20周人胎脑cDNA文库的构建

为了研究舰船有害气体、噪声、磁场等特殊环境下人脑特异性基因表达的变化情况 ,构建了一个 2 0周人胎脑cDNA文库 ,实验从胎脑组织中抽提总mRNA后 ,经过一系列酶反应后合成cDNA ,分级分离柱除去小片段后克隆到λgt1 0载体 ,转染宿主菌E .coli.C6 0 0hf1后文库的包装效率为 4 .6× 1 0 6pfu/μg ,cDNA平均插入片段大于 1 .2kbp     

红果人参叶中cDNA文库的构建

以四年生红果人参叶片为材料,提取叶中总RNA合成cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上。采用电穿孔法将重组质粒转化到DH5α中。经文库质量鉴定表明:原始文库滴度为1.008×106pfu·mL-1,扩增后的文库滴度为2.968×109pfu·mL-1,重组率接近100%,插入片段大小在0.5~2kb之间,平均为0.85kb,表明已成功构建了红果人参叶中cDNA文库。     

家蝇cDNA文库的构建

自Ｂｏｍａｎ小组 (Ｓｔｅｉｎｅｒ ,1981)从惜古比天蚕(Ｈｙａｌｏｐｈｏｒａｃｅｃｒｏｐｉａ)中分离、纯化出第一种抗菌肽天蚕素以来 ,人们已在昆虫和其他无脊椎动物中发现了 170多种抗菌肽 (Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇｅｒｅｔａｌ ,1999)。目前 ,人们不仅搞清楚了多数抗菌肽的氨基酸序列、结构和功能特点 ,而且还对一些抗菌肽的基因进行了克隆 (陈留存和王金星 ,1999)。我们以家蝇为材料 ,分离、纯化出了抗菌肽 ,在此基础上 ,构建了经过诱导的家蝇ｃＤＮＡ文库 ,以克隆其基因。1　材料和方法1 1　实验材料家蝇 (Ｍｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａ)…     

大鼠脑cDNA文库的构建

采用简单高效的cDNA合成技术制备Wistar大鼠脑cDNA基因文库,以纯化的poly( A)⁺－RNA为模板,含Not I切点的oligo－（dT）15为引物,在反转录酶的作用下,合成第一股单链cDNA;用E.coli RNase H除去模板RNA,并以E.coli DNA聚合酶Ｉ,E.coli DNA连接酶和T4 DNA聚合酶催化合成cDNA第二条链,即成为双链cDNA;此双股cDNA除0．5μg用于插入pSPORT I载体,转入E.coli DH5a,建成cDNA文库外,其余保存在－20℃,以此cDNA为模板,应用PCR方法,先后克隆了谷氨酸脱羧酶（GAD,1800bp）、神经元特异性烯醇化酶（NSE,1340bp）,甲状腺激素受体（T3－receptor,1230bp）、胆囊收缩素（CCK,345bp）的全编码基因．     

枸杞果实cDNA文库的构建

目的 :通过构建枸杞果实cDNA文库 ,分离类胡萝卜素合成酶基因。方法 :枸杞果实RNA的提取采用改进的异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 ,利用PolyATractmRNAIsolationSystem(Promega公司 )分离mRNA ,然后利用UniversalRibocloneRcDNASynthesisSys tem(Promega公司 )合成双链cDNA ,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头 ,并与λExCell载体连接 ,利用PackageneLambdaDNAPackagingSystem进行包装。结果 :首次构建出滴度为 8 4× 10 4 pfu ml,重组效率为 86 9%的枸杞果实cDNA文库。结论 :构建出枸杞果实cDNA文库 ,为类胡萝卜素合成酶基因的分离奠定了基础     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

菠萝果实cDNA文库的构建

以菠萝幼果为研究材料,采用Creator^TMSMART^TM cDNA Library Construction Kit技术构建菠萝幼果cDNA文库,其文库的库容量为1．01×10^6,重组率为92％,PCR检测表明大多数插入片段均大于1000bp。     

小鼠颌下腺上皮细胞的培养及表皮生长因子的鉴定

体外培养小鼠颌下腺细胞,形态学观察可见有上皮样细胞生长。免疫细胞化学及蛋白质印迹转移分析结果表明,体外培养的颌下腺上皮样细胞可合成并分泌表皮生长因子。     

人巨细胞病毒cDNA文库的构建、鉴定及pp65阳性克隆筛选

为进一步进行人巨细胞病毒 (HCMV)后基因组功能的研究 ,以及为疫苗分子和早期诊断试剂的研制提供有效工具 ,从HCMVAD1 69株感染 96h的HF细胞中提取HCMV的mRNA ,逆转录合成cDNA片段 ,重组入λgt1 1EcoRI酶切位点之间 ,包装蛋白包装 ,构建HCMVAD1 69株基因组cDNA表达文库。结果表明 ,初始HCMVcDNA文库容量为 3 6× 1 0 6,重组率为 96% ;HCMV鼠多克隆抗血清筛选出 1 68个HCMV阳性克隆 ;地高辛标记pp65特异性寡核苷酸探针原位噬斑杂交筛选出 3 4个pp65阳性克隆 ,再经PCR扩增 ,筛选出 2个pp65阳性克隆 ;pp65PCR扩增产物进一步被Southernblotting证实 ;3 端测序比较 ,同源性为 98%。为进一步克隆、表达该基因及其产物功能研究奠定基础     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的cDNA文库构建

根据家蚕性附腺中含有的利它素能诱导野蚕黑卵蜂寄生涂有该利它素的人造卵及能用家蚕卵繁育野蚕黑卵蜂的特性 ,用化蛹 9天的家蚕雌蛹性附腺分泌部的高丰度的mRNA构建了富含利它素基因的cDNA文库。构建成的未扩增文库的滴度为 3.2 9× 10 4 pfu μL ,重组率为 90 .0 5 % ,扩增后的文库总滴度为 1.5 6× 10 7pfu μL。用PCR方法对总文库和随机挑取的噬菌斑进行扩增 ,表明λZiplox载体中已含有大小为 0 .5～ 8.0kb的cDNA插入片段 ,并在 2 .5kb、1.1kb和 0 .75kb处cDNA插入片段相对集中。所有分析结果表明 ,采用特定的发育时期和特定的组织提取的mRNA构建而成的cDNA表达文库具有较高频率的利它素基因片段和合适的滴度 ,定向插入技术并结合λZiplox噬菌体的表达功能 ,使构建的cDNA文库具有表达外源DNA的功能 ,有利于进行利它素基因的免疫筛选。     

CONSTRUCTION OF A cDNA LIBRARY OF HOST RECOGNITION KAIROMONE FOR TELENOMUS THEOPHILAE*

Abstract Based on the kairomone from the accessory gland of female Bombyx mori elicting the parasitoid, Telenomus theophilae, to parasitize artifical beads. A cDNA expression library of enrich kairomone gene was constructed using mRNA‐rich secretory portion of the accessory glands of B. mori at the 9– day‐old of pupa. The titer of the unamplified library was 3.29 times 10⁴ pfu/μL with a recombinant rate of 90.05%, and titer of amplified library was 1.56 times 10⁷ pfd μL. The inserted cDNA fragments of the library ranged from 0.5 to 8.0 kb and concentrated around the 2.5 kb, 1. 1kb, and 0.75kb regions. All of the data suggest that the library has appropriate titer and high frequency kairomone gene fragments by using special developing stage and tissue of B. mori to extract mRNA. Directional cloning and λZiplox expression were help to clone the kairomone gene with immunoscreening.     

蝶兰胚珠的cDNA文库构建及其特异基因表达的研究

以蝶兰(Phalaenopsis“Mt.Kaala”cv SM9108)为材料,分别提取大孢子母细胞时期胚珠和成熟胚珠的PolyA RNA,反转录成cDNA,构建起两个cDNA文库。克隆筛选采用差异杂交法。从上述两个cDNA文库中,各选择一个筛选出的cDNA,对其在植物体不同器官和不同发育时期的胚珠内的表达进行了分析。结果表明该两个cDNA均为胚珠特异,并且分别在胚珠发育的特定时期表达。推测该两个cDNA的表达受胚珠内部的不同因子调控。     

水稻cDNA文库的构建以及100种随机挑取克隆部分结构的分析

以水稻 (Oryza sativa)“广陆矮 4号”黄化苗为材料 ,用 λZAP 为载体构建了 c DNA文库。对随机挑取的 1 0 0个 c DNA进行部分顺序测定后 ,与水稻和其它植物已知的基因结构作同源性比较分析 ,表明1 3%的 c DNA克隆可以确定功能 ,1 2 %的 c DNA克隆与其它植物中未知功能的基因片段有同源性 ,其余75%的克隆则表现出极少相似性或无任何同源性 ,从中可能发现新的基因。结果表明这个 c DNA文库适宜于进行大量顺序分析。由此将会获得更多功能性基因的信息。     

胃溃疡模型大鼠颌下腺的5-HT及其受体与胃溃疡自愈的关系

为观察胃溃疡模型大鼠颌下腺５－ＨＴ及其受体相对含量的变化,探讨二者与胃溃疡自愈的关系。采用免疫组织化学ＡＢＣ法和原位定量测定法。结果显示：胃溃疡模型大鼠颌下腺５－ＨＴ相对含量于手术后１０天已有升高,２０天达到高峰,３０天已显示出下降,分别与盐水对照组的同一时间点的相比较,均有显著性差异（Ｐ值分别小于０．０１）。５－ＨＴＲ的相对含量也呈现出类似的变化。推测颌下腺的５－ＨＴ可能参与了胃溃疡的愈合过程,其受体在颌下腺的含量的增多,提示前者可能对后者的合成与释放起着重要的作用。     

人柠檬酸合成酶cDNA的克隆及其表达谱分析

在动物、植物、微生物细胞中普遍存在的三羧酸循环(TCA循环)是产生ATP的主要途径,它不仅参与糖的分解代谢,也参与蛋白质和脂肪的分解代谢。柠檬酸合成酶在TCA循环中起着关键的调节作用,它通过催化乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合成柠檬酸。本文用基因组信息学方法获得的一个长1636bp的EST重叠群序列,它与猪柠檬酸合成酶cDNA序列高度同源。从这一序列出发,又用PCR方法从人的睾丸组织和骨胳肌组织的cDNA分子库中,分别克隆到一个1492bp的cDNA片段,在其序列中含有一个长1401bp的可读框,该可读框推导的编码蛋白由466个氨基酸组成,它与猪柠檬酸合成酶、鸡柠檬酸合成酶及酵母柠檬酸合成酶的同源度分别达95．9％,92％和60．9％,故认为该cDNA序列可能就是来自人类柠檬酸合成酶基因的转录本。Northern分析表明人类柠檬酸合成酶在心脏和骨胳肌中呈高表达,在脑、肾和胰腺组织中度表达,在小肠和胸腺中未能检出表达,而在其他9种被检测的组织中仅有低表达。