯化、酶和细胞的固定化、反应介质研究和反应动力学研究以及基因工程进展几个方面作了总结。     

多酶共固定化的研究进展

固定化酶技术是现代生物催化的核心技术。过去几十年里,固定化酶技术的研究主要集中在单酶固定化。近年来,多酶共固定化由于具有可增加反应的局部浓度、提高反应收率等优点而得到研究者的广泛关注。本文根据国内外研究现状并结合本实验研究从多酶非特异性共价共固定化、非特异性非共价共固定化、非共价包埋固定化以及位点特异性固定化四个方面阐述多酶固定化方法的研究进展,并分析和展望了其在工业上的应用前景。     

交联酶聚集体--一种无载体酶固定化方法

对一种崭新的无载体酶固定化技术——交联酶聚集体(Cross-linked Enzyme Aggregates,CLEAs)技术进行了文献综述。CLEAs技术是一种将蛋白质先沉淀后交联形成不溶性的、稳定的固定化酶。研究结果显示其活性和稳定性可与交联酶晶体(Cross-linked Enzyme Crystals,CLECs)技术相媲美。由于其制备不需要复杂耗时的结晶、纯化步骤,一般实验室都能实行,因而更有利于研究和应用的普及。该文就CLEAs的制备、在水溶液中的活性和稳定性在有机溶剂中的活性和作用机理及研究进行了介绍讨论。     

金属螯合载体定向固定化木瓜蛋白酶的研究

以磁性金属螯合琼脂糖微球为载体,利用金属螯合配体（IDACu²⁺）与蛋白质表面供电子氨基酸相互作用的原理,定向固定了木瓜蛋白酶。固定化最适条件为Cu²⁺1.5×10^-2mol/g载体、固定化时间4h、固定化pH7.0、给酶量30mg/g载体。固定化酶的最适反应温度70℃、最适反应pH8.0,固定化酶的热稳定性明显高于溶液酶,固定化酶活力回收为68.4％,且有较好的操作稳定性,载体重复使用5次后固定化酶酶活为首次固定化酶79.71%。     

微生物脂肪酶的研究进展

详细综述了脂态酶微生物产生菌的选育、诱变育种及发酵生产技术,对微生物脂肪酶的性质、分离、纯化、固定化技术及应用进行了简要概述     

固定化细胞应用进展

固定化细胞技术是酶工程的核心技术之一,它将酶工程提高到一个新水平。该技术简化了工业分离纯化的步骤,并使酶反应的连续生产成为现实。目前,该技术已经广泛应用于食品、发酵、三废处理等行业,经济效益显著。首先分析了固定化细胞的优缺点,介绍了近年来在食品、发酵和三废处理行业的应用,最后对其应用进行了展望。     

铁蛋白介导的地衣多糖酶胞内自发聚集及其高效制备

酶分离纯化、固定化及催化性能提升一直是生物催化领域的研究热点和前沿,也是众多研究者致力解决的难点.研究和开发新型的纯化、固定化及提升催化性能的方法,降低纯化及储存等设备的要求及生产成本,对酶大规模应用具有重要意义.文中将铁蛋白(ferritin)与目标酶(地衣多糖酶)基因融合,经高效表达后,在细胞内 自发形成无载体固定...     

Eupergit C250L固定化D-海因酶及其催化性质

D-海因酶是海因酶法制备D-氨基酸的关键酶。利用Burkholderic cepecia1003菌发酵产酶,所得海因酶纯化后,以Eupergit C250L为载体进行共价固定化。分别考察了酶液蛋白浓度、固定化时间对蛋白固定量和酶活回收率的影响以及固定化前后海因酶催化性质的变化。结果表明:较高的酶液蛋白浓度和较长的固定化时间均有助于改善海因酶的固定化效果;固定化可显著提高海因酶的最适作用温度,但对其最适作用pH影响不大;固定化后海因酶对D,L-BH和MH的米氏常数均有较大幅度的降低。固定化酶反应器的实验表明:40℃下,底物(D,L-BH)1.0 g.L-1,体积流速1.0 mL.min-1,经21 h转化,产物N-Phe质量浓度可达0.47 g.L-1,转化率达43.21%。     

酶的定向固定化方法及其对酶生物活性的影响

固定化酶可以提高酶的稳定性,但通常酶通过酶分子上的多个赖氨酸残基随意固定在载体上,这样会使酶的活性显著下降,采用定向固定化酶不仅可以提高酶的稳定性,而且可以保存它的活性。综述了定向固定化酶的几种方法,比较了定向固定化和随意固定化对酶活性的影响。另外,还叙述了酶的活性位点结构变化的自旋共振波谱(EPR)检测。     

青霉菌胞外半纤维素酶的固定化研究

青霉菌m8胸外半纤维素酶经过离子交换和分子筛层析两步纯化,纯化的酶固定在戊二醛交联的壳聚精上,残活力为45．6％。固定化酶的最适pH为3．6,最适温度为65℃,且固文化酶在65～75℃活力都较高。该酶的耐热性比较强,固定化酶热稳定性优于原酶;以半纤维素为底物,固定化酶的表观米氏常数为3．58×10－2g／L。     

DA-F127水凝胶包埋固定化含腈水合酶细胞

腈水合酶是一类可催化腈类化合物转化生成相应酰胺类物质的酶。含腈水合酶的游离细胞催化水合反应存在酶容易失活、细胞无法重复利用、分离纯化困难等缺陷,细胞固定化技术可有效解决这些问题。为探索合适的固定化方法,以含腈水合酶的重组E. coli细胞为研究对象,以固定化酶活回收率和批次反应情况为评价指标,筛选比较了几种常用的包埋固定化方法。结果表明,DA-F127水凝胶包埋固定化细胞不仅具有较高的酶活回收率,而且稳定性也很好。对该方法进行了固定化条件和操作稳定性优化,当DA-F127浓度为15%、UV光源距离为20cm、光照时间为6min、菌体含量为20mg/g固定化细胞时,酶活回收率为89. 74%,并且可以催化9批次150g/L的3-氰基吡啶完成转化,第九批次转化率可达98. 26%。与游离细胞催化过程相比,单位质量游离细胞的烟酰胺产量提高了12倍,具有良好的工业应用前景。     

DA-F127水凝胶包埋固定化含腈水合酶细胞

腈水合酶是一类可催化腈类化合物转化生成相应酰胺类物质的酶。含腈水合酶的游离细胞催化水合反应存在酶容易失活、细胞无法重复利用、分离纯化困难等缺陷,细胞固定化技术可有效解决这些问题。为探索合适的固定化方法,以含腈水合酶的重组E.coli细胞为研究对象,以固定化酶活回收率和批次反应情况为评价指标,筛选比较了几种常用的包埋固定化方法。结果表明,DA-F127水凝胶包埋固定化细胞不仅具有较高的酶活回收率,而且稳定性也很好。对该方法进行了固定化条件和操作稳定性优化,当DA-F127浓度为15%、UV光源距离为20cm、光照时间为6min、菌体含量为20mg/g 固定化细胞时,酶活回收率为89.74%,并且可以催化9批次150g/L的3-氰基吡啶完成转化,第九批次转化率可达98.26%。与游离细胞催化过程相比,单位质量游离细胞的烟酰胺产量提高了12倍,具有良好的工业应用前景。