应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量

采用山羊抗人IgG作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为0．512μg／ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准,制作标准曲线,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好,特异性强,可定量测定培养及纯化样品中人源单克隆抗体的含量。     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

用于人乳腺癌病理检测的抗人ARD1单克隆抗体的制备

hARD1蛋白是一个乙酰基转移酶,催化蛋白质N末端的乙酰化。前期的研究发现hARD1的高表达可能作为乳腺癌的一个指标。为了制备在乳腺肿瘤组织中特异识别的抗hARD1的单克隆抗体,将纯化的全长hARD1/Histag融合蛋白(1~235aa)免疫Balb/c小鼠,获得了8个稳定的阳性单克隆细胞株,酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明,所得抗体的轻链均为κ型,重链为3种亚型:IgG1、IgG2a和IgG2b。在不同肿瘤组织样本中进行抗体特异性筛选,获得一个在乳腺肿瘤组织中具有相对特异性的抗hARD1单克隆抗体,为进一步将抗hARD1的单克隆抗体应用于乳腺癌的病理诊断奠定基础,同时也为进一步研究hARD1在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。     

质粒DNA单次脾内注射制备单克隆抗体

探索一种新的快捷有效DNA免疫制备单克隆抗体的方法,辅助实现构建高通量无蛋白纯化体系单克隆抗体制备和筛选。分别通过“重叠PCR”和“无模板PCR”在pVAX1真核载体中分别引入IL-2信号肽、IgG kappa链信号肽构建分泌型真核表达载体,将代表抗原基因的profilin1基因克隆到经改造带有信号肽基因的表达载体上,构建重组质粒pVAX-IL2-prof1和pVAX-Igκ-prof1,单次脾内注射重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠。经过细胞融合、ELISA筛选,获得两株抗profilin1的单克隆抗体。单抗亚型分别为IgM和IgG3。单次脾内质粒DNA免疫便捷有效,是制备单克隆抗体的有效方法。     

质粒DNA单次脾内注射制备单克隆抗体

探索一种新的快捷有效DNA免疫制备单克隆抗体的方法,辅助实现构建高通量无蛋白纯化体系单克隆抗体制备和筛选。分别通过“重叠PCR”和“无模板PCR”在pVAX1真核载体中分别引入IL-2信号肽、IgG kappa链信号肽构建分泌型真核表达载体,将代表抗原基因的profilin 1基因克隆到经改造带有信号肽基因的表达载体上,构建重组质粒pVAX-IL2-prof1和pVAX-Igκ-prof1,单次脾内注射重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠。经过细胞融合、ELISA筛选,获得两株抗profilin 1的单克隆抗体。单抗亚型分别为IgM和IgG3。单次脾内质粒DNA免疫便捷有效,是制备单克隆抗体的有效方法。     

抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶(rUOX)的杂交瘤细胞McAb17和McAb3;采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果:McAb17和McAb3的腹水效价达到1∶512000,纯化后获得纯度大于95%的单抗,抗体亚类(型)分别为IgG1/k型和IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase(商品化rUOX)可发生特异反应。结论:制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3,为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。     

抗传染性犬肝炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备传染性犬肝炎病毒单克隆抗体。方法将用纯化的犬腺病毒1型（CAV-1）免疫的BALB／c小鼠脾细胞与SP2／0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫酶试验（1EA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备完成的单克隆抗体进行生物学鉴定。结果成功得到2株能稳定分泌抗CAV-1的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为1B、2H3,经鉴定其亚型分别为IgG2a和IgG2a,2株均为kappa链。腹水的ELISA效价可达10^7-10^8,IEA效价可达1：2560—1：5120。该单克隆抗体与CPV、CDV、FPV、CCV病毒无交叉反应。结论成功制备了抗CAV-1单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。     

抗 DR5单克隆抗体 ELISA 检测新方法的建立

目的:建立一种灵敏、特异、快速的 ELISA 方法,用猕猴血清中抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体的检测.方法:采用双抗夹心 ELISA 法,用猴血清吸附的羊抗人 IgG 包被96孔酶标板,加入待测样品,用 HRP 标记的猴血清吸附的羊抗人 IgG 进行检测,加底物显色,读取 D450nm值.结果:建立了检测抗 DR5单克隆抗体的 ELISA 方法并进行了确证,方法的线性范围为12.5~800 ng/mL,定量下限为12.5 ng/mL,板内和板间精密度均小15%,准确度为±15%,冻融稳定性和稀释稳定性良好.结论:方法学确证结果表明,本研究建立的抗 DR5单克隆抗体检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导则要求,可用抗 DR5单克隆抗体的检测.     

重组抗CD20单克隆抗体ELISA检测新方法的建立

目的:建立一种检测重组抗CD20单克隆抗体的新的ELISA方法,以便快捷、简便、灵敏地检测生物体液中的重组抗CD20单抗。方法:采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD20单克隆抗体进行定量检测,包被抗体用猴血清吸附的羊抗人IgG,检测抗体用猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP,最后加底物显色剂,终止后在酶标仪450 nm下读数。结果:按照新药临床前药代动力学中方法学确认的要求进行验证,获得了检测重组抗CD20单克隆抗体的高灵敏度和稳定的ELISA方法。结论:该ELISA方法简便、稳定、灵敏度高,可用于重组抗CD20单克隆抗体的检测。     

抗乙型肝炎病毒e抗原和核心抗原双特异性单克隆抗体的建立与应用

用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(内含高滴度的e抗原)免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,获得两株分泌高滴度既抗-HBe又抗-HBc的双特异性杂交瘤细胞系。细胞培养上清液中抗体滴度为100～1000以上;免疫腹水中的抗体滴度为8万至10万以上,均属IgG2a亚类。细胞在实验室连续传代二年多,仍保持高效分泌抗体能力。此单克隆抗体与HBeAg或HBcAg的结合可被抗-HBc或抗-HBc阳性血清所抑制,竞争抑制率在85.9％～96.8％之间。用此单克隆抗体与HBe的β型单克隆抗体和抗HBc的α型单克隆抗体配对,可组装成检测HBeAg/抗-HBe和抗-HBc的诊断试剂,具有重要的应用价值。     

抗丙型肝炎病毒NS3蛋白不同型单抗制备及应用

目的：制备抗丙型肝炎病毒NS3Ⅰ、Ⅱ型单克隆抗体,用于转HCV全长基因细胞免疫组化定位。方法:克隆表达HCV-NS3Ⅰ、Ⅱ型抗原,免疫Balb／C小鼠,通过细胞融合筛选分泌HCV-NS3Ⅰ、Ⅱ的细胞株,制备腹水,纯化IgG。结果：制备出3株抗HCV-NS3Ⅰ、Ⅱ单克隆抗体,有2株为IgG-1型,1株为IgG-2b型,对转HCV全长基因细胞进行免疫组化染色,胞浆为阳性。结论：制备的抗HCV-NS3Ⅰ、Ⅱ单抗具有良好的特异性。     

抗人IgG-Fab(λ型)单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体的鉴定

淋巴细胞杂交瘤技术,已成为生物学、医学领域中十分重要的研究方法。Lowe指出抗人免疫球蛋白(Ig)单克隆抗体(McAb)的建立,不仅为鉴定Ig的类、亚类、型、亚型、亚群和基因型等提供有价值的试剂,而且还可以在决定簇的水平上进一步研究Ig的结构和功能。Lowe等曾对抗K和λ链的McAb性质进行了研究。李伟雄等建立了抗游离λ链的McAb(待发表)。本文对抗人IgG的Fab和抗人IgG的McAb进行了研究和探讨。一、材料和方法 1.抗原动物及免疫用人IgG经木瓜酶断链后提取的Fab片断蛋白作为免疫抗原。动     

人—人杂交瘤:分泌抗链球菌溶血素O单克隆抗体细胞株的建立

用人骨髓瘤细胞株和人脾脏细胞在PEG促进下进行人—人杂交,育选出能分泌抗链球菌溶血素O单克隆抗体杂交瘤S_1—19和S_1—22两株,共传了50多代,历时五个月,单克隆抗体分泌稳定,抗体为IgG型,杂交瘤染色体为68—76条而亲代细胞株仅为43条,证实杂交瘤是成功的。     

“a”决定簇145位点变异的HBsAg单克隆抗体制备及HBV变异株快速检测方法

HBsAg抗原145位突变,可能导致临床上广泛使用的HBsAg诊断试剂出现漏检.通过杂交瘤技术制备出了一种抗该突变体的单克隆抗体,属IgG1亚类(K型,效价为1:9×104)与其他类犁肝炎病毒抗原无交叉反应.采用该单抗与多克隆抗体所建立的AC-ELISA法,对临床上乙型肝炎病毒(HBV)的突变样品进行检测的特异性和敏感性较高.     

天花粉蛋白分子的抗原决定簇研究(英文)

为了研究抗原结构和功能之间的关系,我们用天花粉蛋白作抗原,制备了16株分泌抗天花粉蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,其中包括5株IgE杂交瘤细胞系。用这些单克隆抗体同天花粉蛋白进行抗体竞争结合试验,结果表明:16种单抗之间可产生不同程度的竞争,竞争率从0—100%不等。按照竞争的情况,16种单抗可以分成4个不同的组,即TE 1,1B 1,3A 12,4B 5组,分别识别4个可区分开的抗原决定簇区。值得注意的是TE1组包括了所有5种IgE单克隆抗体(以及另外两种IgG 1单克隆抗体),这一结果提示TE1组单克隆抗体识别的抗原决定簇区可能以某种方式介入了小鼠IgE抗体应答的过程。     

抗 P 物质单克隆抗体的特性研究

观察了细胞株(BTP-1)所分泌的抗 P 物质单克隆抗体与17种 P 物质类似物的交叉反应。该单克隆抗体所针对的是 P 物质的羧基末端,与羧基端的甲硫氨酸残基有较大的关系,而和P 物质类似物的拮抗作用的强弱无相关性。与9种小肽(亮氨酸脑啡肽、甲硫氨酸脑啡肽,内啡肽、皮啡肽、血管紧张素Ⅰ、Ⅱ、缓激肽,催产素、胰高血糖素)均无交叉反应,显示该单克隆抗体有较好的特异性。经免疫组织化学试验,中脑以下部位的脊髓后角Ⅱ层、黑质、三叉神经脊束核、脚间核等末梢纤维和第Ⅱ脑室腹侧灰质、被盖外侧核、中缝核等胞体核周质染成棕色。BTP-1属于大鼠 IgG 型单克隆抗体。描述了微载体大量培养杂交瘤和制备单克隆抗体的技术,并讨论了大量制备的可能性。     

日札幌医大制作抗消化性溃疡原因菌的单克隆抗体

札幌医科大学第一内科教授谷内昭和讲师今井浩三等制作出近年疑为消化性溃疡和慢性胃炎的原因菌的弯曲杆菌(Campylobacter pylori)的小鼠单克隆抗体。6月16～18日,在大阪召开的第16次日本临床免疫学会上发表了。利用这种抗体,今后会很可能非常明确弯曲杆菌和消化性溃疡的因果关系。其结果,合成抗菌剂和抗生     

利用基因工程表达核心抗原转化的E抗原制备抗HBeAg单克隆抗体

采用两种变性剂将大肠杆菌基因工程高效表达的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)转化成为E抗原(HBeAg),其ELISA滴度达1:1000以上,而核心抗原滴度为零。用此抗原免疫小鼠,一次融合即获十四株抗乙型肝炎病毒E抗原的单克隆抗体。细胞培养上清抗体滴度为1:10-1:1000以上,腹水滴度为1:1000-1:100,000以上。十三株IgG、一株IgM。其中十株为抗HBeAg(b)决定簇,四株抗(a)决定簇。它们的敏感性及特异性与日本用血清E抗原制备的单克隆抗体效果完全一致。这是国内外首次应用基因工程表达核心抗原转化E抗原成功 地建立分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株。     

牙龈卟啉杆菌W83单克隆抗体的研制与鉴定

牙龈类杆菌曾是重要的产黑色素类杆菌群菌株,最近重新命名为牙龈卟啉杆菌,该菌为牙周病龈下菌斑中关键性厌氧菌,与成人慢性牙周炎的发生、发展有密切关系。作者用牙龈卟啉杆菌侵袭型菌株W83,作为免疫原,通过免疫小鼠、细胞融合、筛选、克隆化,最后得到一株能够稳定分泌抗牙龈卟啉杆菌W83的单克隆抗体杂交瘤细胞系,经鉴定该单抗特异性良好,可用于临床该菌的检出和生态学研究。     

1组曲霉单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB／c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲霉单抗的杂交瘤细胞株,其中用烟曲霉细胞壁抗原成分免疫获得11株,用分泌抗原免疫获得13株,用孢子免疫获得5株;Ig亚类鉴定,11个克隆株为IgG1亚类,3个克隆株为IgG3,15个克隆株为IgM。免疫荧光法鉴定29株单抗特异性识别烟曲霉细胞壁抗原,与其他曲霉抗原有交叉反应。结论29株单克隆抗体,对于建立侵袭性曲霉感染早期诊断方法、筛选曲霉保护性抗体以及研究抗体保护机制奠定了实验基础。