丙型肝炎病毒核心蛋白结构及功能研究进展

大量研究结果表明丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白是多功能蛋白质,它可能与ＨＣＶ致病（癌）有密切关系。本文简述近年来关于核心蛋白结构与功能的最新进展。并初步探讨了ＨＣＶ核心蛋白可能的致病机制。     

丙型肝炎病毒核心蛋白抑制乙型肝炎病毒转录的分子机理

为研究丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白抑制乙型肝炎病毒 (HBV)表达的分子机理 ,从HCV和HBV共感染中国病人血清中分离了 5个含HCV 5′非编码区 ( 5′NCR)和核心区 (CR)cDNA序列的克隆 .序列比较和系统发育分析显示 :从共感染病例中分离的HCV序列与其它已发表的从单独HCV感染病例中分离的序列没有显著差异 .共转染实验证实采用从其中 1例共感染病人中分离的核心蛋白cDNA基因所表达的核心蛋白 ,可抑制HBV表面抗原 (HBsAg)和HBVe抗原 (HBeAg)的表达 ,缺失突变分析说明HCV核心蛋白的C端疏水区对这种抑制作用是必需的 ,报道基因产物分析进一步说明了HBVC启动子和增强子Ⅱ是HCV核心蛋白的效应靶序列之一 ,而HCV核心蛋白在肝细胞和非肝细胞中均对HBV和其他细胞和病毒的基因的转录起负调节作用 .因此 ,认为HCV核心蛋白是一种多功能的负调节因子 ,与HCV和HBV以及HCV与细胞之间的相互作用密切相关     

丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌中的表达

目的：建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法：应用多聚酶链反应(PCR),以HCV—H株全长cDNA序列为模板,扩增获得核心区基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-C,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达核心蛋白。结果：扩增得到目的基因长度为573bp,构建pBVIL1-C表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的21％,Western—Blot检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论：HCV核心蛋白可在大肠杆菌中获得高表达并具有良好的反应原性。     

应用细菌鞭毛递呈的随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位

设计了利用大扬杆菌鞭毛蛋白递呈的随机十二肽库研究ＨＣＶ核心蛋白Ｂ细胞抗原位的实验程序：１利用大肠杆有达质粒ｐＱＥ－３０有达并纯化ＨＣＶ核心蛋白Ｐ１９;２利用Ｐ１９蛋白亲和层析纯化ＨＣＶ感染者血清的抗ＨＣＶ核心蛋白多克隆抗体;     

重组丙型肝炎病毒核心蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

本文旨在获得纯化丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(HCV-C)及抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C与肝细胞相互作用的分子机制奠定基础。首先以HCV1b亚型HC-J4-91全基因组质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HCV-C基因,构建重组质粒pQE31-HCV-C。融合蛋白经原核表达、纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备抗HCV-C多克隆抗体。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,蛋白免疫印迹(Westernblot)和间接免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果显示,表达HCV-C的原核表达质粒pQE31-HCV-C构建正确,获得相对分子质量约22000的纯化融合蛋白。ELISA检测重组蛋白免疫小鼠的抗血清效价达1:12800。结果显示,自制的抗HCV-C多克隆抗体能特异性识别HCV-C。本研究获得了纯度较好、原核表达的HCV-C,并成功制备了抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C的致病机制提供了有实用价值的研究工具。     

丙型肝炎病毒核心蛋白与慢性感染

丙型肝炎病毒感染后极易造成肝脏组织的慢性化改变,随着对丙型肝炎病毒核心蛋白的深入研究,发现核心蛋白是一种重要的调节蛋白,在病毒慢性感染方面有重要作用。本文就两者之间的关系进行阐述。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子的调控作用

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是HCV病毒粒子核衣壳的组分,同时又是一种多功能蛋白。它能与胞内多种蛋白相互作用,调控NF-κB、AP-1、Sp1、Elk-1、STAT3、ATF-2、NF-AT等多种转录因子,影响一系列基因的表达。核心蛋白在HCV感染的病理发生和慢性化及致癌等过程中起着重要作用。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌和毕赤酵母中表达的比较

为获得丙型肝炎病毒的核心蛋白（Core）,将克隆有Core基因的表达载体pBVIL1-Core转化大肠杆菌HB101,温度诱导表达Core蛋白。同时利用PCR方法以含有丙型肝炎病毒全基因的质粒PBR^TM／HCV为模板扩增Core基因,克隆进表达载体pPICZαA,构建表达载体pPICZαA-Core,转化毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115,在甲醇诱导下表达Core蛋白。Western-blot显示Core蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白量占菌体总蛋白的20％;在酵母培养上清中存在Core蛋白,证明Core蛋白在酵母系统中成功表达。     

猪丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6同源基因的克隆化研究

利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论,应用分子生物学与生物信息学技术和方法。克隆猪丙型肝炎病毒(HCY)核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)的同源基因。首先应用酵母双杂交技术,以表达HCV核心蛋白的表达栽体作为曾饵,对于百万级的肝细胞cDNA文库酵母进行配合、筛选,首先获得人HCBP6的全长鳊码基因。然后应用美国国立生物工程中心(NCBI)建立的核苷酸序列数据库(CenBank)的同源基因的检索,搜索与之同源的来源于猪的表达序列标签(EST)。然后根据基因同泺性的原则,确定猪HCBP6的同源基因。获得了与HCC核心蛋白结合蛋白的36个基因片段,其中之一命名为HCBP6。根据基因同源性搜索,获得了来源于猪的EST基因序列片段。最终确立了猪HCBP6的同源基因。利用不同物种之间基因同泺性的原理、NCBI数据库GenBank同源基因的搜索,获得了猪HCBP6同源基因。生物信息学技术在后基因组时代具有重要地位和作用。     

丙型肝炎病毒蛋白的分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是造成慢性肝炎,肝硬化及肝癌的重要原因之一。目前全球发现约有1亿7千万人口感染HCV。HCV的急性感染通常是没有症状的,但50％～80％的病人会转变成为慢性感染患者,而且大约20％的患者会在20年内转变成为肝硬化。一旦确诊为肝硬化,     

丙型肝炎病毒蛋白的分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒(Hepatitis C viruS,HCV)是造成慢性肝炎,肝硬化及肝癌的重要原因之一.目前全球发现约有1亿7千万人口感染HCV.HCV的急性感染通常是没有症状的,但50%～80%的病人会转变成为慢性感染患者,而且大约20%的患者会在20年内转变成为肝硬化.     

丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组ＮＳ５区Ａ段和部份Ｂ段蛋白。ＮＳ５Ａ蛋白溶于水,可经过ＧＳＴ亲和层析柱纯化;ＮＳ５Ｂ蛋白不溶于水,经ＰＢＳ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析,ＮＳ５Ａ蛋白除在５７ｋＤ左右有条带外,还有不同程度的降解产物;ＮＳ５Ｂ蛋白主要在５８ｋＤ左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取９     

丙型肝炎病毒核心蛋白稳定表达肝癌细胞株的构建及生物学研究

旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究.利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blasticidine抗性筛选,建立稳定表达HCV核心蛋白的肝癌细胞系Huh7-Core.采用RT-PCR、Western blot鉴定Huh7-Core细胞株中核心蛋白的稳定表达并采用MTS、结晶紫试验观察Huh7-Core稳定细胞株的增殖情况.结果显示,成功构建了表达HCV核心蛋白的稳定细胞株Huh7-Core.结晶紫、MTS试验证实Huh7-Core细胞较Huh7-3Flag细胞增殖速度增快,表达HCV核心蛋白的Huh7-Core稳定细胞株构建成功,Core稳定表达后可促进Huh7细胞生长速度.     

丙型肝炎病毒基因组的翻译及其产物的加工

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单正链ＲＮＡ病毒,其５’非编码区（５’ＮＣＲ）是决定病毒蛋白表达的关键区。基因突变与报道基因表达技术研究表明５’ＮＣＲ有一内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）。类似于微小ＲＮＡ病毒属。ＨＣＶＲＮＡ翻译成为一条多蛋白分子,对蛋白酶的裂解加工后形成１０余种结构和非结构蛋白。研究ＨＣＶＲＮＡ的翻译及产物加工,对ＨＣＶ及其抗原表达载体有重要意义。     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因在毕赤酵母中克隆与分析

目的:克隆丙型肝炎病毒核心蛋白基因及其上游DNA序列,为此基因的表达研究作准备。方法:用反转录和PCR方法从HCV的总RNA中扩增得到核心蛋白基因及其上游DNA序列,连接到pMD18-T载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒,测序证明正确后,再将目的基因在毕赤酵母中进行克隆,鉴定。结果:重组质粒转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HCV核心蛋白基因。     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌内的表达及应用

将从中国丙肝病人血清中扩增克隆的丙型肝炎病毒核心蛋白基因（４０８ｂｐ）酶切处理后插入表达载体ｐＪＬＡ５０２内,获得高表达核心蛋白的重组工程菌。将重组菌经４２℃热诱导５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,表达的核心蛋白占菌体蛋白总量的２０％。经分子筛和吸附层析纯化后获得的核心蛋白,ＥＬＩＳＡ检测证实有较好的抗原性和特异性。用表达的核心抗原加用表达的ＮＳ＿３抗原（Ｃ＿３３）装配的抗－ＨＣＶ试剂盒,经用标准血清验证及与国外第二代抗－ＨＣＶ试剂盒比较,证实符合丙肝诊断试剂要求。     

丙型肝炎病毒

<正>1989年,美国Chiron公司在世界上率先克隆了引起非甲非乙型肝炎的丙型肝炎病毒(HCV)的基因片段,并由此开发了C100-3抗体检测系统。1990年,冈本等人发现HCV结构基因中含有5＇非编码区(5＇noncoding region),从而使HCV的基因组成、分子生物学活性及免疫化学方面的抗原决定基等研究迅速进展,从临床及基础研究两方面逐渐搞清楚了其全貌。本文仅简述用PCR法诊断HCV基因组的过程。     

丙型肝炎病毒

本文综述了丙型肝炎病毒的分类学地位,基因组结构,病毒蛋白质,实验室诊断,及传播方式和致病性等内容。强调了丙型肝炎病毒是第一个通过分子生物学发现和鉴定的病毒。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5B的研究进展

已知丙型肝炎病毒非结构蛋白(NS5B)具有RNA依赖的RNA聚合酶的功能,负责病毒基因组的复制。通过体外表达及晶体衍射分析,目前对NS5B的三维结构已有了清晰的描述,对顺B催化该病毒基因组复制的分子机制也有了初步了解;对RNA聚合酶抑制物的研究将为人工设计特异性的抗该病毒药物奠定扎实基础。