Zmu-1：DHP和DHP两个品系豚鼠组胺激发试验气道反应性的比较

目的研究Zmu-1：DHP和DHP豚鼠组胺激发试验气道反应性的差异,为哮喘研究提供具有较好反应性的动物模型。方法通过活体气管插管及雾化组胺气体吸入,测定豚鼠气道阻力和肺动态顺应性;采用离体气管片组胺滴定法,通过气管片收缩测定气管平滑肌对组胺的敏感性;采用同位素标记药物配位法,测定豚鼠气道组织组胺H1受体的密度及平衡解离常数。结果当豚鼠吸人大于0．5mg／mL雾化组胺时,Zmu-1：DHP豚鼠气道阻力上升率和肺动态顺应性下降率与DHP豚鼠相比,其速度有增大趋势,但未达到显著水平（P〉0．05）;两个品系豚鼠雄性个体比雌性的敏感性显著增加（P〈0．01）。当组胺浓度为10-5mol／L和10μmol／L时,Zmu-1：DHP豚鼠气管片平滑肌的收缩率显著大于DHP豚鼠（P〈0．01～0．05）。两个品系豚鼠气道组胺Hl受体的密度及其平衡解离常数无显著差异（P〉0．05）。结论在一定的组胺浓度范围内,Zmu-1：DHP豚鼠气道平滑肌对组胺的敏感性大于DHP豚鼠,雄性豚鼠的敏感性大于雌性豚鼠。两个品系豚鼠气道组胺H1受体数量无差异,提示气道反应可能还受到平滑肌膜上其它受体和化学介质的作用。     

侧脑室注射R-α-甲基组胺对哮喘豚鼠呼吸道P物质样免疫反应物的影响

目的:应用免疫组织化学方法观察侧脑室注射组胺Hs受体激动剂R-α-甲基组胺对哮喘豚鼠气道内P物质样免疫反应物的影响。方法：豚鼠首先腹腔注射卵蛋白致敏,给药组给予豚鼠股静脉注射卵蛋白激发哮喘发作后,再侧脑室注射组胺Hs受体激动剂R-α-甲基组胺(5μg)。哮喘组豚鼠在诱发哮喘发作后侧脑室注射等量生理盐水。对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。经肺动脉灌注4％多聚甲醛,取气管、支气管和肺组织,冰冻切片,做P物质免疫组织化学染色。结果：气管、支气管和肺泡间隔内的P物质样免疫反应物在哮喘发作组明显多于对照组,在给药后10min组明显少于哮喘组,给药后20min组已接近正常组。结论：经侧脑室途径激动中枢组胺Hs受体后,哮喘豚鼠呼吸道内神经源性炎症介质P物质减少,提示中枢组胺Hs受体参与对哮喘气道神经源性炎症的调控。     

侧脑室注射R-α-四基组胺对哮喘豚鼠呼吸道P物质样免疫反应物的影响

目的　应用免疫组织化学方法观察侧脑室注射组胺H3 受体激动剂R α 甲基组胺对哮喘豚鼠气道内P物质样免疫反应物的影响。方法　豚鼠首先腹腔注射卵蛋白致敏 ,给药组给予豚鼠股静脉注射卵蛋白激发哮喘发作后 ,再侧脑室注射组胺H3 受体激动剂R α 甲基组胺 (5 μg)。哮喘组豚鼠在诱发哮喘发作后侧脑室注射等量生理盐水。对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。经肺动脉灌注 4 %多聚甲醛 ,取气管、支气管和肺组织 ,冰冻切片 ,做P物质免疫组织化学染色。结果　气管、支气管和肺泡间隔内的P物质样免疫反应物在哮喘发作组明显多于对照组 ,在给药后 10min组明显少于哮喘组 ,给药后 2 0min组已接近正常组。结论　经侧脑室途径激动中枢组胺H3 受体后 ,哮喘豚鼠呼吸道内神经源性炎症介质P物质减少 ,提示中枢组胺H3 受体参与对哮喘气道神经源性炎症的调控。     

人气管平滑肌细胞培养

支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关,如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等.目前国内研究这些疾病的细胞材料多采用豚鼠和大鼠等动物的支气管平滑肌细胞,这与人气管平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的生理病理特征有很大的差距.我们在多年的实验过程中建立了一套人ASMCs的培养方法,介绍如下.     

烟碱对乙酰胆碱诱发豚鼠回肠收缩作用的调节

在离休豚鼠回肠标本上,ＡＣｈ诱发双相收缩反应：早期相收缩反应持续时间短,与神经节Ｎ受体有关;后期相收缩反应持续时间长,与平滑肌Ｍ受体有关。烟碱１０μｍｏｌ／Ｌ预孵育后,标本对烟碱激动神经节Ｎ受体诱发的收缩作用产生急性耐受,而ＡＣｈ激动平滑肌Ｍ受体诱发的收缩作用增强。     

豚鼠气管平滑肌化学介质敏感性与体征表型的相关性

目的研究豚鼠体征表型与气管平滑肌化学介质敏感性的相关性。方法根据体征表型眼睛颜色、毛色、性别差异选取36只豚鼠,将动物按体征表型分为白色黑眼雌性组（WBEF）,白色黑眼雄性组（WBEM）,白色红眼雌性组（WREF）,白色红眼雄性组（WREM）,杂色黑眼雌性组（VBEF）,杂色黑眼雄性组（VBEM）,每组动物各6只。用旋割法制备离体豚鼠气管螺旋条,以组胺histamine（浴槽浓度2.0×10^-3g/L）和乙酰胆碱acetylcholine（浴槽浓度2.0×10^-4g/L）诱导气管螺旋条收缩,用BL420生物信号采集系统与张力传感器测定标本张力变化值,分析豚鼠眼睛颜色、毛色、性别与组胺、乙酰胆碱诱导的气管螺旋条收缩效应强弱的关系。数据采用SPSS 11.5软件在α=0.05的信度下进行单因素方差检验。结果豚鼠毛色与眼睛颜色表型其气管平滑肌化学介质敏感性差异有显著性（P〈0.05）,白色体征表型豚鼠的气管平滑肌化学介质敏感性较杂色表型高,红色眼睛表型较黑色眼睛表型高。性别表型对其介质敏感性差异不显著。结论毛色、眼睛颜色表型不同其豚鼠气管平滑肌化学介质敏感性差异显著,性别表型不同其介质敏感性差异不显著,平喘动物模型宜优先选择白色红眼表型豚鼠。     

花椒挥发油对离体豚鼠气管平滑肌作用的实验研究

目的研究花椒挥发油对组胺(Histamine,His)、乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)诱发的豚鼠离体气管条收缩作用的影响,以及作用的量效关系,为研发平喘类中药奠定基础。方法采用Medlab生物信号采集处理系统利用定量药理分析方法分别测定:(1)His的量效曲线;(2)Ach的量效曲线;(3)不同浓度的花椒挥发油对His诱发的豚鼠离体气管条收缩的影响;(4)不同浓度花椒挥发油对Ach诱发的豚鼠离体气管条收缩的影响。结果His、Ach在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩,其中His与Ach在10-2mol/L时均可以使气管条收缩达到最大值,花椒挥发油对His、Ach诱发的支气管收缩均有抑制作用,在花椒挥发油浓度达0.48 g/L时抑制率为49%;但对Ach诱发的支气管收缩在剂量为0.48 g/L时抑制率仅达到26%,抑制作用明显弱于His;结论花椒挥发油在体外浓度为0.08~0.48 g/L时均能有效地抑制His、Ach诱发的支气管收缩,对His诱导的豚鼠气管平滑肌收缩的抑制作用强于Ach,提示花椒挥发油对过敏性刺激诱发的哮喘有较好的抑制作用,将为开发抗过敏性哮喘疾病的中药研发奠定基础。     

组织胺参与饮水调节

纽约Colgate大学F.S Kraly等最近报告,组织胺和胰岛素均可刺激饮水,这一作用可被组织胺受体(H_1或H_2)阻断剂所阻断。给大鼠皮下注射组织胺可明显地刺激饮水,并在1.25～20mg/kg剂量范围内呈剂量反应关系,产生最大饮水反应的组织胺剂量是20mg/kg。在注射组织胺前10分钟给大鼠腹腔注射组织胺H_1受体阻断剂dexbrompheniramine(DXB),可显著抑制20mg/kg组织胺刺激的饮水(P<0.001)。在DXB2～16mg/kg范围内,随剂量加大,抑制作用加强。16mg/kg的DXB可使组织胺引起的饮水抑制80%。组织胺H_2受体阻断剂甲氰咪胍(C)亦有显著的抑制作用(P<0.05),其有效剂量为32～100mg/     

β2受体激动剂：用于治疗慢性阻塞性肺病的支气管舒张剂

慢性阻塞性肺病(COPD) 是目前世界范围内发病率和病死率持续上升的常见慢性气道疾病。依据最新的2015 年版GOLD 指南, 对于稳定期COPD 的治疗目标是缓解症状和降低远期急性加重风险;支气管舒张剂可通过改变气道平滑肌张力,舒张支气管,改善气流 受限,缓解呼吸困难,提高患者生活质量,是治疗稳定期COPD 的一线基础药物。而β2 受体激动剂是临床上最常用的支气管舒张剂, 简介β2 受体激动剂的作用机制,主要对短效、长效和不同给药途径的β2 受体激动剂用于治疗COPD 的临床研究进展作一综述。     

豚鼠肺内NOS之分布及实验性哮喘对其活性的影响

用组织化学方法对豚鼠肺内一氧化氮合酶（NOS）进行定位研究．并观察正常对照组和支气管哮喘组豚鼠肺内NOS分布及活性变化。结果显示;（1）正常豚鼠各级支气管、肺泡管、肺泡囊上皮细胞均成NOS阳性反应,气道上皮下平滑肌细胞呈NOS阴性反应。（2）哮喘豚鼠各级支气管、肺泡管、肺泡囊上皮细胞呈NOS强阳性反应,气道上皮下平滑肌细胞里NOS阳性反应。（3）两组肺泡上皮细胞均呈NOS阴性反应。（4）两组肺内动,静脉血管内膜均呈NOS阳性反应。结果提示一氧化氮不仅对肺具有一定的生理作用,而且可能参与哮喘的病理生理过程。     

玉郎伞提取物对支气管平滑肌舒张作用的研究

研究玉郎伞水提物及从玉郎伞中提取纯化的三种活性成份—黄酮、皂苷、多糖对豚鼠离体气管条的舒张作用。实验制备新鲜豚鼠离体气管条,在克氏缓冲液中分别加入组胺或乙酰胆碱,使豚鼠气管螺旋条收缩达高峰后观察不同剂量的玉郎伞水提物及三种活性成份对乙酰胆碱或组胺致气管条收缩的影响。结果表明,玉郎伞水提物及皂苷、多糖能对抗乙酰胆碱或组胺对豚鼠离体气管条的收缩作用,使组胺及乙酰胆碱量效曲线右移。因此,玉郎伞水提物及皂苷、多糖有较强的支气管舒张作用。     

苦味的药丸

文献 D.A. Deshpande et al., ＂Bitter taste receptors on airway smooth muscle bronchodilate by localized calcium signaling and reverse obstruction,＂ Nat Med, 16：1299-304, 2010. Free F1000 Evaluation 发现 马里兰大学医学院的Stephen Liggett和同事们着力于鉴定可以导致哮喘的，与支气管气道肌肉收缩有关的G蛋白偶联受体。他们在呼吸道平滑肌（ASM）细胞中发现了苦味受体，这以前只在舌头上发现，并证明了它们的激活可以导致支气管的松弛。     

心肌d_1-肾上腺素受体激动对豚鼠心室乳头肌的影响

用α-受体激动剂新福林(5.0×10~(-6)mol/L)激动豚鼠心室乳头肌α-受体,观察乳头肌跨膜动作电位和收缩力的变化,并用α_1-受体阻断剂哌唑嗪(5.0×10~(-7)mol/L)和α_2-受体阻断剂育亨宾(5.0×10~(-7)mol/L)来判别何种α-受体亚型参与。实验中,β-受体阻断剂心得安(1.0×10~(-6)mol/L)始终存在。实验结果表明心肌α_1-受体激动使(1) 豚鼠心室乳头肌收缩力增强;(2) 收缩峰时间延长;舒张期不变;(3) 快反应动作电位时程延长;(4) 慢反应动作电位零相最大除极速率增加。提示,心肌α_1-受体激动的电生理和正性变力效应的离子机制可能是促进慢内向离子流,使Ca~(2 )内流增加。     

实验性哮喘时肺的α-受体增加和β-受体减少

近些年来不断报道α-受体和β-受体在哮喘发病中的作用,提出了哮喘发病的β-受体阻断和α-受体功能亢进的假说。最近,P.J.Barnes 等发现实验性哮喘动物肺中α-受体增加,β-受体减少,进一步支持上述假说。实验性哮喘动物模型系用卵蛋白致敏豚鼠后,再用卵蛋白反复攻击所造成,均有喘、咳、呼吸困难、青紫和气道高敏性等症状。取这种豚鼠和正常豚鼠的肺制备匀浆,用放射标记结合分析法测定肺匀浆中的α-受体和β-受体的数量及它们的比例。还测定肺匀浆中腺苷酸环化酶的活性,以确定β-受体对β-受体激动剂的敏感性。结果发现,实验性哮喘动物肺匀浆中α-受体数量为对照动物的两倍(P<0.001),β-受体数量则低于对照动物(P<0.05)。在实验性哮喘动物肺匀浆中,α:β受体结合部位的比例为1:12,在对照动物则为1:30。     

静脉平滑肌上的α-受体宜分类为突触后α_2-受体

大量实验证明,肾上腺素能神经-效应器接点突触前膜和突触后膜上的α-受体性质不同,Langers首先提出,将调节效应器官反应的突触后α-受体命名为α_1-受体,而将突触前膜上调节NA释放的α-受体命名为α_2-受体。一些药物可选择性地激动或阻断突触前、后两种不同的α-受体。例如,甲氧胺、新福林选择性地激动α_1-受体;可乐宁(clonidine)、托马唑啉(tramazoline)选择性地激动α_2-受体。哌唑嗪(prazosin)主要阻断α_1-受体;育亨宾(yohimbine)主要阻断α_2-受体。在大多数血管,NA激活突触后α-受体,使血管平滑肌收缩,并因此使血管收缩。但并非所有血管平滑肌细胞上的α-受体均属同一亚型。多数离体动脉平滑肌对A、甲氧胺、NA新福林等α-激动剂发生收缩反应,但对可乐宁和托马唑啉相     

基于细胞三维培养的气道平滑肌细胞收缩效应检测方法的建立与应用

气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)是引起哮喘患者气道收缩狭窄、呼吸阻力增加的主要效应细胞。ASMCs收缩效应检测是研究哮喘病理生理机制、评估或研发新的支气管舒张药物的重要实验依据。而常用的活体组织张力检测以及单层培养ASMCs显微镜形态观察等方法存在样品取材或测量误差等问题。该研究利用胶原蛋白凝胶构建气道平滑肌细胞的三维立体培养模型,将凝胶与培养孔壁分离,在不同的时间点记录细胞收缩力作用下凝胶面积的变化值,以此反映ASMCs的收缩效应。结果显示,0.1,1,10 mmol/L的乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)刺激后,凝胶面积均显著缩小,随着剂量增加ASMCs的收缩反应增强。提前加入肌球蛋白ATP酶抑制剂BDM(butanedione monoxime),能明显抑制Ach诱导的ASMCs收缩反应,说明该方法的可重复性和准确性好。     

人支气管平滑肌螺旋条的制备

目的：在体外用支气管条标本测定人气管平滑肌功能。方法：外科手术后,用虹膜剪剪出４０×３×２ｍｍ的支气管螺旋条,１、２、３ｄ进行测量。结果：第２ｄ的收缩和松驰反应比第１、第３ｄ增加。结论：第２ｄ的人支气管螺旋条是进行支气管生理研究的理想材料     

滨蒿内酯对哮喘豚鼠气管平滑肌细胞RyR2 mRNA表达影响

研究哮喘豚鼠气管平滑肌细胞Ryanodine受体亚型的变化及滨蒿内酯对其的影响。将动物分为3组:正常组、哮喘组和滨蒿内酯组,采用卵蛋白致敏复制豚鼠哮喘模型,滨蒿内酯组雾化吸入滨蒿内酯。应用RT-PCR鉴定豚鼠气管平滑肌细胞(TSMC)中RyR亚型分布并观察各组豚鼠气管平滑肌细胞RyR2 mRNA表达的变化。豚鼠TSMC表达RyR2和RyR3两个亚型;哮喘时豚鼠TSMC中RyR2 mRNA表达量(以RyR2区带与-βactin区带的密度百分比表示)为47.15%±15.30%,明显低于对照组(77.12%±6.16%)(P<0.01);滨蒿内酯组豚鼠TSMC中RyR2 mRNA量为63.77%±9.09%,较哮喘组增强(P<0.05)。豚鼠TSMC表达RyR2和RyR3两个亚型;哮喘时TSMC RyR2 mRNA表达下调;滨蒿内酯可使哮喘豚鼠TSMC RyR2表达水平得以恢复。     

嘌呤受体

1972年,Burnstock系统地提出了嘌呤能神经的概念后,这一理论引起了广泛重视。大量实验证实了嘌呤能神经和相应受体的存在。对嘌呤受体的分布、分类、作用机制、生理效应、拮抗剂和激动剂等方面也进行了深入研究并取得了较大进展。一、确定嘌呤受体存在的依据六十年代早期,电生理学研究发现:当用单个脉冲短期跨壁刺激豚鼠的结肠带时,其平滑肌细胞产生大的超极化接头电位,并伴有舒张反应。并且,如同时使用阿托品和胍乙啶,这种舒张反应依然存在;但用低浓度的河豚毒素可消除这些反应。表明这种反应是通过非胆     

吸入二氧化硫对鼻腔内血管阻力及气道阻力的急性反应(英文)

人们在吸入含有二氧化硫(SO2)的空气会出现鼻阻塞反应。本研究使用麻醉猪测量SO2对鼻腔血管和气道阻力的影响以及其控制机制。将相同通气量的空气从呼出方向通入两侧鼻腔或直接经支气管入肺,测量鼻腔及支气管的气流压力并计算鼻腔及支气管气流阻力的改变。同时记录体动脉的压力和鼻腔动脉的血流量以计算血管阻力的变化。空气中含有2 ppm SO2时,血压及鼻血管阻力下降但鼻气道及支气管阻力上升。空气中SO2含量上升至8 ppm时,血压、鼻血管阻力和支气管气流阻力均上升,但鼻气道阻力下降。直接鼻腔刺激和经支气管入肺引起的反应相同。单侧鼻腔刺激引出双侧反应。钌红抑制鼻腔刺激反应。两侧迷走交感神经切除抑制肺刺激反应。因此2 ppm SO2引起经受体反射鼻血管扩张令鼻阻塞,而较高浓度SO2引发经受体反射鼻血管收缩令鼻阻塞减轻。短时间暴露(STEL)于2 ppm SO2所引起鼻阻塞及支气管收缩可限制SO2进入肺部,而较高浓度SO2引发鼻阻塞减轻可令总气道阻力下降以对抗支气管收缩产生的肺通气减少。